饒騰子 李玲 鐘燕芳 劉倩 魏然

(廣東省婦幼保健院 醫(yī)學(xué)遺傳中心，廣東 廣州 510010)

孕早期淋巴水囊瘤胎兒的絨毛染色體及微陣列結(jié)果分析

饒騰子 李玲 鐘燕芳 劉倩 魏然*

(廣東省婦幼保健院 醫(yī)學(xué)遺傳中心，廣東 廣州 510010)

目的 分析孕早期超聲發(fā)現(xiàn)的單純性淋巴水囊瘤胎兒的絨毛染色體及微陣列結(jié)果，為遺傳咨詢提供依據(jù)。方法 納入孕14周前超聲診斷為單純性淋巴水囊瘤并行絨毛穿刺產(chǎn)前診斷的單胎妊娠胎兒?；仡櫺苑治銎淙旧w及微陣列結(jié)果。結(jié)果 29例胎兒中，共有21例(72%)胎兒染色體異常，其中18例為染色體非整倍體異常，1例為環(huán)狀染色體，1例為染色體易位，1例為染色體部分重復(fù)。微陣列結(jié)果中，共有22例(76%)異常。結(jié)論 早孕期超聲診斷為單純性淋巴水囊瘤胎兒染色體異常率較高，array-CGH檢查有助于明確染色體異常中的具體片段及可能包含的致病基因。染色體核型分析仍是單純性淋巴水囊瘤胎兒查找病因的重要方式。

淋巴水囊瘤；產(chǎn)前診斷；染色體核型分析；微陣列

隨著早孕NT超聲的開展，許多胎兒異常得以在早孕期被發(fā)現(xiàn)，廣東地區(qū)已普遍開展在孕11～13周行胎兒NT超聲檢查。因此，胎兒淋巴水囊瘤的早期檢出率有所提高。孕婦在得知胎兒患淋巴水囊瘤未合并其他異常時(shí)，常糾結(jié)于胎兒去留問(wèn)題，本文擬分析孕早期發(fā)現(xiàn)的單純淋巴水囊瘤未合并其他異常胎兒的染色體及微陣列檢查結(jié)果，擬更好為此類胎兒做好遺傳咨詢工作。

1 資料與方法

1.1 基本資料 2003 年 1 月至 2016 年6月在本院行產(chǎn)前超聲檢查的單胎孕婦中發(fā)現(xiàn)的胎兒淋巴水囊瘤 29例，納入其中的胎兒為單純淋巴水囊瘤，未合并其余異常胎兒。孕婦年齡 22～43 歲，平均(28.89±6.13)歲，孕周 11～14周，平均(12.83±0.70)周。29例孕婦均要求進(jìn)行絨毛穿刺產(chǎn)前診斷行胎兒染色體核型分析及array-CGH分析。

1.2 儀器與方法 采用GE Voluson E8與GE Voluson730 expert彩色多普勒超聲診斷儀，腹部凸陣探頭頻率均為3～8 MHz。實(shí)驗(yàn)室檢查包括染色體核型分析和微陣列芯片比較基因組雜交技術(shù)(array-CGH)。常規(guī)操作進(jìn)行培養(yǎng)、收獲、制片和G顯帶，全自動(dòng)掃描儀掃描、拍照。按照人類細(xì)胞遺傳學(xué)國(guó)際命名體制(ISCN2009)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行G顯帶染色體核型分析診斷。必要時(shí)加做C顯帶、N顯帶；同時(shí)使用agilent公司生產(chǎn)的8×60k的芯片進(jìn)行全基因組掃描檢測(cè)，數(shù)據(jù)分析參照DECIPHER、ISCA、OMIM、DGV、UCSC等數(shù)據(jù)庫(kù)。

1.2.1 于11～14周行胎兒頸項(xiàng)透明層(nuchal translucency，NT) 厚度測(cè)量，受檢孕婦取仰臥位，胎兒自然屈曲姿勢(shì)，取正中矢狀切面進(jìn)行測(cè)量，聲束垂直頸背部皮膚，顯示頸后部皮下組織、皮膚、羊膜形成的 3 條強(qiáng)回聲帶，測(cè)量胎兒頸部皮膚與脊椎表面軟組織之間無(wú)回聲區(qū)最大徑，同時(shí)觀察胎兒顱內(nèi)結(jié)構(gòu)、鼻骨、心臟、胃泡、膀胱、臍帶腹壁入口及雙側(cè)上下肢。

