何淑貞，蒲育棟，曹金如，陳美玲，蘇煥厚，鄧漢釗，莫麗芳

(東莞市第三人民醫(yī)院產(chǎn)科暨產(chǎn)前診斷中心，廣東 東莞 523326)

217對(duì)不良孕產(chǎn)史夫婦細(xì)胞遺傳學(xué)分析

何淑貞，蒲育棟，曹金如，陳美玲，蘇煥厚，鄧漢釗，莫麗芳

(東莞市第三人民醫(yī)院產(chǎn)科暨產(chǎn)前診斷中心，廣東 東莞 523326)

目的 探討不良孕產(chǎn)史與外周血染色體核型之間的關(guān)系，為遺傳咨詢提供依據(jù)。方法 采集2013年1月至2015年11月來(lái)我院就診的217對(duì)不良孕產(chǎn)史患者的外周血，分別進(jìn)行外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)、制做玻片和G顯帶后核型分析。結(jié)果 217對(duì)不良孕產(chǎn)史夫婦中共發(fā)現(xiàn)染色體異常的核型9例，異常染色體核型檢出率為2.07%，多態(tài)性核型55例，檢出率為12.67%。結(jié)論 染色體異常是造成患者發(fā)生不良孕產(chǎn)史的主要原因之一，因此應(yīng)對(duì)存在不良孕產(chǎn)史的夫婦常規(guī)開(kāi)展細(xì)胞遺傳學(xué)檢查及適時(shí)的遺傳咨詢。

核型分析；不良孕產(chǎn)史；多態(tài)性

優(yōu)生遺傳咨詢門(mén)診主要對(duì)象是具有不良孕產(chǎn)史的患者，咨詢的主要原因包括自然流產(chǎn)、死胎、死產(chǎn)和胎兒發(fā)育畸形等。造成上述現(xiàn)象的原因很多，除了夫婦雙方受到外界環(huán)境因素的影響及感染因素、孕婦自身的解剖結(jié)構(gòu)異常等因素外，染色體異常是一個(gè)主要的原因。為了更好的對(duì)不良孕產(chǎn)史與染色體核型異常之間的關(guān)系進(jìn)行分析，筆者對(duì)217對(duì)不良孕產(chǎn)史夫婦的染色體核型分析結(jié)果進(jìn)行了系統(tǒng)的總結(jié)，以便為進(jìn)一步做好患者的遺傳咨詢，探討不良孕產(chǎn)史與染色體核型異常的相關(guān)性提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年1月至2015年11月來(lái)我院產(chǎn)前診斷中心和生殖中心進(jìn)行遺傳咨詢及臨床相關(guān)檢查的夫婦217對(duì)，其不良孕產(chǎn)史涉及自然流產(chǎn)、死胎、生育先天缺陷兒等，經(jīng)婦科和男科常規(guī)檢查排除解剖性結(jié)構(gòu)異常?；颊吣挲g20～45歲，平均(30.08±4.68)歲。

1.2 染色體核型分析 無(wú)菌條件下采用肝素鈉抗凝管分別抽取夫婦雙方靜脈血3～5 mL，然后用兩個(gè)不同廠家的外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液(廣州拜迪和達(dá)暉生物有限公司)進(jìn)行淋巴細(xì)胞培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)70 h后加入20 μg/mL秋水仙素50 μL繼續(xù)培養(yǎng)1.5～2 h，常規(guī)收獲并制片、G顯帶進(jìn)行處理。顯微鏡下計(jì)數(shù)20個(gè)核型，經(jīng)國(guó)聯(lián)在線染色體核型分析系統(tǒng)詳細(xì)分析3～5個(gè)核型。嵌合體則需要加倍計(jì)數(shù)核型。按照《人類細(xì)胞學(xué)國(guó)際命名體制(ISCN2013)》的相關(guān)規(guī)范對(duì)核型結(jié)果進(jìn)行命名。

