藺 莉，吳紅彥，石曉峰，王麗娟，范 彬

1 甘肅中醫(yī)藥大學(xué)，甘肅 蘭州 730000；2 甘肅省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院

祖師麻凝膠膏劑的鎮(zhèn)痛抗炎藥效學(xué)評(píng)價(jià)*

藺 莉1，2，吳紅彥1△，石曉峰1，2，王麗娟1，范 彬2

1 甘肅中醫(yī)藥大學(xué)，甘肅 蘭州 730000；2 甘肅省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院

目的：對(duì)祖師麻凝膠膏劑的鎮(zhèn)痛抗炎藥效學(xué)進(jìn)行評(píng)價(jià)。方法：采用扭體法和熱板法觀察祖師麻凝膠膏劑的鎮(zhèn)痛作用，采用耳廓腫脹法觀察祖師麻凝膠膏劑的抗炎作用。結(jié)果：與基質(zhì)對(duì)照組比較，祖師麻凝膠膏劑小、中、大劑量組均可提高給藥后不同時(shí)間痛閾值(P＜0.05)，祖師麻凝膠膏劑中、大劑量作用強(qiáng)于祖師麻膏藥組(P＜0.05)；與基質(zhì)對(duì)照組比較，祖師麻凝膠膏劑小、中、大劑量可延長(zhǎng)給藥后疼痛潛伏期并減少扭體反應(yīng)次數(shù)(P＜0.05)，祖師麻凝膠膏劑大劑量組扭體反應(yīng)次數(shù)少于祖師麻膏藥組(P＜0.05)；與基質(zhì)對(duì)照組比較，祖師麻凝膠膏劑中、大劑量可減輕小鼠耳廓腫脹度(P＜0.05)，祖師麻凝膠膏劑大劑量腫脹抑制率高于師麻膏藥(P＜0.05)。祖師麻凝膠膏劑各劑量組與扶他林組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論：祖師麻凝膠膏劑具有顯著的鎮(zhèn)痛和抗炎作用。

祖師麻凝膠膏劑；鎮(zhèn)痛作用；抗炎作用

祖師麻(Cortex Daphnes)系民間常用中草藥，始載于《陜西中草藥》［1］，為瑞香科(Thymelaeaceae)植物黃瑞香Daphne giraldii Nitsche、甘肅瑞香(陜甘瑞香、唐古特瑞香)Daphne tangutica Maxim及凹葉瑞香Daphne retusa Hemsl的干燥根皮與莖皮［2］，主產(chǎn)于甘肅、陜西、云南、四川、西藏、青海等地，具有祛風(fēng)除濕、活血止痛之功效，被民間廣泛用于治療疼痛、跌打損傷、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和支氣管炎等癥［1，3］。目前，以祖師麻為主藥的外用上市制劑有祖師麻膏藥、祖師麻關(guān)節(jié)止痛膏、祖師麻風(fēng)濕膏3個(gè)品種［4-5］，劑型均較落后。其中祖師麻膏藥由祖師麻提取精制的浸膏粉和武威膏藥組成，屬于傳統(tǒng)的黑膏藥，具有祛風(fēng)除濕、活血止痛的功能，用于風(fēng)寒濕痹、瘀血痹阻證［4］。考慮到祖師麻膏藥保存使用不方便、透皮吸收效果差、對(duì)皮膚刺激性大、生產(chǎn)工藝自動(dòng)化水平低等缺陷，本課題組采用現(xiàn)代透皮吸收新技術(shù)，應(yīng)用高分子親水基質(zhì)，對(duì)其進(jìn)行二次開發(fā)，研制成祖師麻凝膠膏劑。為了評(píng)價(jià)其藥效，本實(shí)驗(yàn)以祖師麻膏藥和扶他林為對(duì)照藥物，研究祖師麻凝膠膏劑對(duì)動(dòng)物疼痛和炎癥模型的作用，以期為其開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑和藥品 祖師麻凝膠膏劑(甘肅省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院藥物研究所，批號(hào)：20141015)。祖師麻膏藥(甘肅泰康制藥有限責(zé)任公司，批號(hào)：20110812)；扶他林(北京諾華制藥有限公司，批號(hào)：X4392)；硫化鈉(分析純，天津市百世化工有限公司，批號(hào)：20110920)；二甲苯(北京化工廠，批號(hào)：20121010)；醋酸(天津市北聯(lián)精細(xì)化學(xué)品開發(fā)有限公司，批號(hào)：20131020)。