1.2.2 當(dāng)超聲檢出單胎胎兒頸項(xiàng)部或身體其他體表部位的雙層囊性結(jié)構(gòu)，伴 1 個(gè)至多個(gè)典型分隔時(shí)，診斷為胎兒淋巴水囊瘤[1]； 此時(shí)，納入單胎并診斷為單純?yōu)榱馨退伊鑫春喜⑵渌惓５奶骸?/p>

1.2.3 分析在孕11～14周行胎盤絨毛行染色體G顯帶核型分析及array-CGH分析的胎兒資料。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用 SPSS13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，采用(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)對(duì)連續(xù)型變量進(jìn)行描述，采用構(gòu)成比(%)對(duì)分類變量進(jìn)行描述。

2 結(jié)果

2.1 染色體核型分析 29例淋巴水囊瘤胎兒中，18例(62%)為染色體核型為非整倍體異常。其中包括9例X單體，1例13-三體，3例21-三體，4例18-三體，1例47,XYY。另有3例(10%)其余染色體異常，其中1例檢出環(huán)狀染色體，46，XN，r(13)(9？11.2q?34)，1例檢出染色體易位，46,XN,?t(3;13)(q27;q22)。1例檢出重復(fù)，46,XN,dup(2)(p16p22)。見表1。

2.2 CMA檢測(cè)結(jié)果 Array-CGH檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，除了18例胎兒染色體非整倍體異常外，有4 例胎兒檢出致病性 CNVs，檢出率為76%(22/29)。見表 1。

表1 胎兒絨毛染色體G顯帶及array-CGH陽(yáng)性結(jié)果

3 討論

胎兒淋巴系統(tǒng)從孕 10 周開始發(fā)育，由散在的原始淋巴囊發(fā)展形成淋巴管，至孕 14 周左右淋巴系統(tǒng)發(fā)育完全，全身淋巴回流入頸部的胸導(dǎo)管和右淋巴管，于頸內(nèi)靜脈與鎖骨下靜脈之間的夾角處匯入左右頭臂靜脈。淋巴系統(tǒng)發(fā)育健全前，少部分淋巴液可能積聚于頸淋巴囊或淋巴管內(nèi)，形成頸項(xiàng)透明層。孕 14 周發(fā)育完善后，淋巴系統(tǒng)迅速將聚集于此的淋巴液引流至靜脈系統(tǒng)，頸項(xiàng)透明層隨之消失。淋巴系統(tǒng)發(fā)育缺陷或各種原因?qū)е碌奶红o脈壓升高，致淋巴回流障礙均可引起胎兒頸項(xiàng)透明層顯著增厚，表現(xiàn)胎兒頸部直至全身的水囊樣改變[1-3]。

胎兒淋巴水囊瘤在胎兒發(fā)育異常中較為常見, 其發(fā)病率約為1/6000[4]。Olivier G等[5]認(rèn)為，淋巴水囊瘤預(yù)后不佳。即使染色體核型正常者，也容易發(fā)生流產(chǎn)或胎死宮內(nèi)，若繼續(xù)妊娠，發(fā)育至妊娠晚期，易伴發(fā)心臟、骨骼及肺的畸形。大多數(shù) Turner 綜合征胎兒在早孕期或中孕早期即胎死宮內(nèi)，只有少數(shù)可以存活至出生[6]。孕早期超聲發(fā)現(xiàn)胎兒淋巴水囊瘤，部分患者會(huì)選擇直接終止妊娠，隨著產(chǎn)前診斷技術(shù)的廣泛開展，越來(lái)越多的淋巴水囊瘤胎兒得以在早孕期被檢出，同時(shí)及時(shí)行介入性產(chǎn)前診斷查找可能的病因。本文納入29例在孕11～13+周常規(guī)行NT檢查過(guò)程中發(fā)現(xiàn)胎兒淋巴水囊瘤，并在孕14周前行絨毛穿刺產(chǎn)前診斷行胎兒染色體及微陣列分析。染色體異常率高達(dá)72%，與凌晨等[7]報(bào)道的胎兒染色體異常率接近。染色體異常胎兒中，有18例為染色體非整倍體異常，其中包括9例X單體，1例13三體，3例21三體，4例18三體，1例47，XYY。Malone FD及Kharrat R等[8,9]認(rèn)為，第一孕期出現(xiàn)的胎兒淋巴水囊瘤染色體三體異常的比例之和高于 Turner 綜合征。本文18例染色體非整倍體異常中，Turner綜合征有9例，其余9例為各種染色體三體異常，兩者比例相等。

