賴潔瑩，郝麗萍，宋思宇

(珠海市第二人民醫(yī)院消化內(nèi)科，廣東珠海519000)

雙歧三聯(lián)活菌膠囊治療潰瘍性結(jié)腸炎的療效及其對CD4 +CD25 +調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和IL-10 的影響

賴潔瑩，郝麗萍，宋思宇

(珠海市第二人民醫(yī)院消化內(nèi)科，廣東珠海519000)

目的探討雙歧三聯(lián)活菌膠囊輔助治療潰瘍性結(jié)腸炎(UC)的臨床療效及其對CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和IL-10的影響。方法選取潰瘍性結(jié)腸炎患者87例，采用隨機(jī)數(shù)表法分為觀察組45例和對照組42例。對照組給予抗生素及5-氨基水楊酸制劑奧沙拉嗪鈉膠囊進(jìn)行常規(guī)對癥治療，觀察組在常規(guī)對癥治療基礎(chǔ)上加用雙歧三聯(lián)活菌膠囊治療。比較兩組患者治療前后的結(jié)腸炎癥評分、CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和IL-10變化及臨床療效。結(jié)果治療后觀察組的總有效率為86.67%，明顯高于對照組的69.05%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；治療前兩組結(jié)腸癥狀評分比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，治療后觀察組結(jié)腸癥狀評分明顯低于對照組，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；治療前兩組CD4+CD25+調(diào)節(jié)T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞比例及IL-10水平值比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，治療后觀察組CD4+CD25+調(diào)節(jié)T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞比例及IL-10水平均明顯高于對照組，差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。結(jié)論歧乳桿菌三聯(lián)活菌膠囊輔助治療UC患者療效確切，且CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例及IL-10水平均有明顯升高，在改善患者腸道內(nèi)微生物平衡中具有顯著作用，值得推廣應(yīng)用。

雙歧三聯(lián)活菌膠囊；潰瘍性結(jié)腸炎；調(diào)節(jié)性T細(xì)胞；影響

潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative colitis，UC)屬炎性腸病之一，病變局限于大腸黏膜及黏膜下層，乙狀結(jié)腸、直腸是病發(fā)主要部位。該病病程漫長，且復(fù)發(fā)率搞，不易根治[1]。調(diào)查顯示，近年來UC發(fā)病率逐年上升且多發(fā)于20～30歲人群[2]。UC患者腸道中存在菌群失調(diào)，臨床治療的關(guān)鍵在于為機(jī)體正常菌群提供良好的內(nèi)微生態(tài)環(huán)境，阻止致病病菌、病毒侵入，進(jìn)而逐步減輕或改善患者腸道炎癥[3]。目前，微生態(tài)制劑在潰瘍性結(jié)腸炎的治療作用及其機(jī)制已倍受醫(yī)療界廣泛關(guān)注和重視。臨床研究[4]指出，雙歧三聯(lián)活菌膠囊由長型雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、糞腸球菌3種細(xì)菌組成，在改善UC患者腸道內(nèi)微生物平衡具有顯著的效果。基于此，近年來我院在UC患者治療中應(yīng)用雙歧三聯(lián)活菌膠囊進(jìn)行治療，并取得了顯著的療效，現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料收集2012年6月至2014年10月期間我院收治的87例UC患者作為研究對象。所有患者均結(jié)合內(nèi)鏡、病理組織學(xué)檢查及臨床表現(xiàn)確診，且符合《中國炎癥性腸病診斷治療規(guī)范的共識意見》[5]中潰瘍性結(jié)腸炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)；同時排除感染或其他非感染性結(jié)腸炎等患者。87例UC患者中男性41例，女性46例；年齡21～65歲，平均(42.84±3.21)歲；病程0.4～8.9年，平均(1.43±0.83)年；根據(jù)D'Haens等[6]改良的嚴(yán)重程度分型標(biāo)準(zhǔn)，對UC患者病情進(jìn)行評估，其中輕度28例，重度59例。在患者及其家屬知情同意并簽署《知情同意書》下，采用隨機(jī)數(shù)表法將所有患者隨機(jī)分為觀察組45例和對照組42例。觀察組中男性18例，女性27例；年齡21～64歲，平均(43.09±2.78)歲；病程0.4～8.6年，平均(1.45±0.79)年；病情輕度13例，重度32例。對照組中男性23例，女性19例；年齡22～65歲，平均(42.28±2.63)歲；病程0.5～8.9年，平均(1.43±0.66)年；病情輕度15例，重度27例。兩組患者的性別、年齡、病程、病情程度等一般資料比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法(1)對照組：給予常規(guī)對癥治療，選用抗生素及5-氨基水楊酸制劑奧沙拉嗪鈉膠囊(浙江眾益藥業(yè)有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H20010061，生產(chǎn)批號：20120218，規(guī)格：0.25 g)溫水口服，1.0 g/次，每天一次。連續(xù)治療6個月。(2)觀察組：在常規(guī)對癥治療基礎(chǔ)上，加用微生物制劑雙歧乳桿菌三聯(lián)活菌膠囊(晉城海斯制藥有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字S19993065，生產(chǎn)批號：20120919，規(guī)格：210mg)溫水口服，2.0 g/次，2次/d。連續(xù)治療6個月。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 結(jié)腸炎癥評分治療前后均在患者病變處取活檢6塊，由兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理學(xué)專家讀片，取3個高倍鏡視野觀察指標(biāo)的平均值作為最終結(jié)果：0級為正常，計(jì)0分；1級表現(xiàn)為上皮及黏膜下出現(xiàn)輕微的炎性滲出、水腫、片狀黏膜糜爛及毛細(xì)血管擴(kuò)張，計(jì)1分；當(dāng)標(biāo)本1級特征出現(xiàn)超過50%為2級，計(jì)2分；3級表現(xiàn)為潰瘍深達(dá)黏膜肌層或黏膜下層并伴以中性粒細(xì)胞為主的滲出，計(jì)3分；當(dāng)標(biāo)本3級特征超過50%為4級，計(jì)4分。