1.2 動(dòng)物 昆明種小鼠，SPF級(jí)，體質(zhì)量(20±2)g，由甘肅中醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)許可證號(hào)：SCXK(甘)2011-0001。動(dòng)物飼養(yǎng)于標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境：溫度(22±1)℃；相對(duì)濕度(60±5)%；人工光照；12小時(shí)明暗周期；標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料喂養(yǎng)。

1.3 儀器 FA2004型電子天平(上海上天精密儀器有限公司)；RB-200智能熱板儀(成都泰盟科技有限公司)。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 熱板實(shí)驗(yàn)［6］將雌性健康昆明種小鼠放置于預(yù)熱至(55±0.5)℃的熱板上，自小鼠后足接觸熱板開始計(jì)時(shí)，至小鼠初次舔后足的時(shí)間為基礎(chǔ)痛閾值。挑選基礎(chǔ)痛閾在5～30秒的小鼠60只用于實(shí)驗(yàn)。按上法測(cè)定2次，間隔30分鐘，取平均值為給藥前痛閾值。按給藥前痛閾值分層將小鼠隨機(jī)分為6組：空白對(duì)照組(不含祖師麻的相同基質(zhì)貼劑)，扶他林組(1 g/kg)，祖師麻膏藥組(3.4 g/kg)，祖師麻凝膠膏劑高(7.2 g/kg)、中(3.6 g/kg)、低(1.8 g/kg)3個(gè)劑量組，每組10只。于實(shí)驗(yàn)前24小時(shí)用8%硫化鈉將小鼠背部脫毛，脫毛面積約4 cm2。在脫毛部位分別給予受試藥物和對(duì)照藥物，基質(zhì)對(duì)照組敷貼面積為1.5 cm2，扶他林組給藥0.2 g/次，祖師麻膏藥組敷貼面積為1.5 cm2，祖師麻凝膠膏劑小、中、大3個(gè)劑量組分別敷貼面積為1、1.5、2 cm2，剪取相應(yīng)大小的藥片敷貼于動(dòng)物背部脫毛區(qū)進(jìn)行給藥，然后再用膠布將藥物固定，保持藥物和動(dòng)物皮膚直接接觸6小時(shí)，1次/d，連續(xù)3天。于末次給藥后按前法測(cè)定60、90、120分鐘痛閾值。比較給藥前后痛閾值的變化，計(jì)算痛閾提高百分率。

1.4.2 醋酸扭體實(shí)驗(yàn)［7］選取健康昆明種小鼠60只，雌雄各半。分組及給藥方法同前。于末次給藥后l小時(shí)，各組均腹腔注射0.6%醋酸溶液10 mL/kg，并立即觀察記錄小鼠扭體反應(yīng)出現(xiàn)時(shí)間及15分鐘內(nèi)扭體反應(yīng)次數(shù)，然后觀察每只小鼠的疼痛反應(yīng)。以腹部?jī)?nèi)凹，軀干與后腿伸張，臀部高抬為指標(biāo)，觀察記錄15分鐘內(nèi)扭體出現(xiàn)時(shí)間(潛伏期)與扭體次數(shù)。

1.4.3 二甲苯致小鼠耳廓腫脹實(shí)驗(yàn)［7］選取健康昆明種小鼠60只，雌雄各半。分組及給藥方法同前。末次給藥2小時(shí)后，各實(shí)驗(yàn)組每只小鼠的右耳前后兩面涂100%二甲苯(0.02 mL/只)致耳廓腫脹，左耳廓不作處理。60分鐘后脫頸椎處死小鼠，用直徑9 mm的打孔器將雙耳同部位等面積切下，用電子天平稱重。以左右兩耳質(zhì)量差為腫脹度，計(jì)算腫脹抑制率。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)量資料以表示，采用單因素方差分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 祖師麻凝膠膏劑對(duì)小鼠熱板法致痛的影響 與空白對(duì)照組比較，祖師麻凝膠膏劑低、中、高劑量可提高給藥后小鼠不同時(shí)間段痛閾值(P＜0.05)；祖師麻凝膠膏劑中、高劑量的痛閾提高率均高于祖師麻膏藥組，部分時(shí)間段差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；祖師麻凝膠膏劑痛閾提高率與扶他林組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表1。

