陳啟煌鄧偉曹驥蔡政民葛蓮英

作者單位：530021 南寧1廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院；2廣西醫(yī)科大學(xué)研究生院

流行病學(xué)調(diào)查

廣西貴港市肝癌篩查及HBV基因型分布現(xiàn)況調(diào)查

陳啟煌1，2鄧偉1曹驥1蔡政民1葛蓮英1

作者單位：530021 南寧1廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院；2廣西醫(yī)科大學(xué)研究生院

目的探討廣西貴港市防癌篩查對象的乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染狀況及HBV基因型的分布特征。方法分析貴港市3個(gè)城區(qū)接受肝癌早診早治篩查的30～59歲共67.75萬居民的基本情況，根據(jù)HBsAg陽性篩查肝癌高危人群（HBsAg陽性人群），從中按地區(qū)以分層抽樣的方法選取1 989例高危對象，進(jìn)行HBV DNA定量檢測，以選取HBV DNA病毒拷貝數(shù)大于檢出限（1×103）的HBsAg攜帶者，采用PCR-RFLP進(jìn)行HBV基因分型。結(jié)果篩查人群中HBsAg陽性率為11.99%，其中男性HBsAg陽性率高于女性（P＜0.01），不同年齡組HBsAg陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），HBsAg陽性率隨年齡的增長呈下降趨勢。在肝癌高危人群中，HBV DNA病毒拷貝數(shù)≥1×103755例，其中HBV A基因型6例（0.79%）、B基因型337例（44.64%）、C基因型293例（38.81%）、D基因型18例（2.39%）、UT基因型101例（13.37%），B和C基因型在男女性中的分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；各年齡組間HBV基因型的分布差異亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論廣西貴港市3個(gè)城區(qū)肝癌早診早治篩查人群的HBV感染率較高，HBV基因型以B和C基因型為主，肝癌早診率較低，需進(jìn)一步完善肝癌早診早治技術(shù)方案和管理模式，提高篩查和早診早治效果。

肝腫瘤；乙型肝炎病毒；基因型；篩查

肝癌是我國常見的惡性腫瘤之一，廣西肝癌的發(fā)病率位居全部腫瘤的第二位［1］，早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療的意義重大。乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染是肝癌發(fā)生的危險(xiǎn)因素之一，全球約有2.4億HBV慢性感染者［2］，我國乙型肝炎表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）攜帶率為7.18%［3］。HBV感染者疾病進(jìn)展與HBV復(fù)制水平、HBV基因型等因素密切相關(guān)。為了解廣西貴港市參加肝癌早診早治篩查人群的HBV感染率、HBV復(fù)制水平及基因型分布情況，2014年本課題組展開相關(guān)調(diào)查，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.1 調(diào)查對象

按《中國癌癥篩查及早診早治技術(shù)方案》（肝癌部分）技術(shù)要求［4］，篩查人群來自廣西貴港市3個(gè)城區(qū)（港南區(qū)、港北區(qū)、覃塘區(qū)）居民，年齡30～59歲。篩查對象均簽署知情同意書，現(xiàn)場建立人口檔案。根據(jù)HBsAg陽性篩查出肝癌高危人群（HBsAg陽性人群），從中按地區(qū)以分層抽樣的方法選取1 989例高危對象，檢測其血清HBV DNA復(fù)制水平。為保證PCR擴(kuò)增效率，選取HBV DNA病毒拷貝數(shù)大于檢出限（1×103）的HBsAg攜帶者，進(jìn)一步進(jìn)行HBV基因分型。

1.2 血清HBV DNA含量檢測

采用PCR-熒光探針法（乙型肝炎病毒核酸定量測定試劑盒購自中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司）檢測HBV DNA含量，檢測步驟參照試劑說明書。取200 μL血清樣本，加入450 μL和4 μL的內(nèi)標(biāo)溶液，振蕩混勻15 s，10 000 r/min離心5 s，100℃恒溫處理10 min， 12 000 r/min離心5 min，最后進(jìn)行PCR擴(kuò)增。檢測的下限值為100 IU/mL。