除了18例胎兒染色體非整倍體異常之外，絨毛染色體G顯帶技術(shù)結(jié)合array-CGH技術(shù)另外檢出3例其他染色體異常。1例絨毛染色體提示13號(hào)環(huán)狀染色體(46，XN，r(13)(9？11.2q?34))，array-CGH結(jié)果提示13染色體13q31.1-q31.3位置發(fā)生重復(fù)，片段大小約14.9Mb。該區(qū)域包含基因10個(gè)，其中OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)收錄致病基因4個(gè)，分別為SLITRK1、SLITRK6、MIRHG1、GPC6。數(shù)據(jù)庫(kù)未檢索到類似片段重復(fù)的個(gè)案報(bào)道，由于重復(fù)區(qū)域較大，考慮可能為致病性CNV。1例絨毛染色體易位(46,XN,?t(3;13)(q27;q22))，array-CGH提示：結(jié)果發(fā)現(xiàn) 2 處染色體變異。3 號(hào)染色體長(zhǎng)臂 q28-q29 位置發(fā)生復(fù)制，片段大小約 9.13Mb。13 號(hào)染色體長(zhǎng)臂 q22.2-q34 位置發(fā)生缺失，片段大小約 39.4Mb。3 號(hào)染色體長(zhǎng)臂部分三體和 13 號(hào)染色體長(zhǎng)臂部分單體可引起胎兒發(fā)育遲緩、智力低下、肌張力減退、進(jìn)行性腦病等癥狀；13q22.2q34 缺失也可能會(huì)引起 Dandy-Walker 綜合征。該結(jié)果提示夫妻一方可能存在 3 號(hào)和 13 號(hào)染色體平衡易位。1例絨毛染色體提示重復(fù)(46，XN,dup(2)(p16p22))，array-CHG結(jié)果提示2號(hào)染色體2p16.2-p22.3位置發(fā)生重復(fù)，片段大小約20.0Mb。2p16-p22位置染色體重復(fù)可能與生長(zhǎng)發(fā)育遲緩、特殊面容等有關(guān)(PMID:24115558)。對(duì)于胎兒染色體異常情況，Array-CGH對(duì)拷貝數(shù)異常定位更準(zhǔn)確，進(jìn)一步明確該異常是否打斷了編碼基因，是否在斷裂點(diǎn)附近存在小片段的缺失與重復(fù)，這些均對(duì)我們?cè)u(píng)估胎兒預(yù)后提供了可靠的信息，有利于遺傳咨詢，故對(duì)臨床有重要的指導(dǎo)意義[10|。

在1例絨毛染色體正常胎兒中，array-CHG結(jié)果提示2處染色體異常；在10號(hào)染色體10q26.2-q26.3位置發(fā)生缺失，片段大小約7.74Mb。10q26區(qū)域大片段缺失與患者多種先天性畸形和中度精神發(fā)育遲滯有關(guān)(PMID:9894164)；在22號(hào)染色體22q13.1-q13.33位置發(fā)生重復(fù)，片段大小約10.60Mb。該區(qū)域重復(fù)與患者小頭畸型、肌張力低下、發(fā)育遲緩、特殊面部等癥狀有關(guān)(PMID: 22378673)。

29例早孕期發(fā)現(xiàn)的淋巴水囊瘤胎兒中，染色體非整倍體異常18例，在3例染色體非整倍體異常的胎兒中，利用array-CGH技術(shù)發(fā)現(xiàn)了明確的異常位點(diǎn)及大小。另有1例染色體正常胎兒中，利用array-CGH技術(shù)發(fā)現(xiàn)了明確異常。微陣列比較基因組雜交(arraycomparative genomie hybridization，array-CGH)技術(shù)是在CGH技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的新的染色體病診斷技術(shù)，分辨率高，可以檢測(cè)到一些核型分析檢測(cè)不到的染色體的微小缺失或重復(fù)，是研究整個(gè)基因組缺失或重復(fù)的非常有應(yīng)用價(jià)值的分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)[11]。因此Array-CGH技術(shù)結(jié)合染色體分析，可以幫助明確染色體異常區(qū)帶及可能包含的致病基因，兩者的結(jié)合，對(duì)早孕期發(fā)現(xiàn)的單純性淋巴水囊瘤能進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)病因。但從我們的結(jié)果中較高的染色體異常率可以發(fā)現(xiàn)，染色體核型分析仍是單純性淋巴水囊瘤胎兒查找病因的重要方式。

