賴燕燕 黃應(yīng)雯 黃丹玚 伍蘭嵐 羅彬尤 李曉龍

(1 廣西衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)與遺傳學(xué)教研室，南寧市 530021，E-mail：yanyanlai630@outlook.com；2 廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附院醫(yī)院辦公室，南寧市 530021；3 廣西醫(yī)科大學(xué)，南寧市 530021)

論著·基礎(chǔ)研究

山竹果皮提取物對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2增殖及凋亡的影響▲

賴燕燕1黃應(yīng)雯2黃丹玚3伍蘭嵐3羅彬尤3李曉龍3

(1 廣西衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)與遺傳學(xué)教研室，南寧市 530021，E-mail：yanyanlai630@outlook.com；2 廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附院醫(yī)院辦公室，南寧市 530021；3 廣西醫(yī)科大學(xué)，南寧市 530021)

目的 探討山竹提取物對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2增殖及凋亡的影響及其作用機(jī)制。方法 采用MTT法檢測(cè)不同濃度山竹提取物對(duì)HepG2細(xì)胞增殖的影響；分別應(yīng)用Annexin-V/PI雙重染色、PI單染法檢測(cè)山竹提取物對(duì)HepG2凋亡和細(xì)胞周期的影響；天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)試劑盒檢測(cè)山竹提取物對(duì)HepG2細(xì)胞Caspase-3酶活化的影響。結(jié)果 不同濃度(100 μmol/L、200 μmol/L、400 μmol/L、600 μmol/L、800 μmol/L)山竹提取物均可抑制人肝癌細(xì)胞HepG2的增殖活性，且隨著山竹提取物濃度及其作用時(shí)間的增加，細(xì)胞抑制率升高(P<0.05)；山竹提取物濃度為256.67 μmol/L時(shí)可誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞HepG2出現(xiàn)早期凋亡，并且隨著山竹提取物作用時(shí)間的增加，凋亡早期癌細(xì)胞的比率增高。細(xì)胞周期分析結(jié)果顯示隨著山竹提取物的濃度升高(0 μmol/L、200 μmol/L、400 μmol/L、600 μmol/L、800 μmol/L)，G1期HepG2細(xì)胞比例升高，而S期細(xì)胞比例下降(P<0.05)。與對(duì)照組(0 μmol/L)比較，各濃度(200 μmol/L、400 μmol/L、600 μmol/L、800 μmol/L)山竹提取物組HepG2細(xì)胞的Caspase-3酶活性均升高(P<0.05)，給藥組的酶活力單位隨給藥濃度的增加而明顯增加(P<0.05)。結(jié)論 山竹提取物對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2有抑制增殖和促進(jìn)凋亡的作用，其作用機(jī)制可能與抑制HepG2細(xì)胞進(jìn)入S期和激活Caspase-3有關(guān)。

肝癌；人肝癌細(xì)胞HepG2；山竹提取物；增殖；凋亡；細(xì)胞周期；天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-3

肝癌在我國(guó)常見(jiàn)腫瘤中位居第2位，僅次于肺癌[1]，而我國(guó)是全球肝癌發(fā)病率最高的國(guó)家，其發(fā)病率比西方國(guó)家高10倍以上。據(jù)統(tǒng)計(jì)，目前我國(guó)肝癌發(fā)病人數(shù)占全球發(fā)病人數(shù)的55%，而死亡的人數(shù)約占全世界肝癌死亡人數(shù)的45%[2]。手術(shù)切除是目前治療早期肝癌唯一有效的方法，但大多數(shù)患者就診時(shí)已為中晚期，手術(shù)療效有限，因而尋找新的治療方法尤為重要。在天然藥物中尋找具有調(diào)控細(xì)胞增殖、凋亡的化合物單體或前體化合物，是目前國(guó)內(nèi)外抗腫瘤藥物研發(fā)的熱點(diǎn)。