1.3.2 外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的檢測采用密度梯度離心法分離外周血單個核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cell，PBMC)，離心后觀察組PBMC加入2 μl抗人CD4-FITC和CD25-APC，對照組加入APC標(biāo)記的鼠抗人IgG-1和FITC標(biāo)記的鼠抗人IgG-1各20 μl；避光處孵育30 min；去除未結(jié)合的抗體，將加入破膜固定劑孵育1 h，用磷酸鹽緩沖液(PBS)清洗2次，后用200 μl PBS溶液重懸，利用流式細(xì)胞測定儀測定PBMC中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的比例。

1.3.3 血清IL-10的檢測所有患者取清晨空腹肘靜脈血5 ml，置于-20℃冰箱內(nèi)待測，采用ELISA法測量血清IL-10含量，(試劑盒購于美國BD公司；IL-10單克隆抗體購于美國Santacruz公司)，本研究所有操作嚴(yán)格按照儀器說明書或試劑盒說明書進(jìn)行。

1.4 療效判斷標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)文獻(xiàn)[7]并結(jié)合治療后患者臨床癥狀改善及內(nèi)鏡檢查情況擬定：(1)治愈：患者臨床癥狀完全消失，內(nèi)鏡檢查結(jié)果顯示腸黏膜恢復(fù)正常；(2)有效：患者臨床癥狀基本消失，胃鏡檢查結(jié)果顯示部分腸黏膜基本恢復(fù)正常；(3)無效：患者臨床癥狀及內(nèi)鏡檢查均無改善甚至有加重現(xiàn)象。總有效率=治愈率+有效率。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床療效比較經(jīng)治療，兩組患者病情均有明顯好轉(zhuǎn)，觀察組總有效率為86.67%，明顯高于對照組的69.05%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.951，P＜0.05)，見表1。

表1 兩組患者的臨床療效比較[例(%)]

2.2 治療前后結(jié)腸炎癥評分比較治療前兩組患者的結(jié)腸炎癥評分比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。治療后，兩組結(jié)腸炎癥癥狀均有明顯改善(P＜0.05)，且觀察組的改善明顯優(yōu)于對照組，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，見表2。