表1 祖師麻凝膠膏劑對(duì)小鼠熱板法致痛的影響

表1 祖師麻凝膠膏劑對(duì)小鼠熱板法致痛的影響

注：與空白對(duì)照組比較，*表示P＜0.05，#表示P＜0.01；與祖師麻膏藥組比較，△表示P＜0.05(下同)。

組別 只數(shù) 劑量/(g·kg-1) 給藥后不同時(shí)間的痛閾提高率/% 60 min 90 min 120 min空白對(duì)照組 10 0 20.50±5.23 27.10±4.86 26.19±5.87扶他林組 10 1.0 36.40±4.11*39.20±5.11#38.50±5.76*祖師麻膏藥組 10 3.4 33.40±3.30*37.31±2.75*36.35±3.06*10 1.8 32.61±5.37*39.10±4.48*33.00±4.55祖師麻凝膠膏劑組 10 3.6 35.55±6.27*44.49±3.21#△39.50±5.16#10 7.2 39.71±6.73#46.90±7.64#△42.52±5.07*△

2.2 祖師麻凝膠膏劑對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響 與空白對(duì)照組比較，祖師麻凝膠膏劑低、中、高3個(gè)劑量均可延長(zhǎng)給藥后疼痛潛伏期并減少扭體反應(yīng)次數(shù)(P＜0.05)；祖師麻凝膠膏劑高劑量組扭體反應(yīng)次數(shù)少于祖師麻膏藥組(P＜0.05)；雖然祖師麻凝膠膏劑中、高劑量組較扶他林組疼痛潛伏期延長(zhǎng)，高劑量組扭體次數(shù)較少，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表2。

2.3 祖師麻凝膠膏劑對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響 與空白對(duì)照組比較，祖師麻凝膠膏劑中、高劑量可明顯減輕小鼠耳廓腫脹度(P＜0.05)；腫脹抑制率祖師麻凝膠膏劑中劑量組與祖師麻膏藥組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，祖師麻凝膠膏劑高劑量高于祖師麻膏藥，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；祖師麻凝膠膏劑高劑量組與扶他林組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表3。

表2 祖師麻凝膠膏劑對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響

表2 祖師麻凝膠膏劑對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響

組別 只數(shù) 劑量/(g·kg-1) 疼痛潛伏期/min 扭體反應(yīng)/次空白對(duì)照組 10 0 4.64±0.72 25.40±5.79扶他林組 10 1.0 7.83±1.07*12.10±3.59#祖師麻膏藥組 10 3.4 5.03±1.02 17.90±1.28*10 1.8 6.97±0.47*15.30±3.86*祖師麻凝膠膏劑組 10 3.6 9.62±1.23#14.00±4.22*10 7.2 9.03±1.63#10.50±2.27#△

表3 祖師麻凝膠膏劑對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響

表3 祖師麻凝膠膏劑對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響

組別 只數(shù) 劑量/(g·kg-1) 腫脹度/mg 腫脹抑制率/%空白對(duì)照組 10 0 9.93±1.79 -扶他林組 10 1.0 4.67±1.13#41.23±6.31祖師麻膏藥組 10 3.4 6.03±1.38*34.23±2.72 10 1.8 7.02±2.41 26.34±4.29祖師麻凝膠膏劑組 10 3.6 5.43±1.14*38.21±4.61 10 7.2 4.12±0.46#44.89±3.64△

3 討論

以祖師麻為主藥的外用制劑主要涉及膏藥、凝膠膏劑、噴霧劑、醑劑［4-5］。祖師麻凝膠膏劑［8-9］是由祖師麻、當(dāng)歸、香附、赤芍、冰片等24味中藥經(jīng)提取加工制成的外用貼劑。

