辛?xí)苑迹謵廴A，梅全喜，詹樹煜

（1．廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬中山市中醫(yī)院，廣東 中山 528401； 2．廣東省中醫(yī)院珠海分院，廣東 珠海 519015；3．廣東藥學(xué)院，廣東 中山 528458）

銀蒿解熱合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)初步研究

辛?xí)苑?，林愛華2，梅全喜1，詹樹煜3

（1．廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬中山市中醫(yī)院，廣東 中山 528401； 2．廣東省中醫(yī)院珠海分院，廣東 珠海 519015；3．廣東藥學(xué)院，廣東 中山 528458）

目的建立銀蒿解熱合劑中崗梅等6種藥材定性鑒別的薄層色譜（TLC）法，為該合劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。方法通過TLC法對(duì)銀蒿解熱合劑方中崗梅、金銀花、連翹、桑葉、柴胡以及綿馬貫眾進(jìn)行定性鑒別。結(jié)果崗梅、金銀花、連翹、桑葉、柴胡以及綿馬貫眾溶液的薄層色譜中，與其對(duì)照藥材、對(duì)照品溶液均有相同顏色的斑點(diǎn)，且位置相對(duì)應(yīng)的斑點(diǎn)明顯，分離效果好。結(jié)論該法專屬性強(qiáng)，重復(fù)性高且靈敏，方法可行，可作為銀蒿解熱合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高的項(xiàng)目及質(zhì)量控制方法。

銀蒿銀熱合劑；薄層色譜法；定性鑒別

崗梅為廣東地產(chǎn)藥材[1]，具有清熱解毒、生津止渴、 利咽消腫、散瘀止痛的功效[2]，且具有抗炎、鎮(zhèn)痛等藥理作用[3]，主要應(yīng)用劑型目前有合劑、顆粒劑和口服液等[4－5]。銀蒿解熱合劑為廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬中山中醫(yī)院臨床常用醫(yī)院制劑，是以荊防敗毒散為基礎(chǔ)并結(jié)合嶺南地區(qū)外感風(fēng)熱的臨床表征開發(fā)研制的醫(yī)院制劑。其由崗梅、金銀花、連翹、桑葉、柴胡、綿馬貫眾等10味中藥材組方，全方具有辛涼解表、清熱之功，主治上呼吸道感染引起的咽喉腫痛、鼻塞、發(fā)熱、咳嗽等癥。目前，方中各味藥質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)尚未建立完全，所有鑒別均參考2010年版《中國(guó)藥典(一部)》《廣東小中藥材標(biāo)準(zhǔn)（第一冊(cè)）》的藥材鑒別方法試驗(yàn)。因此，為了更好地控制藥品質(zhì)量，完善制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，采用薄層色譜（TLC）法對(duì)方中6味中藥作定性鑒別[6]，為該合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)再提高提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

KQ5200E型醫(yī)用超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；Good See－Ⅰ型薄層色譜攝影儀(上海科哲生化科技有限公司)；JAl203型電子天平(上海天平儀器廠)；BS224S型電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；JJ200型電子天平（常熟市雙杰測(cè)試儀器廠）；DK－8D型電熱恒溫干燥箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司）；CH1006型超級(jí)恒溫槽（上海衡平儀器儀表廠）；東方－A型直熱式電熱恒溫干燥箱（廣州東方電熱干燥設(shè)備廠）；800型離心機(jī)（上海手術(shù)器械廠）；HCDX23－1型電動(dòng)吸引器（上海二二八廠）；CRLB－1500S型電爐(肇慶金雅樂電器有限公司）；IXUS115HS－Canon數(shù)碼相機(jī)（佳能＜中國(guó)＞有限公司）。

1．2 試藥

銀蒿解熱合劑（本院制劑室提供，批號(hào)為20140520，20141104）；陰性對(duì)照樣品（本院制劑室提供）；綠原酸對(duì)照品（批號(hào)為110753－201314），連翹苷對(duì)照品（批號(hào)為110821－201213），連翹對(duì)照藥材（批號(hào)為 120908－200915），金銀花對(duì)照 藥材（批號(hào)為121060－201107），柴胡對(duì)照藥材（批號(hào)為 120992－201108），桑葉對(duì)照藥材（批號(hào)為121123－201305），綿馬貫眾對(duì)照藥材（批號(hào)為121034－200302），崗梅對(duì)照藥材（批號(hào)為1152－200001），均購自中國(guó)食品藥品檢定研究院；乙酸乙酯、甲苯、甲醇等均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 崗梅