1.3 血清HBV DNA的提取、擴(kuò)增和PCR-RFLP

取患者200 μL血清提取HBV DNA（QIAGEN公司QIAamp MinElute Virus Spin Kit），操作步驟按照試劑說明書進(jìn)行。采用普通PCR擴(kuò)增HBV前S區(qū)基因，引物：P1（5'-TCAC-CATATTCTTGGGAACAAGA-3'，nt 2823-2845）；P2（5'-TTCCTGAACTGGAGCCACCA-3'，nt 80-61）。反應(yīng)條件：95℃5min；94℃60s，58℃45s，72℃60 s，40個(gè)循環(huán)；72℃10 min。用限制性內(nèi)切酶Ava2和Dpn2（購自Thermo Scientific公司）對PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行平行酶切，酶切后的產(chǎn)物經(jīng)3.0%瓊脂糖凝膠電泳后鑒定。具體步驟參見文獻(xiàn)［5］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料采用百分率表示，各組資料間兩兩比較采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 廣西貴港市肝癌早診早治篩查基本情況

貴港市港南區(qū)、港北區(qū)、覃塘區(qū)3個(gè)城區(qū)30～59歲戶籍人口數(shù)為67.75萬人，實(shí)際參加篩查的人數(shù)為150 124人，其中男性71 081人，占47.35%，平均年齡（44.49±8.20）歲；女性79 043人，占52.65%，平均年齡（45.38±7.97）歲，采血檢測任務(wù)完成率為23.92%，篩查人群基本情況見表1。調(diào)查結(jié)果顯示，共18 005例居民HBsAg陽性，即本次調(diào)查的肝癌高危人群，其中AFP陽性414例，陽性率為2.30%。篩查共發(fā)現(xiàn)58例肝癌患者，其中早期肝癌為13例，早期診斷率為22.41%。58例肝癌篩查患者中，56例接受了治療，治療率為96.55%，結(jié)果見表2。

表1 廣西貴港市肝癌早診早治篩查人群基本情況

2.2 HBsAg陽性率及其性別、年齡和地區(qū)分布

廣西貴港市參加肝癌早診早治篩查的150 124人中，HBsAg陽性者18 005人，陽性率為11.99%，其中男性陽性率為13.91%（9 888/71 081），女性陽性率為10.27%（8 117/79 045），兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=470.26，P＜0.01）。30～39歲、40～49歲和50～59歲年齡組HBsAg陽性率分別為15.72%、11.70%和9.13%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=939.14，P＜0.01）。港北區(qū)、港南區(qū)、覃塘區(qū)HBsAg陽性率分別為12.48%（4 659/37 338）、13.07%（4 136/31 642）和11.35%（9 210/ 81 144），差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=74.94，P＜0.01）。

2.3 HBV感染者DNA復(fù)制水平分析

18 005例肝癌高危人群中，隨機(jī)抽取1 989份標(biāo)本進(jìn)行HBV DNA定量檢測。其中男性1 063例（53.44%），女性926例（46.56%）；30～39歲、40～49歲、50～59歲年齡組分別為653例、791例、534例；HBVDNA病毒拷貝數(shù)＜1×1031 234例（62.04%），HBV DNA病毒拷貝數(shù)≥1×103755例（37.96%）。755例HBV DNA病毒拷貝數(shù)≥1×103的無臨床癥狀HBsAg攜帶者中，男性427例（56.56%），女性328例（43.44%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.74，P＜0.05）；755例樣本中30～39歲年齡組255例，40～49歲年齡組293例，50～59歲年齡組207例，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.49，P＞0.05）。

2.4 HBV基因型分布的情況

755例HBV DNA病毒拷貝數(shù)≥1×103的HBsAg攜帶者中，HBV A基因型6例（0.79%）、B基因型337例（44.64%）、C基因型293例（38.81%）、D基因型18例（2.39%）、UT基因型101例（13.37%），提示貴港市基因型可能以B和C基因型為主。進(jìn)一步分析HBV B和C基因型，發(fā)現(xiàn)男性B、C基因型分別有185例、152例，女性B、C基因型分別有174例、119例，二者比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。B基因型在30～39歲、40～49歲、50～59歲年齡組中分別有111例、133例、93例，C基因型分別有112例、106例、75例，各年齡組HBV基因型分布差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。HBV各基因型的PCR產(chǎn)物經(jīng)內(nèi)切酶Ava2和Dpn2酶切后的電泳圖譜見圖1。