凝膠膏劑是一種新型水凝膠型透皮給藥載體，具有對(duì)于藥物分子適用范圍廣即水溶性與脂溶性藥物均適用、載藥量大、膏體柔軟、無(wú)刺激無(wú)過(guò)敏、藥物透皮效率高等獨(dú)特優(yōu)勢(shì)［10］；將祖師麻膏藥實(shí)施二次開發(fā)研制成祖師麻凝膠膏劑，既克服了傳統(tǒng)膏藥的缺陷，又容易實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，有利于產(chǎn)業(yè)升級(jí)。

本研究通過(guò)對(duì)祖師麻凝膠膏劑與祖師麻膏藥和扶他林的鎮(zhèn)痛抗炎作用的比對(duì)研究發(fā)現(xiàn)，祖師麻凝膠膏劑有顯著的鎮(zhèn)痛和抗炎作用，具有良好的開發(fā)前景，值得進(jìn)一步研究。

［1］ 國(guó)家中醫(yī)藥管理局.中華本草：第5卷［M］.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999：407.

［2］ 張薇，蘇娟，扈曉佳，等.中藥祖師麻的三種基源植物的化學(xué)及藥理活性［J］.中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2007，38(3)：233-238.

［3］ 于明，張?jiān)?，王明時(shí).祖師麻化學(xué)成分的研究［J］.中草藥通訊，1976，7(10)：13-17.

［4］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1998：231-233.

［5］ 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.國(guó)家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編(中成藥地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)部分)：骨科分冊(cè)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：415-418.

［6］ 李儀奎.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法［M］.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2006：241-242.

［7］ 徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：882-913.

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［9］ 謝雪虎，申永政，趙正保.正交設(shè)計(jì)法優(yōu)選祖師麻巴布劑的基質(zhì)處方［J］.中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2010，7(34)：52-53.

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Pharmacodynamics Assessment on Analgesic Function and Anti-inflammatary Effects of ZuShiMa Cataplasm

LIN Li1,2,WU Hongyan1△,SHI Xiaofeng1,2,WANG Lijuan1,FAN Bin2
1 Gansu University of Traditional Chinese Medicine,Lanzhou 730000,China; 2 Gansu Provincial Academy of Medical Science

Objective: To evaluate the analgesic function and anti-inflammation effects of ZuShiMa cataplasm. Methods: Analgesic function of ZuShiMa cataplasm was observed by adopting writhing test and hot-plate test, anti-inflammation of ZuShiMa cataplasm was observed by using ear swelling. Results: Compared with the matrix control group, low, moderate and high doses of ZuShiMa cataplasm can increase pain thresholds at different times after medication(P＜0.05), the function of moderate and high doses of ZuShiMa cataplasm were higher than ZuShiMa plaster(P＜0.05); compared with the matrix control group, low, moderate and high doses of ZuShiMa cataplasm can prolong pain latent period after medication and reduce the number of writhing response(P＜0.05), the number of writhing response in high doses of ZuShiMa cataplasm group was lower than that ZuShiMa plaster(P＜0.05); compared with the matrix control group, moderate and high doses of ZuShiMa cataplasm can relieve ear swelling of mice(P＜0.05), the swelling inhibiting rate of high doses of ZuShiMa cataplasm was higher than that ZuShiMa plaster(P＜0.05). ZuShiMa cataplasm of different doses groups compared with Voltaren group, there were no statistical differences(P＞0.05). Conclusion: ZuShiMa cataplasm shows significant analgesic and anti-inflammation function.

ZuShiMa cataplasm; analgesic function; anti-inflammation function

R285.5

A

1004-6852(2016)12-0020-03

2016-07-25

2014年甘肅省中醫(yī)藥管理局科研立項(xiàng)課題(編號(hào)GZK-2014-19)；2013年蘭州市第三批科技計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)2013-3-39)。

藺莉(1980—)，女，碩士學(xué)位，主治醫(yī)師。研究方向：方劑作用機(jī)理及藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究。

△通訊作者：吳紅彥(1963—)，男，博士研究生導(dǎo)師，教授。研究方向：方劑作用機(jī)理及藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究。