周長榮 劉磊 溫小軍

(貴州醫(yī)科大學(xué)生物教研室，貴州 貴陽 550025)

珊瑚姜精油對(duì)白紋伊蚊和致倦庫蚊的毒殺活性

周長榮 劉磊 溫小軍△

(貴州醫(yī)科大學(xué)生物教研室，貴州 貴陽 550025)

珊瑚姜； 植物精油； 白紋伊蚊； 致倦庫蚊； 毒殺活性

蚊蟲騷擾人們的正常生活，傳播瘧疾、登革熱、絲蟲病及乙型腦炎等疾病[1]，給人類的健康帶來威脅。研究發(fā)現(xiàn)，植物精油對(duì)蚊幼蟲具有良好的毒殺活性[2-4]，并且植物精油具有高效、安全、靶向?qū)Ｒ缓鸵子诮到獾葍?yōu)點(diǎn)。研究植物精油對(duì)蚊的毒殺活性具有廣闊的應(yīng)用前景。W.Choochote等[5]的研究表明郁金根狀莖的己烷提取物及揮發(fā)油對(duì)埃及伊蚊的幼蟲具有毒殺效果；P.Veenal等[6]發(fā)現(xiàn)生姜精油及迷迭香精油對(duì)史帝芬塞瘧蚊、埃及伊蚊及熱帶家蚊(的蚊卵都具有顯著的殺滅效果；而珊瑚姜精油對(duì)蚊蟲的活性從未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)研究了珊瑚姜精油對(duì)白紋伊蚊和致倦庫蚊s幼蟲和蛹的毒殺作用，為以后植物源殺幼劑的研究提供基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1 植物精油 珊瑚姜塊莖購自花鳥市場，經(jīng)貴州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院龍慶德教授鑒定，確認(rèn)為珊瑚姜。并過40目篩，采用水蒸汽蒸餾法提取精油：將150 g的珊瑚姜粉末置于2 000 mL的圓底燒瓶中，加入1 500 mL的蒸餾水，過夜浸泡；蒸餾6 h，精油收集于棕色試劑瓶內(nèi)，經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，保存于4 ℃冰箱中備用。

1.2 供試蚊蟲 實(shí)驗(yàn)用蟲均為貴州醫(yī)科大學(xué)生物教研室蚊房訓(xùn)養(yǎng)的白紋伊蚊和致倦庫蚊的IV齡幼蟲和蛹。馴養(yǎng)溫度：(26±2)℃，濕度：(65±5)%，光照周期14L∶10D。實(shí)驗(yàn)挑選大小一致、健壯的IV齡幼蟲和蛹進(jìn)行。

1.3 珊瑚姜精油對(duì)白紋伊蚊和致倦庫蚊幼蟲和蛹的毒殺活性 參照WHO[7]的方法，進(jìn)行優(yōu)化測(cè)試。以1 g精油∶20 mL的無水乙醇的比例對(duì)珊瑚姜精油進(jìn)行溶解，然后用去氯水制備成1 000 mg/L的精油母液。分別將幼蟲及蛹各30頭接入200 mL的塑料杯中，再將不同濃度的精油溶液各100 mL分別注入塑料杯中進(jìn)行毒殺實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)過程在幼蟲所需的正常生長環(huán)境條件下進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)過程中不進(jìn)行喂食。以相同濃度的乙醇溶液作為溶劑對(duì)照組，此外，同時(shí)做空白對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行24 h后觀察幼蟲情況：用吸管刺激幼蟲，幼蟲不游動(dòng)或不能游到水面(沒有顯著的潛水反應(yīng))，即視為個(gè)體已經(jīng)死亡。各個(gè)珊瑚姜精油濃度重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)死亡率為3次的平均值，校正死亡率按Abbott公式計(jì)算：

校正死亡率=處理組死亡率-對(duì)照死亡率/1-對(duì)照死亡率×100%

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 參照文獻(xiàn)[8]通過SPSS 17.0軟件對(duì)不同精油濃度條件下的致死率進(jìn)行處理，分別得出兩種蚊蟲IV齡幼蟲和蛹的LC50，回歸方程，95%置信區(qū)間(95% CI)，卡方值。

2 結(jié) 果

毒殺實(shí)驗(yàn)中，將幼蟲或蛹放入珊瑚姜精油稀釋液后，幼蟲開始運(yùn)動(dòng)加快后漸漸沉入瓶底死亡。兩種蚊的幼蟲后蟲體稍彎，頭尾呈灰黑色，兩種蚊的蛹身體松弛，尾部直伸，體長增加，而致倦庫蚊身色變黃。乙醇對(duì)照組和空白對(duì)照無個(gè)體死亡。珊瑚姜精油對(duì)白蚊伊蚊和致倦庫蚊幼蟲和蛹的毒殺結(jié)果表明(表2)：珊瑚姜精油對(duì)白紋伊蚊和致倦庫蚊IV齡幼蟲24 h的LC50分別為77.994和66.574 mg/L;對(duì)蛹24 h的LC50分別是299.164和204.857 mg/L。由此可見，珊瑚姜精油對(duì)白紋伊蚊和致倦庫蚊IV齡幼蟲的毒殺效果比其對(duì)蛹的毒殺效果顯著而且珊瑚姜精油對(duì)IV齡幼蟲LC50的濃度值遠(yuǎn)低于對(duì)蛹的LC50濃度值；珊瑚姜精油對(duì)致倦庫蚊的幼蟲和蛹的毒殺活性比對(duì)白紋伊蚊的強(qiáng)，即珊瑚姜精油的對(duì)致倦庫蚊的毒殺LC50比白紋伊蚊的毒殺LC50低。