表2 廣西貴港市肝癌早診早治篩查人群基本情況

圖1 HBV各基因型的電泳圖譜

3 討論

慢性乙型病毒性肝炎是嚴(yán)重危害人類健康的傳染性疾病。據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)道，全球約20億人曾感染HBV，其中2.4億人為慢性HBV感染者［2］。HBV感染被公認(rèn)為原發(fā)性肝癌的主要病因，全球約45%的肝癌由HBV引起［3］。2006年全國乙型肝炎血清流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，我國一般人群HBsAg攜帶率為7.18%［3］，其中廣西為8.8%［6］。本調(diào)查結(jié)果顯示，廣西貴港市參加肝癌早診早治篩查的150 124人中，HBsAg陽性者18 005人，陽性率為11.99%，顯著高于上述報(bào)道的全國HBsAg陽性率結(jié)果。在各年齡段HBsAg陽性率分布方面，楊進(jìn)業(yè)等［7］1992年調(diào)查結(jié)果顯示，廣西人群HBsAg陽性率在7～9歲人群中達(dá)到高峰。而本次調(diào)查結(jié)果顯示，在30～59歲人群中，HBsAg陽性率隨年齡增大而降低，30～39歲年齡段的陽性率最高。原因可能是1992年乙型肝炎疫苗納入兒童計(jì)劃免疫管理后，兒童的HBsAg陽性率明顯下降［8］，但1992年前出生的人群由于沒有或極少接種乙型肝炎疫苗，未建立有效的免疫屏障，導(dǎo)致感染乙型肝炎病毒的機(jī)會(huì)增大，所以成人人群的HBsAg陽性率仍維持在較高水平。

在不同性別HBsAg陽性率分布中，本次調(diào)查結(jié)果顯示，男性陽性率為13.91%，女性為10.27%，男性比女性高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與國內(nèi)的其他報(bào)道一致［6］，與肝癌發(fā)病率男性比女性高的規(guī)律相符［9］。此外，本次調(diào)查中，港南區(qū)、港北區(qū)的HBsAg陽性率明顯高于覃塘區(qū)，提示不同地區(qū)HBV感染的情況亦不同。

HBV DNA定量檢測主要用于判斷慢性HBV感染的病毒復(fù)制水平，以監(jiān)測乙型肝炎病毒感染病情發(fā)展情況，亦可用于抗病毒治療適應(yīng)證的選擇及其療效判斷［3］。本調(diào)查結(jié)果顯示，HBV DNA病毒拷貝數(shù)≥1×103的人群占37.96%。根據(jù)最新的慢性乙型肝炎防治指南推薦，HBV DNA病毒拷貝數(shù)≥1×104的患者需接受抗病毒治療，1×103≤病毒拷貝數(shù)＜1×104的人群應(yīng)持續(xù)監(jiān)測肝功能，并定期復(fù)查HBV DNA。

有研究顯示早期確診的小肝癌接受治療后5年生存率明顯高于中晚期肝癌［10］。本調(diào)查結(jié)果顯示肝癌早診率為22.41%，遠(yuǎn)低于啟東地區(qū)（70.31%）［11］和中山市（66.7%）［12］。分析可能有以下原因：（1）本次調(diào)查診斷性篩查完成率相對較低，僅為23.92%；（2）篩查人群配合度較低，對健康篩查不夠積極；（3）適齡人員大量外出。因此，在今后的篩查工作中要加大宣傳力度，提高早診率，加強(qiáng)對高危人群的篩查。

有研究表明，HBV感染患者的病程進(jìn)展、預(yù)后和抗病毒治療的療效與HBV基因型有密切關(guān)系［13］。從1988年首次根據(jù)基因同源性的差異（≥8%）［14］對HBV進(jìn)行基因分型以來，至今HBV已被分為A～H共8個(gè)基因型［13］，不同的HBV基因型株有相對明顯的地域分布，我國基因型主要為B型和C型，其中北方地區(qū)以C基因型為主，南方地區(qū)以B基因型為主［15］。目前，多項(xiàng)研究表明D基因型較A、C、B基因型的肝臟炎癥程度及纖維化程度更嚴(yán)重，同時(shí)C、D基因型也是慢性感染向肝硬化和肝癌進(jìn)展的危險(xiǎn)因素［16-17］。本調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)貴港市HBV基因型主要有A、B、C、D基因型，其中以B和C基因型為主，A和D基因型少見。目前在廣西尚未發(fā)現(xiàn)HBV E、HBV F、HBV G、HBV H基因型的流行。本次調(diào)查結(jié)果與李召發(fā)等［18］和鄭丹等［19］報(bào)道廣西扶綏地區(qū)的基因型及葛憲民等［20］報(bào)道桂林市基因型分布不同，可能與HBV基因型的地域分布、分型方法不同等因素有關(guān)。因此必須通過基于人群的HBV基因型檢測及分布情況進(jìn)行調(diào)查，以進(jìn)一步了解廣西HBV基因型的分布概況。本調(diào)查結(jié)果亦發(fā)現(xiàn)，HBV基因型在男性、女性間及各年齡組間的分布均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示性別及年齡對廣西貴港市HBV基因型的分布尚無明顯影響。