山竹又稱山竹子、莽吉柿或鳳果，是藤黃科藤黃屬常綠喬木山竹的果實(shí)。山竹果皮性涼，味苦、澀，是泰國(guó)、緬甸、印度等東南亞國(guó)家的傳統(tǒng)醫(yī)藥，山竹果皮研為細(xì)末內(nèi)服，被廣泛用于治療腹痛、腹瀉、痢疾、感染性創(chuàng)傷、化膿、慢性潰瘍等疾病[3-4]；外敷可起到消炎止痛的作用，用于治療皮膚病，水、火燙傷尤為顯效[5]。山竹果殼含有多種氧雜蒽酮衍生物，主要包括山竹提取物(75%～85%)和γ-倒捻子素(5%～15%)，其藥理作用成為了近年來(lái)的研究熱點(diǎn)。近期有研究表明這些氧雜蒽酮表現(xiàn)出抗炎、抗腫瘤、抗氧化等多種生物活性，對(duì)多種細(xì)菌具有抗菌作用[6]。有學(xué)者通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)山竹果皮提取物具有抗菌活性、細(xì)胞和生物毒性、酶抑制活性、抗病毒活性、殺傷癌細(xì)胞等作用[5，7-12]。但山竹提取物對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞的作用及抗腫瘤機(jī)制目前尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究通過(guò)探討山竹提取物其對(duì)肝癌HepG2 細(xì)胞的作用及其可能的抗腫瘤機(jī)制，為進(jìn)一步研究山竹提取物的藥用價(jià)值以及其抗腫瘤作用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器 山竹果皮粉由廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院提供，人肝癌細(xì)胞HepG2由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)中提供；HyClone DMEM/高糖培養(yǎng)基[賽默飛世爾生物化學(xué)制品(北京)有限公司，批號(hào)：NXM0766]，胰蛋白酶-乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA)消化液(北京索萊寶科技有限公司，批號(hào)：T1300-100)，磷酸緩沖鹽溶液(phosphate-buffered saline，PBS；武漢博士德生物工程有限公司，批號(hào)：AR0030)，四甲基偶氮唑鹽(methylthiazolyl tetrazolium，MTT)細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒(碧云天生物技術(shù)研究所，批號(hào)：C0009)，二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide，DMSO；Amresco公司，批號(hào)：302A031)，四季青無(wú)支原體胎牛血清(L浙江天杭生物科技有限公司，批號(hào)：130407)，Annexin V-FITC/PI雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(L聯(lián)科生物科技有限公司，批號(hào)：2100512)，細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(碧云天生物技術(shù)研究所，批號(hào)：C1052)，天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-3(cysteine-containing aspartate-specific proteases-3，Caspase-3)活性檢測(cè)試劑盒(碧云天生物技術(shù)研究所，批號(hào)：C1115)；酶標(biāo)儀(Tecan.公司，型號(hào)：Sunrise)，流式細(xì)胞儀(BD公司，型號(hào)：InfluxTM)，顯微鏡(Olympus公司，型號(hào)：IX-51)，臺(tái)式離心機(jī)(Eppendorf公司，型號(hào)：5424)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 山竹提取物的制備：取50 g的山竹果皮干燥粉末，溶于500 ml的85%乙醇，過(guò)夜(16 h)，過(guò)濾取上清液；旋蒸至10 ml，用乙酸乙酯萃取，取上清液；過(guò)硅膠柱，用正己烷和乙酸乙酯(5 ∶1)洗脫；得到的液體烘干，用DMSO溶解，置于-20℃冰箱冷凍保存?zhèn)溆肹13]。

1.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)：對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，基礎(chǔ)培養(yǎng)基為HyClone DMEM/高糖培養(yǎng)液，加入無(wú)支原體胎牛血清配置成含10%無(wú)支原體胎牛血清的培養(yǎng)液，在37℃、5% CO2、飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