表2 治療前后兩組結(jié)腸炎癥評分比較（±s，分）

表2 治療前后兩組結(jié)腸炎癥評分比較（±s，分）

組別治療前治療后t值P值觀察組(n=45)對照組(n=42) t值P值2.76±0.39 2.65±0.42 1.267＞0.05 0.79±0.21 2.34±0.41 22.411＜0.01 29.035 3.480＜0.01＜0.05

2.3 治療前后血清CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和IL-10值比較治療前兩組患者的血清CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的百分比及IL-10水平比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；治療后兩組患者的上述指標(biāo)均有明顯升高(P＜0.05)，且觀察組的升高更加顯著與對照組比較差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，見表3。

表3 治療前后兩組患者的血清CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和IL-10值比較(±s)

表3 治療前后兩組患者的血清CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和IL-10值比較(±s)

注：與治療前比較，aP＜0.01，bP＜0.05。

組別CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例(%) IL-10(ng/L)治療前治療后治療前治療后觀察組(n=45)對照組(n=42) t值P值5.54±0.86 5.73±0.91 1.001＞0.05 9.63±0.92a6.88±0.65a15.998＜0.01 15.34±1.09 14.99±1.78 1.114＞0.05 18.73±1.47a16.01±1.56b8.383＜0.01

3 討論

UC屬慢性炎性腸病，發(fā)病機(jī)制至今尚未明確，臨床主要表現(xiàn)為該病患者主要伴有腹瀉、腹痛及黏液濃血便等臨床癥狀，且具有病程長、易反復(fù)等特征，長期影響患者健康及生活質(zhì)量。研究發(fā)現(xiàn)UC病發(fā)可能與感染、免疫機(jī)制、遺傳及環(huán)境因素等多種因素密切相關(guān)，尤其是腸道黏膜免疫系統(tǒng)異常[8]。研究顯示，因UC病變累及結(jié)、直腸黏膜及黏膜下層，久治不愈易引發(fā)腸穿孔、炎性息肉及癌變發(fā)生[9]。

奧沙拉嗪鈉膠囊由兩分子的5-ASA偶合而成，是新型5-ASA衍生物，可抑制引起炎癥的前列腺素的合成及增強(qiáng)細(xì)胞膜通透性，在改善UC患者病情具有一定效果。但一旦停止服用患者病情則易反復(fù)，而長期服藥情況下易增強(qiáng)患者耐藥性、并發(fā)軟便及腹瀉等并發(fā)癥，療效不穩(wěn)定。由于UC患者存在免疫異?，F(xiàn)象，而微生態(tài)制劑對機(jī)體的免疫功能有一定的調(diào)節(jié)作用，因此微生態(tài)制劑對UC的療效可能與患者免疫系統(tǒng)功能相關(guān)[10]。既往報道，CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞具有免疫抑制性和免疫無能性兩大功能特征，其機(jī)制是通過抑制自身T細(xì)胞的免疫反應(yīng)，降低T細(xì)胞活性，促進(jìn)抑制性細(xì)胞因子的活化，如IL-10、TGF-β1等，在自身免疫疾病的發(fā)生中起到重要的作用[11]。目前，微生態(tài)制劑在潰瘍性結(jié)腸炎的治療作用及其機(jī)制已倍受醫(yī)療界廣泛關(guān)注和重視。雙歧三聯(lián)活菌膠囊是由長型雙歧桿菌、保加利亞乳桿菌及嗜熱鏈球菌猿3種細(xì)菌組成，能夠促進(jìn)患者腸道正常菌群的繁殖，有利于維持腸內(nèi)微生態(tài)平衡，阻止致病菌及病毒入侵，進(jìn)而緩解腸道炎癥反應(yīng)。