總之，肝癌仍然是廣西負(fù)擔(dān)最重的疾病［21］，而接種乙肝疫苗是預(yù)防控制乙肝病毒感染傳播和肝癌發(fā)生最經(jīng)濟(jì)有效的措施。從1992年國家將乙肝疫苗納入計(jì)劃免疫管理以來，廣西新生兒乙肝表面抗原（HBsAg）攜帶率已降至1%以下，有效預(yù)防了乙肝、肝硬化和肝癌的發(fā)生［7］。但1992年前出生的人群，尤其是目前30～40歲的人群，應(yīng)積極對其開展肝癌篩查，以發(fā)現(xiàn)肝癌高危人群，達(dá)到早期篩查、早期診斷和早期治療。本次調(diào)查通過對貴港市常駐人群的篩查，對肝癌高危人群的HBsAg DNA含量及基因型進(jìn)行檢測，進(jìn)一步了解該地區(qū)HBV復(fù)制水平和基因型分布，對相關(guān)疾病的防治提供了一定的依據(jù)。

［1］ 李秋林，容敏華，葛蓮英，等.2012年廣西腫瘤登記地區(qū)惡性腫瘤發(fā)病分析［J］.中國癌癥防治雜志，2016，8（3）：165-170.

［2］ World Health Organization（WHO）.Hepatitis B.Fact sheet N 204. Revised July 2015［EB/OL］.［2016-10-15］.http：//wwwwhoint/mediacentre/factsheets/fs204/en/indexhtml.

［3］ 中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)，中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病學(xué)分會(huì).《慢性乙型肝炎防治指南》（2015年版）［J］.中國肝臟病雜志，2015，7（3）：1-18.

［4］ 衛(wèi)生部疾病預(yù)防控制局，癌癥早診早治項(xiàng)目專家委員會(huì).中國癌癥篩查及早診早治技術(shù)方案：2011年版［J］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2011，110-171.

［5］ Lindh M，Gonzalez JE，Norkrans G，et al.Genotyping of hepatitis B virus by restriction pattern analysis of a pre-S amplicon［J］.J VirolMethods，1998，72（2）：163-174.

［6］ 陳欽艷，方鐘燎，楊益超，等.廣西乙型肝炎病毒感染及肝功能情況調(diào)查［J］.廣西醫(yī)學(xué)2013，35（11）：1432-1434，1438.

［7］ 楊進(jìn)業(yè)，李榮成，王樹聲，等.廣西五型病毒性肝炎流行病學(xué)調(diào)查［J］.應(yīng)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，1995，1（1）：29-32.

［8］ 卓家同，鐘革，黃影，等.廣西壯族自治區(qū)1992～2013年新生兒乙型肝炎疫苗接種效果及預(yù)防效益分析［J］.中國疫苗和免疫，2016，22（1）：84-87，90.

［9］ 陳建國，陳萬青，張思維，等.中國2003～2007年肝癌發(fā)病率與死亡率分析［J］.中華流行病學(xué)雜志，2012，33（6）：547-553.

［10］鄭瑩，朱美英，程月華，等.上海市社區(qū)肝癌高危人群早發(fā)現(xiàn)干預(yù)效果的研究［J］.腫瘤，2007，27（1）：73-77.

［11］啟東肝癌防治研究所早診早治項(xiàng)目組.啟東肝癌早診早治示范基地項(xiàng)目工作進(jìn)展［J］.中國腫瘤，2009，18（9）：731-734.