1.2.3 MTT法檢測(cè)山竹提取物對(duì)HepG2細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HepG2細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度至1×105個(gè)/ml，接種于96孔板中，每孔100 μl，在37℃、5% CO2、飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，細(xì)胞貼壁后[14]，藥物處理組加入用培養(yǎng)液稀釋的山竹提取物，使終濃度分別為100 μmol/L、200 μmol/L、400 μmol/L、600 μmol/L、800 μmol/L，每孔總量100 μl。同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照組(含有細(xì)胞的培養(yǎng)基、MTT溶液，不含藥物)和空白對(duì)照組(含PBS及MTT溶液，不含藥物)。各個(gè)藥物處理組及陰性對(duì)照組每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔。繼續(xù)培養(yǎng)24 h、48 h、72 h后，每孔加入1 mg/ml MTT溶液20 μl，37℃孵育4 h后棄培養(yǎng)基，每孔加入150 μl DMSO振蕩10 min，使結(jié)晶物充分溶解。用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀于490 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值(A值)。按下列公式計(jì)算抑制率：腫瘤細(xì)胞抑制率(%)=(藥物處理組A 490 nm-空白組A 490 nm)/(陰性對(duì)照組A 490 nm-空白組A 490 nm)×100%。

1.2.4 Annexin V-PI 法檢測(cè)山竹提取物對(duì)HepG2細(xì)胞凋亡的影響：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HepG2細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度1×106個(gè)/ml，每孔加入2 ml，均勻鋪在6孔板中，在37℃、5% CO2、飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h后，加入用培養(yǎng)液將山竹提取物稀釋至256.67 μmol/L(即IC50濃度)，每孔2 ml，分別培養(yǎng)0 h、24 h、48 h及72 h；將6 孔板中的各處理組HepG2細(xì)胞用0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液消化，1 000 r/min離心5 min后 收集細(xì)胞； 用PBS 洗滌細(xì)胞2次(1 000 r/min，10 min)，收集細(xì)胞；加入500 μl的結(jié)合緩沖液，吹打懸浮細(xì)胞； 加入5 μl Annexin V-FITC 混勻后，加入10 μl碘化丙啶(propidium iodide，PI)，混勻；在室溫、避光的條件下孵育5 min；在1 h內(nèi)采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況[15]。

1.2.5 PI單染法檢測(cè)山竹提取物對(duì)細(xì)胞周期的影響：收集對(duì)數(shù)期HepG2細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度1×106個(gè)/ml，每孔加入2 ml，均勻鋪在6孔板；5% CO2、37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育，至細(xì)胞單層鋪滿孔底，小心吸去培養(yǎng)液，加入用培養(yǎng)液稀釋的不同濃度梯度的山竹提取物(0 μmol/L、200 μmol/L、400 μmol/L、600 μmol/L、800 μmol/L)，每孔2 ml，復(fù)孔6個(gè)，培養(yǎng)24 h；消化收集細(xì)胞(同Annexin V-PI法)，用PBS洗1次(1 000 r/min，4 min)，用100 μl PBS重懸，滴入預(yù)冷的75%乙醇400 μl，固定過(guò)夜(16 h)。離心棄液，用PBS洗1次(1 000 r/min，4 min)，用400 μl PBS重懸細(xì)胞，加入PI染色液10 μl[碘化丙啶染色液配法：染色緩沖液3 ml+碘化丙啶染色液(20x)150 μl+RNase A(L50x)60 μl]，室溫黑暗孵育10 min，1 h內(nèi)上機(jī)檢測(cè)細(xì)胞周期。