本研究中，觀察組即在常規(guī)對癥治療基礎(chǔ)上加用雙歧三聯(lián)活菌膠囊進(jìn)行輔助治療，從臨床療效來看，該組患者總有效率高達(dá)86.67%，明顯高于對照組(69.05%)(P＜0.05)。提示：雙歧三聯(lián)活菌膠囊治療UC療效確切。同時，治療后該組患者結(jié)腸炎癥評分較治療前明顯降低(P＜0.05)，且顯著低于對照組(P＜0.01)。提示：雙歧三聯(lián)活菌膠囊能循序漸進(jìn)緩解UC患者臨床癥狀，進(jìn)一步證實(shí)了其改善UC患者病情中效果。此外，治療后觀察組CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的比例及IL-10水平均出現(xiàn)明顯升高(P＜0.05)，且顯著高于對照組(P＜0.05)。表明：微生物制劑雙歧乳桿菌三聯(lián)活菌膠囊可改善UC患者腸道菌群，提高CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的比例，恢復(fù)UC患者IL-10水平，控制腸道炎癥反應(yīng)，對維持機(jī)體正常的免疫機(jī)制具有重要的作用。分析原因：CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在機(jī)體內(nèi)的變化與腸道菌群存在相關(guān)[12]，主要表現(xiàn)為以下兩方面：其一，該細(xì)胞的產(chǎn)生可能與腸道長時間處于正常菌群下外源性抗原誘導(dǎo)相關(guān)；其二，腸道菌群可抑制樹突狀細(xì)胞的成熟，促進(jìn)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的增殖與發(fā)育，對正常菌群產(chǎn)生免疫耐受。因此，機(jī)體內(nèi)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例變化課提示機(jī)體內(nèi)菌群出現(xiàn)失調(diào)[13]。IL-10是具有抑制巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞作用的生物活性物質(zhì)，具有控制腸道炎癥的作用，微生態(tài)制劑在治療UC患者腸道黏膜免疫紊亂過程中，機(jī)體IL-10的分泌增加，使血清及黏膜中的IL-10升高，進(jìn)一步控制腸道炎癥，這可能是微生態(tài)制劑在治療UC的作用機(jī)制之一[14]。若血清CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的比例及IL-10水平均有升高，則表明機(jī)體內(nèi)腸道菌群協(xié)調(diào)，腸道炎癥控制效果也較佳[15]。觀察組用藥后CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的比例及IL-10水平均有升高，腸道嚴(yán)重改善及控制效果明顯較佳。

綜上所述，微生物制劑雙歧乳桿菌三聯(lián)活菌膠囊對UC具有一定輔助治療效果，其作用機(jī)制可能與能夠改善腸道菌群，抑制腸道有害菌及條件致病菌生長有關(guān)。此外，CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及IL-10參與UC的發(fā)生發(fā)展。

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Clinical efficacy of bifidobacteria triple viable capsule and its effects on the levels of CD4+CD25+regulatory Tcells and IL-10 in patients with ulcerative colitis.

LAI Jie-ying,HAO Li-ping,SONG Si-yu.Department of Gastroenterology,the Second Municipal People's Hospital,Zhuhai 519000,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo investigate the clinical efficacy of bifidobacteria triple viable capsule and its effects on the levels of CD4+CD25+regulatory T cells and IL-10 in patients with ulcerative colitis(UC).MethodsEighty-seven patients with UC were randomly divided into observation group(45 cases)and control group(42 cases).The control group applied antibiotics and 5-amino salicylic acid for symptomatic treatment,and the observation group was treated with bifidobacteria triple viable capsule based on the control group.The colitis score,CD4+CD25+regulatory T cells and IL-10 changes before and after treatment were compared between the two groups.ResultsThe total effective rate of the observation group was 86.67%,significantly higher than 69.05%of the control group(P＜0.05).The colitis scores had no statistically significant difference between the two groups before treatment(P＞0.05),but the scores in the observation group were significantly lower than those in the control group after treatment(P＜0.01).The ratio of CD4+CD25+regulatory T cells to the total CD4+T cells and IL-10 levels had no statistically significant difference between the two groups before treatment(P＞0.05),but they were significantly higher in the observation group than the control group after treatment(P＜0.01).ConclusionBifidobacteria triple viable capsule has significant clinical efficacy in the treatment of UC.It can significantly increase the ratio of CD4+CD25+regulatory T cells to the total CD4+T cells and IL-10 levels and improve the intestinal microbial balance,which is thus worthy of application and popularization.

Bifidobacteria triple viable capsule;Ulcerative colitis(UC);Regulatory T cells;Influence

R574.62

A

1003—6350（2016）01—0040—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.01.015

2015-02-10)

賴潔瑩。E-mail：laijieyingcandy@126.com