取合劑33 mL，在乙酸乙酯中萃取2次，每次35 mL，合并乙酸乙酯液，濃縮至1 mL，制成供試品溶液。另取崗梅對(duì)照藥材2 g，于100 mL水中煎煮提取1 h，過濾，濾液加乙酸乙酯，相同方法制成對(duì)照藥材溶液。同供試品溶液制備方法，取缺崗梅藥材陰性樣品制成缺崗梅陰性對(duì)照品溶液。按2010年版《中國(guó)藥典（一部）》附錄ⅥB中薄層色譜法操作，將上述溶液各 12 μL，分別在同一硅膠G薄層板上點(diǎn)樣，以乙酸乙酯－甲苯－甲酸(3∶5∶0．5)為展開劑，展開后，從層析缸中取出，晾干后氨熏，于日光下檢視。結(jié)果供試品溶液色譜中有1個(gè)黃色斑點(diǎn)與崗梅對(duì)照藥材溶液色譜相對(duì)應(yīng)，缺崗梅的陰性對(duì)照無干擾色譜圖。見圖1 A。

2．2 金銀花

取合劑20 mL，置磨口錐形瓶中，加30 mL甲醇，超聲30 min，用分液漏斗取上層溶液，作為供試品溶液。取缺金銀花陰性對(duì)照樣品，同法制得缺金銀花陰性對(duì)照品溶液。取金銀花對(duì)照藥材粉末和綠原酸對(duì)照品，均用甲醇制成1 g／L的對(duì)照藥材及對(duì)照品溶液。取上述溶液各15 μL，分別于同一硅膠H薄層板上點(diǎn)樣，在甲酸－乙酸丁酯－水（2．5∶7∶2．5）的上層溶液中展開，于通風(fēng)櫥晾干，在紫外光燈（365 nm）下檢視。結(jié)果有熒光斑點(diǎn)同時(shí)出現(xiàn)于供試品溶液和金銀花對(duì)照藥材及綠原酸對(duì)照品溶液色譜上，且位置顏色均相應(yīng)，陰性對(duì)照無干擾。色譜圖見圖1 B。

2．3 連翹

取10 mL合劑，置磨口錐形瓶中，加20 mL石油醚(30～60℃)，超聲提取18 min，用分液漏斗取下層溶液，再用超聲方法加20 mL甲醇同法提取25 min，蒸干濾液，用4 mL甲醇溶解，制成供試品溶液。同上述方法制得缺連翹陰性對(duì)照品溶液。將連翹對(duì)照藥材粉末及連翹苷對(duì)照品，用甲醇制成0．25 g／mL的對(duì)照藥材及對(duì)照品溶液。取以上溶液各3 μL，分別于同一硅膠G薄層板上點(diǎn)樣，用三氯甲烷－甲醇(5∶1)作展開劑，展開晾干后，用10%硫酸乙醇溶液作顯色劑噴在板上，于105℃烘箱中顯色，斑點(diǎn)明顯即可。結(jié)果供試品、連翹對(duì)照藥材及連翹苷對(duì)照品3種溶液色譜相應(yīng)位置有相同顏色的斑點(diǎn)，且缺連翹的陰性對(duì)照無干擾。色譜圖見圖1 C。

2．4 桑葉

取合劑15 mL，濃縮至稠膏狀，用適量硅藻土分散，于35 mL乙醇中用超聲提取 20 min，取濾液蒸干，用1 mL甲醇溶解，制成供試品溶液。用同樣的方法處理得到缺桑葉陰性對(duì)照品溶液。同樣用超聲提取方法，將2 g桑葉對(duì)照藥材于35 mL乙醇中制得對(duì)照藥材溶液。將上述溶液各10 μL，在同一硅膠G薄層板上點(diǎn)樣，并在甲苯－乙酸乙酯－甲酸（8∶2∶1)的上層液中展開，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結(jié)果供試品溶液色譜熒光斑點(diǎn)清晰，并與對(duì)照藥材、對(duì)照品溶液的熒光斑點(diǎn)于同一水平線，且缺桑葉的陰性對(duì)照無干擾。色譜圖見圖1 D。

2．5 柴胡

取30 mL合劑，用水飽和的正丁醇提取3次，每次20 mL，合并提取液，于分流漏斗中用20 mL 5%NaHCO3溶液洗滌1次，取上層溶液于水浴上加熱至干，用2 mL甲醇溶解，制得供試品溶液。另取缺柴胡陰性樣品30 mL，同法制得陰性對(duì)照品溶液。取2 g柴胡對(duì)照藥材，加20 mL水，在水浴上加熱回流1 h，將濾液再以水飽和的正丁醇提取3次，同法制得對(duì)照藥材溶液。吸取上述溶液各10 μL，分別于同一硅膠G薄層板上點(diǎn)樣，于氯仿－水－甲醇(80∶2∶25)中展開，晾干，用1%對(duì)二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇液顯色，于110℃加熱烘干，取出，靜置于通風(fēng)處，待斑點(diǎn)顯色明顯后檢視。結(jié)果供試品溶液色譜中，有和對(duì)照藥材溶液顏色相同且在同一水平位置的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾。色譜圖見圖1 E。