［12］全文，俞霞，吳標(biāo)華，等.鼻咽癌和肝癌聯(lián)合篩查的流行病學(xué)及衛(wèi)生經(jīng)濟(jì)學(xué)研究［J］.中山大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)科學(xué)版），2014，35（4）：614-618.

［13］Guirgis BSS，Abbas RO，Azzazy HME.Hepatitis B virus genotyping：current methods and clinical implications［J］.Int J Infect Dis，2010，14（11）：941-953.

［14］Okamoto H，Tsuda F，Sakugawa H，et al.Typing hepatitis B virus by homology in nucleotide sequence：comparison of surface antigen subtypes［J］.J Gen Virol，1988，69（Pt 10）：2575-2583.

［15］楊軍，秦波.乙肝病毒基因型的研究進(jìn)展［J］.西南國防醫(yī)藥，2011，21（3）：338-340.

［16］FattovichG，BortolottiF，DonatoF.NaturalhistoryofchronichepatitisB：Special emphasis on disease progression and prognostic factors［J］. J Hepatol，2008，48（2）：335-352.

［17］Yun FL.The natural history of chronic HBV infection and geographical differences［J］.Antivir Ther，2010，3（3）：25-33.

［18］李召發(fā)，鄧偉，黃天壬，等.廣西扶綏地區(qū)乙型肝炎病毒基因型分布的概況［J］.中國癌癥防治雜志，2015，7（2）：112-114.

［19］鄭丹，鄧偉，黃天壬，等.廣西壯族自治區(qū)肝癌高發(fā)區(qū)HBV基因型、BCP/前C區(qū)突變與肝癌相關(guān)性的研究［J］.中華流行病學(xué)雜志，2015，36（7）：725-729.

［20］葛憲民，李丹亞，方鐘燎，等.廣西乙型肝炎病毒基因分型及其臨床意義的研究［J］.中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志，2003，17（2）：174-179.

［21］楊麗，陳娜縈，黃開勇，等.2008～2013年廣西居民惡性腫瘤疾病負(fù)擔(dān)的研究［J］.中華疾病控制雜志，2016，20（5）：500-503，507.

［2016-10-15收稿］［2016-11-18修回］［編輯 羅惠予］

Epidemiology of HBV infection and viral genotypes from liver cancer prevention screening in Guigang City，Guangxi Province

Chen Qihuang1，2，Deng Wei1，Cao Ji1，Cai Zhengmin1，Ge Lianying1（1Affiliated Tumor Hospital of Guangxi Medical University；2Graduate School of Guangxi Medical University，Nanning 530021，P.R.China）

Ge Lianying.E-mail：gelianying1996@126.com

ObjectiveTo analyze data on hepatitis B virus（HBV）infection and viral genotypes collected as part of liver cancer prevention screening in Guigang City，Guangxi Province.MethodsData were collected from residents of Guigang City who agreed toparticipate in liver cancer screening，and 1，989 residents at high risk of liver cancer were randomly selected for quantitative detection of HBV DNA.HBV carriers with an HBV load of≥1×103copies were subjected to analysis by PCR-RFLP to determine HBV genotypes.ResultThe average rate of HBsAg positivity in the study population was 11.99%，and the rate was significantly higher in males than in females（P＜0.01）.The rate differed significantly among different age groups（P＜0.01），declining gradually with increasing age.A total of 755 HBV carriers at high risk of liver cancer were identified to have at least 1×103HBV copies.Of these 755，6（0.79%）were infected with genotype A，337（44.64%）with genotype B，293（38.81%）with genotype C，and 18（2.39%）with genotype D.The genotype in 101 carriers（13.37%）was untypable.These two genotypes did not differ significantly between men and women or among the different age groups.ConclusionThe HBV infection rate is high in the three districts of Guigang City，with HBV genotypes B and C predominating.The rate of early detection of liver cancer is relatively low.Technology and program management should be improved to enhance the efficacy of cancer screening，early detection and treatment.

Liver neoplasms；Hepatitis B virus；Genotype；Screening

R735.7

A

1674-5671（2016）06-05

10.3969/j.issn.1674-5671.2016.06.10

廣西科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（桂科攻14124003-4）；廣西高?？茖W(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目（KY2015ZD0025）

葛蓮英。E-mail：gelianying1996@126.com