1.3 數(shù)據(jù)分析 所有數(shù)據(jù)錄入EXCEL表格，數(shù)據(jù)采用頻數(shù)和率表示。

2 結(jié)果

2.1 異常核型分析 217對(duì)不良孕產(chǎn)史夫婦當(dāng)中共檢出9例染色體異常的核型，異常染色體核型檢出率為2.07%。其中包括4例羅伯遜易位，4例平衡易位，1例倒位。具體核型描述見(jiàn)表1。

2.2 多態(tài)性分析 217對(duì)不良孕產(chǎn)史夫婦中共檢出55例多態(tài)性核型，檢出率為12.67%。其中次縊痕增長(zhǎng)10例，D/G組隨體變異37例，9號(hào)染色體倒位7例，Y染色體增大1例。具體核型描述見(jiàn)表2。

表1 異常核型分布情況

表2 多態(tài)性核型分布情況

3 討 論

本研究結(jié)果顯示，在217對(duì)具有不良孕產(chǎn)史的夫婦當(dāng)中，異常染色體核型檢出率為2.07%，高于余元?jiǎng)椎萚1]報(bào)道的我國(guó)一般人群異常染色體核型0.5%～1%的檢出率。

本次研究發(fā)現(xiàn)，染色體易位的檢出率為1.84%，其中平衡易位和羅伯遜易位各為4例，且不良孕產(chǎn)史均表現(xiàn)為配偶自然流產(chǎn)或復(fù)發(fā)性流產(chǎn)。易位主要包括平衡易位和羅伯遜易位。平衡易位理論上沒(méi)有遺傳物質(zhì)的增減，只是引起片段的位置發(fā)生改變，由于易位染色體不能與同源染色體進(jìn)行正常配對(duì)，從而形成不平衡的配子，產(chǎn)生不平衡配子的概率(16/18)遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于產(chǎn)生正常(1/18)的配子和平衡易位(1/18)的配子的概率，從而在受精后形成三體性或單體性的合子而造成流產(chǎn)[2]。羅伯遜易位是指由兩條近端染色體(D/D、D/G、G/G)通過(guò)著絲粒融合成一條衍生的染色體，包括非同源羅伯遜易位和同源羅伯遜易位。非同源羅伯遜易位攜帶者的后代只有1/4的機(jī)會(huì)，1/4的機(jī)會(huì)是攜帶者，而成為三體型或單體型的機(jī)會(huì)則占了一半。同源羅伯遜易位攜帶者可以產(chǎn)生兩種類型的不平衡配子，從而造成患者不能夠生育正常的后代[3]。

染色體倒位分為臂間倒位和臂內(nèi)倒位。臂間倒位攜帶者從遺傳學(xué)角度分析可以形成4種不同的配子，包括1種正常的染色體，1種倒位攜帶者，其余兩種是帶有部分重復(fù)或部分缺失的重排染色體[4-5]。從理論上講，非平衡的片段越小，胎兒存活的幾率就越大。若倒位的片段越短，則倒位兩側(cè)重復(fù)和缺失的部分越大，患者表現(xiàn)為月經(jīng)期延長(zhǎng)、流產(chǎn)、死胎或不孕不育的比例將會(huì)越高[6]。本研究發(fā)現(xiàn)1號(hào)染色體臂間倒位1例，臨床表現(xiàn)為復(fù)發(fā)性流產(chǎn)。

染色體多態(tài)性表現(xiàn)為同源染色體結(jié)構(gòu)和染色體的著色強(qiáng)度的細(xì)小差別。通常指D/G組染色體隨體區(qū)的變異、1、9、16號(hào)染色體著絲粒和次縊痕增加或缺失等，傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為上述異染色質(zhì)區(qū)域不會(huì)引起表型效應(yīng)也無(wú)功能。但是，目前越來(lái)越多的研究表明，染色體多態(tài)性與不良孕產(chǎn)史之間可能存在著一定的關(guān)聯(lián)[7-9]。