1.2.6 Caspase-3的活性檢測(cè)：收集對(duì)數(shù)期HepG2細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度1×106個(gè)/ml，每孔加入3 ml，均勻鋪在6孔板；5% CO2、37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育，至細(xì)胞單層鋪滿孔底，小心吸去培養(yǎng)液，加入用培養(yǎng)液稀釋的不同濃度梯度的山竹提取物(200 μmol/L、400 μmol/L、600 μmol/L、800 μmol/L)，每孔2 ml，復(fù)孔6個(gè)，培養(yǎng)24 h；消化收集細(xì)胞，用PBS洗1次(1 000 r/min，4 min)，按每200萬(wàn)細(xì)胞加入100 μl裂解液，重懸細(xì)胞，冰浴裂解15 min，16 000～20 000 g/min離心15 min，轉(zhuǎn)移上清液至冰浴預(yù)冷的試管；空白對(duì)照組(90 μl檢測(cè)緩沖液+10 μl Ac-DEVD-pNA)，樣品組(80 μl檢測(cè)緩沖液+10 μl Ac-DEVD-pNA+10 μl待測(cè)樣品)，37℃孵育2 h，顏色變化明顯后上酶標(biāo)儀機(jī)檢測(cè)樣品中Caspase 3催化產(chǎn)生的pNA產(chǎn)生的吸光度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以(x±s)表示，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用q檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 山竹提取物對(duì)HepG2細(xì)胞的增殖抑制作用 不同濃度藥物處理組分別培養(yǎng)24 h、48 h，72 h后，山竹提取物對(duì)HepG2細(xì)胞的增殖均具有抑制作用，且隨著山竹提取物濃度和作用時(shí)間的增加，細(xì)胞抑制率升高(P<0.05)；山竹提取物對(duì)HepG2細(xì)胞的生長(zhǎng)有量-效、時(shí)-效關(guān)系。見(jiàn)表1。24 h、48 h、72 h的IC50值分別為294.90 μmol/L、256.67 μmol/L、178.59 μmol/L。

2.2 Annexin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡的結(jié)果 在雙變量流式細(xì)胞儀的散點(diǎn)圖上，左下象限是活細(xì)胞，為(FITC+/PI+)；右上象限是非活細(xì)胞，即壞死細(xì)胞，為(FITC-/PI+)；而右下象限為凋亡細(xì)胞，顯現(xiàn)(FITC+/I-)在HepG2細(xì)胞組中，提示山竹提取物可引起肝癌細(xì)胞HepG2的凋亡。見(jiàn)圖1。加入用培養(yǎng)液稀釋至濃度為256.67 μmol/L(IC50濃度)的山竹提取物后，肝癌細(xì)胞HepG2出現(xiàn)明顯早期凋亡；在0 h、24 h、48 h、72 h早期細(xì)胞凋亡率分別為0.05%、11.63%、55.98%、73.38%，隨著山竹提取物作用時(shí)間的增加凋亡早期癌細(xì)胞的比率顯著增高。

表1 不同濃度山竹提取物作用下HepG2細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率的比較(x±s，%)

注：相同時(shí)間點(diǎn)下不同濃度組間兩兩比較，*P<0.05；相同濃度下不同時(shí)間點(diǎn)兩組間兩兩比較，●P<0.05。

A 0 h

B 24 h

C 48 h

D 72 h

2.3 山竹提取物對(duì)細(xì)胞周期的影響 與對(duì)照組(山竹提取物濃度為0 μM)比較，各濃度山竹提取物組G1期細(xì)胞比例均升高，S期細(xì)胞比例均下降 (P<0.05)，且隨著藥物濃度的提高，G1期細(xì)胞比例升高，同時(shí)S期細(xì)胞比例下降(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 山竹提取物對(duì)HepG2細(xì)胞周期的影響(x±s，%)

注：G1期細(xì)胞組間兩兩比較，*P<0.05；●S期細(xì)胞組間兩兩比較，P<0.05。

2.4 Caspase-3的活性 Caspase-3的活性檢測(cè)中吸光度越大，產(chǎn)生的pNA越多。Caspase 3酶活力單位的定義：即一個(gè)酶活力單位定義為當(dāng)?shù)孜镲柡蜁r(shí)，在37℃可以剪切1 nmol Ac-DEVD-pNA產(chǎn)生1 nmol pNA的Caspase 3的酶量。故吸光度越大，Caspase 3酶活力越強(qiáng)。隨著藥物濃度的增加，405 nm的吸光度值越大，Caspase 3酶活力增強(qiáng)。與對(duì)照組(山竹提取物濃度為0 μM)酶活力單位比較，各濃度山竹提取物組HepG2細(xì)胞的Caspase-3酶活性均升高(P<0.05)；給藥組的酶活力單位隨給藥濃度的增加而明顯增加(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 山竹提取物對(duì)HepG2細(xì)胞Caspase-3活性的影響(x±s)