表2 珊瑚姜精油對(duì)白紋伊蚊和致倦庫蚊IV齡幼蟲和蛹的毒殺活性

注：*死亡率與濃度之間的線性關(guān)系在0.05水平上有統(tǒng)計(jì)意義(P﹤0.05)。

3 討 論

珊瑚姜精油對(duì)兩種蚊的幼蟲和蛹具有明顯毒殺活性，但對(duì)兩種蚊蟲的毒殺活性存在差異，即致倦庫蚊幼蟲和蛹比白紋伊蚊幼蟲和蛹敏感，因此在實(shí)驗(yàn)過程中供試蚊蟲的種類對(duì)毒殺結(jié)果有很大的影響，同時(shí)也表明植物精油的殺蟲活性有一定的特異性。

WHO對(duì)植物殺蟲劑對(duì)蚊幼蟲殺蟲活性還沒有制定相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)S.S.Cheng等[9]對(duì)殺蟲活性分類標(biāo)準(zhǔn)來看，殺蟲活性判斷標(biāo)準(zhǔn)為：LC50>100 mg/L為無活性，LC50<100 mg/L為有活性，LC50<50 mg/L為具有較高活性。珊瑚姜對(duì)白蚊伊蚊和致倦庫蚊的IV齡幼蟲24 h LC50分別為77.994/66.574 μg/mL，均低于100 mg/L，表明珊瑚姜精油對(duì)兩種幼蟲均有毒殺活性。關(guān)于植物精油對(duì)蚊幼蟲和蛹的毒殺活性一直是蚊蟲防治研究中的熱點(diǎn)，研究[10-12]發(fā)現(xiàn)，嶺南花椒果實(shí)精油對(duì)白紋伊蚊IV齡幼蟲24 h的LC50值為163.42 μg/mL；竹葉花椒果實(shí)精油對(duì)白紋伊蚊和致倦庫蚊的24 h的LC50值分別為258.497/121.884 μg/mL；山蒼子精油對(duì)白蚊伊蚊24h的LC50為82.48 μg/mL；與以上植物精油相比，珊瑚姜精油精油對(duì)白紋伊蚊和致倦庫蚊幼蟲具有更強(qiáng)的毒殺活性，因此該精油在蚊幼蟲的生物防治方面具有更好的利用價(jià)值，更具開發(fā)成高效環(huán)保的植物源蚊蟲殺幼劑的潛力。

[1] Kiran SR, Devi PS. Evaluation of mosquitocidal activity of essential oil and sesquiterpenes from leaves of Chloroxylon swietenia DC[J]. Parastology Research, 2007, 101: 413-418.

[2] 曾冬琴，彭映輝，陳飛飛，等．小蓬草精油對(duì)兩種蚊蟲的毒殺活性和成分分析[J]．昆蟲學(xué)報(bào)，2014, 57(2): 205-206.

[3] Sharon SV, Diego FZ, Stelia CM, et al. Essential oils with insecticidal activity against larvae of Aedes aegypti (Diptera: Culicidae)[J]. Parasitology Research?2014, 113(7): 2647-2654.

[4] 盧鈺鐸,彭映輝,扶巧梅,等．福建柏精油對(duì)蚊蟲的生物活性[J]．農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)，2014, 16(3): 294-295.

[5] Choochote W, Chaiyasit D, Kanjanapothi D, et al. Chemical composition and antimosquito potential of rhizome extract and volatile oil derived from Curcuma aromatica against Aedes aegypti(Diptera：Culicidae)[J]．Journal of vector ecology, 2005, 30(2): 302.

[6] Veena P, Tripathi, AK, Aggarwal KK, et al. Insecticial, repellent and oviposition-deterrent activity of selected essential oils against Anopheles stephensi, Aedes aegypti and Culex quinquefasciatus[J]. Bioresource Technol, 2005, 96(16): 1749-1757.

[7] World Health Organization:Guidelines For Laboratory and field Testing Of Mosquito larvicides: WHO/CDS/WHOPES/GCDPP/2005: 13.

[8] 武懷橫，萬鵬，黃民松.毒力回歸方程計(jì)算方法及相應(yīng)軟件使用介紹[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42(27):9335-9338.

[9] Cheng SS, Cheng HT, Cheng ST, et al. Bioactivity of selected plant essential oils against the yellow fever mosquito Aedes aegypti larvae[J]. Bioresour Technol, 2003, 89: 99-102.

[10] 彭映輝，張?jiān)?，陳飛飛，等．嶺南花椒果實(shí)精油成分的分析以及對(duì)兩種蚊蟲的毒殺活性[J]．中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報(bào)，2010, 30(2): 60-63.

[11] 張?jiān)?，彭映輝，曾冬琴，等．竹葉花椒果實(shí)精油對(duì)兩種蚊蟲的毒殺活性研究[J]．廣西植物，2010, 30(2): 274-279.

[12] 陳飛飛，彭映輝，晏許超，等．山蒼子精油對(duì)白紋伊蚊的生物活性及其成分分析[J]．中國生物防治學(xué)報(bào)，2012, 28(4): 521-527.

貴州省科技廳與貴陽醫(yī)學(xué)院聯(lián)合基金(黔科合LG字[2012]15號(hào))

R931

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2015-10-09)

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