本文納入的29例行絨毛穿刺胎兒，全部絨毛培養(yǎng)成功，但也有部分胎兒因絨毛培養(yǎng)失敗未成功完成染色體檢查而未納入分析的病例。但鑒于早孕期發(fā)現(xiàn)的淋巴水囊瘤胎兒經(jīng)染色體及array-CHG檢查后，異常陽(yáng)性率較高，對(duì)于早孕期發(fā)現(xiàn)的淋巴水囊瘤胎兒，我們建議在與家屬充分溝通絨毛穿刺風(fēng)險(xiǎn)及培養(yǎng)失敗可能的基礎(chǔ)上，應(yīng)積極完善絨毛染色體檢查，以明確可能的病因，并對(duì)胎兒的遺傳咨詢提供充分的依據(jù)。

[1] 李勝利.胎兒產(chǎn)前診斷教程[M].2 版.北京:人民軍醫(yī)出版社，2009: 267-268.

[2] Dario P, Paolo V. Ultrasound of congenital fetal anomalies：differential diagnosis and prognostic indicators[M].2nd ed. Florida: CRC Press. 2014.

[3] 嚴(yán)英榴．產(chǎn)前超聲診斷學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2003.

[4] 李映桃.胎兒頸部囊性淋巴瘤.中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜.2005, 13(3): 130.

[5] Olivier G，Emilie D，Elisabeth A.Characteristics and outcome of fetal cystic hygroma diagnosed in the first trimester.Acta ObstetGynecol Scand，2007，86( 12) : 1442-1446．

[6] Dario P，Paolo V．Ultrasound of congenital fetal anomalies differential diagnosis and prognostic indicators.Informa UK Ltd，2007:301-311．

[7] 凌晨，鄧學(xué)東，劉一琳，等． 胎兒淋巴水囊瘤超聲診斷聯(lián)合染色體核型分析[J/CD]． 中華醫(yī)學(xué)超聲雜志:電子版，2011，8(4) : 838-842．

[8] Malone FD，Ball RH，Nyberg DA，et al． First-trimester septated cystic hygroma: prevalence，natural history，and pediatric out-come[J]． Obstet Gynecol，2005，106(2) : 288-294．

[9] Kharrat R,Yamamoto M，Roume J，et al．Karyotype and outcome of fetuses diagnosed with cystic hygroma in the first trimester inrelation to nuchal translucency thickness[J]．Prenat Diagn，2006，26(4):369-372．

[10] 周祎，謝英俊．染色體微陣列技術(shù)在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用[J]．實(shí)用婦產(chǎn)科雜志，2013，29(5)：328-330．

[11] Stumm M，Klopocki E，Gasiorek-Wiens A，et a1.Molecular cytogenetic characterisation of an interstitial deletion 12p detected by prenatal diagnosis[J]．Prenat Diagn，2007，27(5)：475-478．

編輯：宋文穎

Objective To provide the basis for genetic counseling of fetus with cystic hygroma, we analyzed the karyotypes and array-CGH outcomes of fetus with cystic hygroma which was diagnosed by ultrasound before 14 weeks. Method We retrospectively analyzed the karyotypes and array-CGH outcomes of single fetus with cystic hygroma which was diognosed by ultrasound before 14 weeks.All these fetus took chorionic villus for prenatal diagnosis. Results 29 cases of fetus, 21 cases (72%) of fetus had chromosomal abnormalities, including 18 cases of abnormal chromosome aneuploidy, 1 case of ring chromosome, 1 cases of chromosome translocation, 1 cases of chromosome repeat. As to the results of array-CGH，22 cases (76%) were CNVs．Conclusions The chromosome abnormality rate was rather high in the single fetus with cystic hygroma which was diognosed by ultrasound before 14 weeks. Array-CGH was helpful to confirm the specific chromosomal abnormalities and pathogenic gene. Karyotype analysis was still the important way to find the cause of fetus with cystic hygroma.

lymphatic hygroma；prenatal diagnosis；karyotype analysis；array-CGH

10.13470/j.cnki.cjpd.2016.04.015

R714.55

A

2016-11-01)

*通訊作者：魏然，E-mail：wr831@163.com