注：*與對(duì)照組比較，P<0.05，●不同濃度組間兩兩比較，P<0.05。

3 討 論

肝癌是常見(jiàn)病和多發(fā)病，可分為原發(fā)性和繼發(fā)性兩大類。由于肝臟是人體最大的實(shí)質(zhì)性器官，具有重要代謝功能，因此，肝臟一旦出現(xiàn)惡性腫瘤可危及生命。肝臟具有豐富的血流供應(yīng)，與人體的重要結(jié)構(gòu)如下腔靜脈、門(mén)靜脈、膽道系統(tǒng)等關(guān)系密切，而肝臟惡性腫瘤發(fā)病隱匿，侵襲性生長(zhǎng)快速，其治療甚為困難。手術(shù)切除是目前治療早期肝癌唯一有效的方法，但大多數(shù)患者就診時(shí)已為中晚期，手術(shù)療效有限，因而尋找新的治療方法尤為重要。在天然藥物中尋找具有調(diào)控細(xì)胞增殖、凋亡的化合物單體或前體化合物，是目前國(guó)內(nèi)外抗腫瘤藥物研究的熱點(diǎn)。國(guó)內(nèi)外研究表明，山竹具有抗炎、抗腫瘤、抗氧化活性等作用，但是對(duì)其藥理機(jī)制的研究卻遠(yuǎn)遠(yuǎn)落后于對(duì)化學(xué)成分的研究。因此有必要對(duì)山竹及其有效成分的藥理和毒理作用進(jìn)行進(jìn)一步的深入研究。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示山竹提取物能抑制HepG2細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡，隨藥物作用濃度的增大對(duì)細(xì)胞增殖抑制的影響逐漸增加(P<0.05)，具有明顯的濃度依賴性，且在一定濃度范圍內(nèi)具有時(shí)間依賴性。山竹提取物濃度為256.67 μmol/L時(shí)可誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞HepG2出現(xiàn)明顯早期凋亡，并且隨著藥物作用時(shí)間的增加凋亡早期癌細(xì)胞的比率顯著增高。以上結(jié)果說(shuō)明了山竹提取物能抑制肝癌HepG2細(xì)胞的增殖和促使其凋亡。對(duì)細(xì)胞周期影響的分析結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，隨著藥物濃度的提高，G1期細(xì)胞比例大幅升高，而同時(shí)S期細(xì)胞比例明顯下降(P<0.05)，提示山竹提取物抑制細(xì)胞進(jìn)入S期從而導(dǎo)致G1期細(xì)胞比例大幅升高。

此外，對(duì)凋亡的執(zhí)行者Caspase-3活性蛋白進(jìn)行檢測(cè)的結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，各濃度山竹提取物組HepG2細(xì)胞的Caspase-3酶活性均升高(P<0.05)。提示經(jīng)山竹提取物處理的HepG2細(xì)胞Caspase-3蛋白活性顯著增加。細(xì)胞死亡主要有凋亡和壞死兩種表現(xiàn)，兩者之間主要的區(qū)別是死亡過(guò)程中細(xì)胞本身是否主動(dòng)參與[16]，本研究表明加入藥物處理后，細(xì)胞的死亡是通過(guò)凋亡途徑進(jìn)行的。Caspase-3 是真核細(xì)胞中最常見(jiàn)的凋亡蛋白，也是研究最為透徹的半胱氨酸蛋白酶家族成員之一，大多數(shù)的細(xì)胞凋亡與其有關(guān)[17]。這些凋亡通路關(guān)鍵酶的激活可能是山竹提取物誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡的重要原因。Caspase是一個(gè)含有半胱氨酸活性的胞漿蛋白酶家族，迄今至少發(fā)現(xiàn)14個(gè)成員，其目前發(fā)現(xiàn)的Caspase成員中與ced-3同源性最高的，是細(xì)胞凋亡過(guò)程中激活的關(guān)鍵酶，也是細(xì)胞凋亡的主要效應(yīng)分子[18]。Caspase-3在多因素誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞凋亡中激活，促進(jìn)Caspase-3活化和活性，能夠加速肝癌細(xì)胞凋亡。然而，目前其活化分子機(jī)制尚不清楚，有待于進(jìn)一步研究，從而為以Caspase-3為靶點(diǎn)的藥物治療提供堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)[19]。

