夏勤，崔莉，杜秋

(1南京市中醫(yī)院，南京 210001；2江蘇省中醫(yī)藥研究院)

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清涼巴布劑貼敷對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高及大鼠足腫脹的改善作用

夏勤1，崔莉2，杜秋1

(1南京市中醫(yī)院，南京 210001；2江蘇省中醫(yī)藥研究院)

摘要：目的觀察清涼巴布劑對(duì)醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高及角叉菜致大鼠足腫脹的影響，并探討其可能機(jī)制。方法 60只小鼠隨機(jī)分為6組各10只，a、b、c組分別貼敷2.727、1.364、0.682 mg/cm2清涼巴布劑，d、f組涂抹等量空白基質(zhì)，e組涂抹扶他林乳劑0.3 mg/cm2。給藥后a、b、c、d、e組制備腹腔毛細(xì)血管通透性增高模型，f組不制備，測(cè)定腹腔清洗液OD值。60只SD大鼠隨機(jī)分為6組各10只，A、B、C組分別貼敷2.727、1.364、0.682 mg/cm2清涼巴布劑，D、F組涂抹等量空白基質(zhì)，E組涂抹扶他林乳劑0.3 mg/cm2。給藥后A、B、C、D、E組制備足腫脹模型，F(xiàn)組不制備，計(jì)算足腫脹度及胸腺質(zhì)量指數(shù)、脾臟質(zhì)量指數(shù)。結(jié)果與d組比較，a、b、c、e組腹腔清洗液OD值降低；與F組比較，D組胸腺質(zhì)量指數(shù)、脾臟質(zhì)量指數(shù)增加，IL-6水平升高，IL-10水平降低；與D組比較，A、B、E組足腫脹度、胸腺質(zhì)量指數(shù)、脾臟質(zhì)量指數(shù)減小，IL-6水平降低，IL-10水平升高；與D組比較，C組足腫脹度、脾臟質(zhì)量指數(shù)減小，IL-10水平升高；P均<0.05。結(jié)論 清涼巴布劑能抑制醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高及角叉菜膠致大鼠足腫脹，可能與足組織IL-6水平降低、IL-10水平升高有關(guān)。

關(guān)鍵詞：清涼巴布劑；毛細(xì)血管通透性；足腫脹；白細(xì)胞介素6；白細(xì)胞介素10

痔病是一種常見(jiàn)的多發(fā)病，雖手術(shù)可以幫助治療，但創(chuàng)口劇痛、愈合緩慢、易被感染等弊端限制了手術(shù)的應(yīng)用[1]。清涼膏由血竭、乳香、沒(méi)藥、青黛、冰片等組成，具有清熱消腫、活血定痛作用，對(duì)炎性及血栓外痔、術(shù)后肛門(mén)水腫、腫痛型痔病有顯著療效，但其存在油性大、載藥量小、使用不方便等缺點(diǎn)。我院將清涼膏與巴布劑結(jié)合，研制出清涼膏巴布劑，其具有保濕性及透氣性好、載藥量大、易于吸收及清洗等優(yōu)點(diǎn)[2]。本研究觀察了清涼巴布劑對(duì)醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高及角叉菜膠致大鼠足腫脹的影響，并探討其可能機(jī)制。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物清潔級(jí)昆明種小鼠60只，雌雄各半，體質(zhì)量(20±2)g；SD大鼠60只，雌雄各半，體質(zhì)量(200±20)g；均由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2藥品、試劑及儀器雙氯芬酸二乙胺乳膠劑(扶他林，北京諾華制藥有限公司)；清涼巴布劑(南京中醫(yī)藥大學(xué)藥劑教研室提供)；角叉菜膠(上海貝基生物科技有限公司)；二甲苯(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司)；IL-6、IL-8試劑盒(南京建成生物工程研究所提供)?？烧{(diào)高速勻漿器(FSH-2，金壇市恒豐儀器廠)；全自動(dòng)酶標(biāo)儀(MK3，上海富眾生物科技發(fā)展有限公司)。

1.3小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高模型制備及清涼巴布劑貼敷參照文獻(xiàn)[3,4]方法。取清潔級(jí)小鼠60只，隨機(jī)分為a、b、c、d、e、f組各10只。實(shí)驗(yàn)前小鼠禁食12 h，腹部脫毛后用藥。a、b、c組分別貼敷2.727、1.364、0.682 mg/cm2清涼巴布劑(含生藥量)，d組與f組小鼠涂抹等量空白基質(zhì)，e組涂抹扶他林乳劑0.3 mg/cm2，各組均連續(xù)給藥7 d。最后1次給藥1 h后，經(jīng)尾靜注1%伊文思藍(lán)生理鹽水溶液0.02 mL/g，然后經(jīng)腹腔注射0.7%醋酸生理鹽水溶液0.2 mL/只(f組除外)，0.5 h后脫頸椎處死小鼠，打開(kāi)腹腔并用生理鹽水清洗。

1.4小鼠腹腔清洗液OD值測(cè)定取小鼠腹腔清洗液10 mL，離心后取上清液，于波長(zhǎng)590 nm處測(cè)定OD值。

1.5大鼠足腫脹模型制備及清涼巴布劑貼敷參照文獻(xiàn)[5]方法。取SD大鼠60只，隨機(jī)分為A、B、C、D、E、F組各10只。實(shí)驗(yàn)前大鼠禁食12 h。A、B、C組分別貼敷2.727、1.364、0.682 mg/cm2清涼巴布劑(含生藥量)，D、F組大鼠涂抹等量空白基質(zhì)，E組涂抹扶他林乳劑0.3 mg/cm2。給藥1 h后，每鼠右足踝關(guān)節(jié)以下皮內(nèi)注射新鮮配制的1%角叉菜膠0.1 mL致炎(F組除外)。