次縊痕異染色質(zhì)區(qū)是容易發(fā)生斷裂的地方，次縊痕的增加或缺失可能影響細(xì)胞的減數(shù)分裂，從而形成不平衡的配子而導(dǎo)致流產(chǎn)。隨體的增大或減小可能導(dǎo)致染色體不分離或者發(fā)生重排的概率增加，從而在早期引起死胎或者流產(chǎn)等生殖異常[10]。本研究發(fā)現(xiàn)37例存在隨體柄增長(zhǎng)，10例存在次縊痕增長(zhǎng)，其臨床表現(xiàn)主要是自然流產(chǎn)、復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、畸胎生育史等。

inv(9)被認(rèn)為是一種多態(tài)性，它不涉及遺傳物質(zhì)的丟失和產(chǎn)生相應(yīng)的遺傳效應(yīng)。但近年來(lái)也有報(bào)道認(rèn)為，inv(9)在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、不育癥、出生缺陷的人群中發(fā)生率明顯的增高[11]。9號(hào)染色體pter-q12片段上存在松弛素(RLX)基因，該基因在生殖調(diào)節(jié)中發(fā)揮著重要的作用，它不僅能夠影響女性的卵泡發(fā)育和子宮內(nèi)膜的分化，還對(duì)男性的精子運(yùn)動(dòng)和穿卵能力有一定的影響。9號(hào)染色體臂間倒位，使其發(fā)生位置效應(yīng)導(dǎo)致攜帶者RLX作用減弱從而引起不孕不育。本研究發(fā)現(xiàn)inv(9)患者7例，占總受檢人群的1.61%，略高于羅小金等[3]報(bào)道的1.20%。

近年來(lái)越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)，Y染色體異質(zhì)性與不良孕產(chǎn)史之間有一定的相關(guān)性[3，9-10]。研究發(fā)現(xiàn)Yqh+具有一定的遺傳效應(yīng)，且與流產(chǎn)、智力低下、無(wú)精子癥、畸形兒等有關(guān)。大Y可能是由于異染色質(zhì)區(qū)域DNA序列的高度重復(fù)，導(dǎo)致在早期細(xì)胞分裂的時(shí)候發(fā)生異常，從而影響胚胎的正常發(fā)育而導(dǎo)致流產(chǎn)。

綜上所述，不良孕產(chǎn)史與染色體核型異常之間有著密切的聯(lián)系，因此對(duì)于有不良孕產(chǎn)史的夫婦雙方應(yīng)進(jìn)行外周血淋巴細(xì)胞染色體檢查，結(jié)合其他檢測(cè)指標(biāo)和臨床指征進(jìn)行綜合的分析，從而指導(dǎo)他們進(jìn)一步做好遺傳咨詢及產(chǎn)前診斷，為預(yù)防出生缺陷，提高出生人口素質(zhì)服務(wù)。

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Cytogenetic analysis of 217 couples with adverse pregnancy history.

HE Shu-zhen,PU Yu-dong,CAO Jin-ru,CHEN Mei-ling,SU Huan-hou,DENG Han-zhao,MO Li-fang.Obstetrics and Prenatal Diagnosis Center,the Third People's Hospital of Dongguan,Dongguan 523326,Guangdong,CHINA

Objective To investigate the relationship between abnormal pregnancy and peripheral blood karyotype,and provide the basis for genetic counseling.Methods The peripheral blood of 217 couples with adverse pregnancy history were collected in our hospital from January 2013 to November 2015.Then the peripheral blood lymphocytes were cultured,and karyotype analysis of G banding was carried out.Results Among 217 couples,9 cases were found with abnormal karyotype(with the detection rate of 2.07%),and 55 cases were found with polymorphic karyotype(with the detection rate of 12.67%).Conclusion Chromosomal abnormality is an important reason that leads to adverse pregnancy history.Therefore,the couples with adverse pregnancy history should receive routine prenatal cytogenetic examination and consultation to prevent birth defects,and improve the quality of the birth service.

Karyotype analysis;Adverse pregnancy history;Polymorphism

R394.2

A

1003—6350（2016）15—2542—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.15.047

2016-01-21)

莫麗芳。E-mail：478974155@qq.com