2．6 綿馬貫眾

取30 mL合劑，用鹽酸酸化至pH＝2～3后，再用乙醚萃取3次，合并提取液，于水浴上加熱至干，用2 mL氯仿溶解，制成供試品溶液。取缺綿馬貫眾的樣品，同法制得陰性對(duì)照品溶液。另取綿馬貫眾對(duì)照藥材3．0 g，于40 mL水中煎煮沸騰，保持微沸1 h左右，濾液按供試品溶液制備方法同法制得對(duì)照藥材溶液。將上述3種溶液各10 μL，于同一硅膠G薄層板上點(diǎn)樣，在氯仿－冰醋酸－丙酮(16∶0．3∶4)中展開，取出薄層板，晾干，先后噴以10%的磷鉬酸乙醇溶液及0．4%的氫氧化鈉溶液，顯色后在日光下檢視。結(jié)果供試品溶液色譜中，有一個(gè)與對(duì)照藥材溶液色譜同一水平線的黃色熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干預(yù)。色譜圖見圖1 F。

圖1 薄層色譜圖

3 討論

銀蒿解熱合劑為中藥復(fù)方制劑，成分復(fù)雜，方中金銀花和連翹2種藥材的薄層色譜斑點(diǎn)明顯，無陰性干擾，其他藥材的其他成分也沒有干擾斑點(diǎn)，專屬較強(qiáng)。而方中綿馬貫眾、柴胡、崗梅、桑葉分別存在陰性干擾、主斑點(diǎn)不明顯，專屬性不強(qiáng)。通過多次方法調(diào)整及試驗(yàn)，篩選出合理的提取方法和合適的展開劑，經(jīng)試驗(yàn)證明，斑點(diǎn)清楚明顯，分離效果好，重現(xiàn)性較強(qiáng)，均無陰性干擾，操作簡(jiǎn)便。該法具有簡(jiǎn)易、重復(fù)性好、專屬性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，可為該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

[1]梅全喜．廣東地產(chǎn)藥材研究[M]．廣州：廣東科學(xué)技術(shù)出版社，2010：346－348．

[2]范文昌，梅全喜，李楚源．廣東地產(chǎn)清熱解毒藥物大全[M]．北京:中醫(yī)古籍出版社，2011：332－333．

[3]辛?xí)苑?，林愛華，梅全喜，等．廣東地產(chǎn)藥材崗梅的藥理作用及臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J]．時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2015，26(1):196－197．

[4]祁銀德，任玉鳳．嶺南地區(qū)習(xí)用中藥崗梅研究進(jìn)展[J]．亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2009，5(3):29．

[5]辛?xí)苑?，林愛華，梅全喜，等．廣東地產(chǎn)藥材崗梅復(fù)方制劑研究進(jìn)展[J]．今日藥學(xué)，2015，24(10):762－764．

[6]國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M]．北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:34－35．

Studies on Quality Standard of Yinhaojiere M ixture

Xin Xiaofang1,Lin Aihua2,Mei Quanxi1,Zhan Shuyi3
(1．Guangzhou University of Chinese Medicine Affiliated Zhongshan TCM Hospital,Zhongshan,Guangdong,China 528401; 2．Guangdong TCM Hospital Zhuhai Branch Hospital,Zhuhai,Guangdong,China 519015; 3．Guangdong Pharmaceutical University,Zhongshan,Guangdong,China 528458)

Objective To establish identification method of yinhaojiere mixture by thin layer chromatography(TLC)and provide experimental basis for improving the quality standards of mixture．M ethods TLC was used to identify Gangmei(Radix et caμLis ilicis asprellae)Jinyinhua(Lonicerae japonicae flos)Lianqiao(Forsythiae fructus)Sangye(Mori folium)Caihu(Bupleuri radix)and Mianmaguanzhong (Pryopteridis crassirhizomatis rhizoma)in yinhaojiere mixture．Results In the color spectrum of TLC of Gangmei(Radix et caμLis ilicis asprellae),Jinyinhua(Radix et caμLis ilicis asprellae),Lianqiao(Forsythiae fructus),Sangye(Mori folium),Caihu(Bupleuri radix)and Mianmaguanzhong(Pryopteridis crassirhizomatis rhizoma)inyinhaojiere mixture,the same color dots were obtained in the corresponding positionsofthe colorspectmms ofcontroldrugsand reference substances．The dotswere obviously,good separation,easy to distinguish．Conclusion The method used for the study is specific,reproducible and sensitive method is feasible,,and be used as the experimental content for quality standard increasedc also as one of the means for the quality control of yinhaojiere mixture．

Yinhaojiere mixture;TLC;identification

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)05－0049－04

辛?xí)苑迹?985－），女，漢族，廣東中山人，在讀碩士研究生，藥師，研究方向?yàn)獒t(yī)院藥學(xué)，（電子信箱）sunnielovely＠sina．com；林愛華（1976－），男，漢族，江蘇南通人，博士研究生，碩士研究生導(dǎo)師，主要從事中藥制劑研究，本文通訊作者，（電子信箱）linah76＠163．com。

2015－10－14)

廣東省中醫(yī)藥管理局科研基金資助項(xiàng)目，項(xiàng)目編號(hào)：20131078；廣東省中山市科技局重點(diǎn)資助項(xiàng)目，項(xiàng)目編號(hào)：20132A002。