綜上所述，山竹提取物對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2凋亡有誘導(dǎo)作用，且對(duì)肝癌細(xì)胞增殖有抑制作用，對(duì)肝癌治療有一定價(jià)值；其作用機(jī)制可能與抑制HepG2細(xì)胞進(jìn)入S期和激活Caspase-3有關(guān)，但尚需進(jìn)一步的研究證實(shí)。

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Effects of mangosteen extract on proliferation and apoptosis of human hepatocellular carcinoma HepG2 cells

LAIYan-yan1,HUANGYing-wen2,HUANGDan-yang3,WULan-lan3,LUOBin-you3,LIXiao-long3

(1DepartmentofCytobiologyandGenetics,GuangxiMedicalCollege,Nanning530021,China;2OfficeofHospitalAffairs,theFirstAffiliatedHospitalofGuangxiUniversityofChineseMedicine,Nanning530021,China;3GuangxiMedicalUniversity,Nanning530021,China)

Objective To explore the effects of mangosteen extract on the proliferation and apoptosis of human hepatocellular carcinoma HepG2 cells and its mechanism.Methods Methylthiazolyl tetrazolium(MTT) assay was used to assess the effect of mangosteen extract on the proliferation and apoptosis of HepG2 cells with various concentrations.Annexin-V/PI double staining method and PI single staining method were used to determine the effect of mangosteen extract on the apoptosis and cell cycle of HepG2 cells respectively.Cysteine-containing aspartate-specific proteases-3(Caspase-3) kit was used to assess the effect of mangosteen extract on the Caspase-3 activation of HepG2 cells.Results The mangosteen extract with various concentrations(100 μmol/L,200 μmol/L,400 μmol/L,600 μmol/L and 800 μmol/L) could inhibit the proliferative activity of HepG2 cells,and the inhibitory rate of the cells increased with the increasing concentration of drug and duration of drug action(P<0.05).The mangosteen extract with the concentration of 256.67 μmol/L could induce early apoptosis in HepG2 cells,and the ratio of the cells in early apoptotic stage increased significantly with the increasing duration of drug action.Cell-cycle analysis revealed that the ratio of HepG2 cells in the G1 phase increased and the ratio of the cells in the S phase reduced with the increasing mangosteen extract concentration(0 μmol/L,200 μmol/L,400 μmol/L,600 μmol/L and 800 μmol/L)(P<0.05).Compared to the control group(0 μmol/L),the Caspase-3 activities of HepG2 cells in the groups with different mangosteen extract concentrations(200 μmol/L,400 μmol/L,600 μmol/L and 800 μmol/L) increased(P<0.05),and the Caspase-3 activities of HepG2 cells increased with the increasing mangosteen extract concentration(P<0.05).Conclusion Mangosteen extract can inhibit the proliferation and promote the apoptosis of human hepatocellular carcinoma HepG2 cells.The mechanism may be related to the inhibition of HepG2 cells entrance into S phase and activation of Caspase-3.

Hepatocellular carcinoma,Human hepatocellular carcinoma HepG2 cells,Mangosteen extract,Proliferation,Apoptosis,Cell cycle,Cysteine-containing aspartate-specific proteases-3

廣西醫(yī)科大學(xué)青年科學(xué)基金項(xiàng)目(GXMUYSF09)；實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放課題(02610212063)

賴燕燕(1974～)，女，碩士，講師，研究方向：腫瘤與天然藥物的研究。

李曉龍(1984～)，男，碩士，講師，研究方向：腫瘤及腫瘤治療，E-mail：xlonglee.chn@outlook.com。

R 735.7

A

0253-4304(2016)04-0452-05

10.11675/j.issn.0253-4304.2016.04.02

2015-11-16

2016-02-16)