1.6大鼠足腫脹度、胸腺質(zhì)量指數(shù)、脾臟質(zhì)量指數(shù)測(cè)算及足組織IL-6、IL-10檢測(cè)致炎后2 h測(cè)量大鼠右后足容積值，并計(jì)算足腫脹度，足腫脹度=致炎后足容積-致炎前足容積。后處死大鼠，取足標(biāo)本，制作足組織勻漿，采用ELISA法檢測(cè)組織勻漿IL-6、IL-10。另取大鼠胸腺和脾臟稱(chēng)取質(zhì)量，分別計(jì)算胸腺質(zhì)量指數(shù)、脾臟質(zhì)量指數(shù)，胸腺質(zhì)量指數(shù)=胸腺質(zhì)量/大鼠體質(zhì)量，脾臟質(zhì)量指數(shù)=脾臟質(zhì)量/大鼠體質(zhì)量。

2結(jié)果

2.1小鼠腹腔清洗液OD值比較a、b、c、d、e、f組腹腔清洗液OD值分別為0.423±0.028、0.469±0.036、0.501±0.043、0.635±0.031、0.414±0.037、0.392±0.025，a、b、c、e組分別與d組比較，P均<0.05。

2.2大鼠足腫脹度、胸腺質(zhì)量指數(shù)、脾臟質(zhì)量指數(shù)及足組織IL-6、IL-10比較足腫脹度、胸腺質(zhì)量指數(shù)、脾臟質(zhì)量指數(shù)及足組織IL-6、IL-10表達(dá)比較見(jiàn)表1。

表1　各組足腫脹度、胸腺質(zhì)量指數(shù)、脾臟質(zhì)量指數(shù)及足組織IL-6、IL-10表達(dá)比較±s)

注：與F組比較，*P<0.05，△P<0.01；與D組比較，#P<0.05，▲P<0.01。 3討論

清涼巴布劑處方來(lái)源于國(guó)家級(jí)名老中醫(yī)丁澤民教授，由血竭、乳香、沒(méi)藥、青黛、冰片等中藥組成。血竭的化學(xué)成分包括血竭素、血竭紅素、黃色血竭樹(shù)脂烴、去甲基血竭紅素、去甲基血竭素等，具有斂瘡生肌、行淤止痛的功效[6,7]。乳香的主要成分為揮發(fā)油、樹(shù)脂及樹(shù)膠，具有活血定痛、消腫生肌的功效[8]?，F(xiàn)代藥理研究表明，乳香具有鎮(zhèn)痛、抗炎、抗腫瘤、抗胃潰瘍、抗氧化等作用[9～11]。沒(méi)藥為沒(méi)藥屬植物樹(shù)皮滲出的膠狀樹(shù)脂，功效類(lèi)似于乳香，目前已鑒定其有300多個(gè)化學(xué)成分，主要包括萜類(lèi)、黃酮、甾體等[12]。文獻(xiàn)[13]報(bào)道，青黛具有清熱解毒、涼血定驚的功效。冰片不僅具有抗病原微生物、抗炎鎮(zhèn)痛等藥理作用，而且可促進(jìn)藥物經(jīng)生理性屏障到達(dá)作用部位[14~16]。本研究顯示，a、b、c組腹腔清洗液OD值較d組減小，A、B、C組足腫脹度較D組減輕，提示清涼巴布劑可抑制醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高及角叉菜膠致大鼠足腫脹。吳文君等[17]認(rèn)為，復(fù)方兒茶止瀉霜可下調(diào)胸腺、脾臟指數(shù)，證明其具有良好的抗炎活性。本研究顯示，A、B組胸腺指數(shù)及A、B、C組脾臟指數(shù)均較D組降低，提示清涼巴布劑具有抗炎作用。

IL-6是一種多功能炎性細(xì)胞因子，炎性細(xì)胞因子在炎癥反應(yīng)過(guò)程中發(fā)揮重要的作用[18,19]。IL-10是一種免疫調(diào)節(jié)因子，可以抑制單核細(xì)胞功能及T淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的活化和效應(yīng)作用。IL-10最重要的功能是限制和終止炎癥反應(yīng)[20,21]，其調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的機(jī)制是與淋巴細(xì)胞、抗原遞呈細(xì)胞作用，從而調(diào)節(jié)Th1、Th2細(xì)胞因子之間的平衡[22]。IL-10能夠有效抑制IL-1、IL-6、IL-12、TNF-α等主要的促炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生，在調(diào)節(jié)胃腸道的細(xì)胞動(dòng)態(tài)平衡上扮演著重要角色，從而發(fā)揮抗炎作用[23,24]。本研究顯示，A、B組IL-6水平較D組降低，A、B、C組IL-10水平較D組升高。說(shuō)明清涼巴布劑可通過(guò)調(diào)節(jié)大鼠足組織中抗炎癥細(xì)胞因子水平發(fā)揮抗炎作用。

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(收稿日期:2015-09-03)

中圖分類(lèi)號(hào)：R9

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1002-266X(2016)03-0034-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.03.012

基金項(xiàng)目：江蘇省中醫(yī)藥管理局基金資助項(xiàng)目(LZ11112)。