吳海港，劉錦妮，徐光科，劉紀(jì)成，易本馳

(信陽(yáng)農(nóng)林學(xué)院，河南信陽(yáng) 464000)

防治犬真菌性皮膚病中藥軟膏劑的制備及質(zhì)量評(píng)價(jià)

吳海港，劉錦妮，徐光科，劉紀(jì)成，易本馳*

(信陽(yáng)農(nóng)林學(xué)院，河南信陽(yáng) 464000)

為尋找安全有效防治犬真菌性皮膚病的臨床藥物，采用乳化法制備出防治犬真菌性皮膚病的復(fù)方中藥軟膏劑，并通過對(duì)中藥軟膏的外觀性狀、穩(wěn)定性、刺激性、局部致敏性等質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。試驗(yàn)結(jié)果表明，本試驗(yàn)制備的中藥軟膏劑外觀細(xì)膩，質(zhì)地均勻，質(zhì)量穩(wěn)定，無明顯急性毒性反應(yīng)、無刺激性、不產(chǎn)生局部及全身過敏反應(yīng)。

中藥軟膏；真菌性皮膚??；犬；質(zhì)量評(píng)價(jià)

在獸醫(yī)臨床實(shí)踐中，犬真菌性皮膚病是一種十分常見和多發(fā)的疾病，平均發(fā)病率約為10%～40%[1]，其病程長(zhǎng)、治愈難、易復(fù)發(fā)，并可在動(dòng)物與動(dòng)物，人與人、人與動(dòng)物間互相傳播，造成嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題[2]。犬真菌性皮膚病的傳統(tǒng)治療措施為抗菌消炎，改善環(huán)境，增強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體的抵抗力[3]。隨著抗真菌藥物長(zhǎng)期大量的使用，真菌抗藥性和藥物殘留等問題引出普遍關(guān)注，因此選擇對(duì)病原微生物敏感、抑菌強(qiáng)度大、特異性高、穩(wěn)定性好的新型藥物來防治犬真菌性皮膚病，已成為寵物健康發(fā)展的一個(gè)重要課題。由于中藥屬于純天然物質(zhì)，標(biāo)本兼治，毒性低，無殘留，不產(chǎn)生抗藥性，克服了抗生素的某些不足[4]，已日益為專家學(xué)者所重視。

中獸醫(yī)理論認(rèn)為，犬真菌性皮膚病的致病因素主要是濕、熱、蟲、毒。由于濕邪粘滯，病情纏綿，反復(fù)難愈。日久則傷津耗血。癖阻脈絡(luò)，致血不榮膚。中獸醫(yī)治療該病，主要選擇殺蟲止癢，清熱燥濕劑，以外治法為主，輔以內(nèi)治[5]。本試驗(yàn)以蛇床子、苦參、川楝子、土茯苓、川芎、白芷、冰片等為主要處方成分，研制出一種在真菌性皮膚病治療中易于涂布、透氣性好、療效確切、性質(zhì)穩(wěn)定的中藥軟膏制劑。同時(shí)根據(jù)獸用制劑臨床研究要求，對(duì)復(fù)方抗真菌軟膏的制劑工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、制劑穩(wěn)定性等進(jìn)行科學(xué)研究，為臨床犬真菌性皮膚病防治提供安全有效藥物奠定理論依據(jù)。

1 材料

1.1 藥品與試劑 蛇床子、苦參、川楝子等中藥購(gòu)于信陽(yáng)市醫(yī)藥公司；硬脂酸、單硬脂酸甘油醋、白凡士林、羊毛脂、氮酮等試劑均為上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 家兔6只，雌雄各半，體重(2.5±0.2)kg；豚鼠8只，雌雄各半，體重(250±20)g；均由信陽(yáng)職業(yè)技術(shù)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.3 儀器 GS12-2電子恒速攪拌機(jī)(上海醫(yī)械機(jī)廠)；電熱套(上海越眾儀器設(shè)備有限公司)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(北京萊伯泰科儀器股份有限公司)；電熱恒溫水浴鍋(上海醫(yī)療器械五廠)。

2 方法

2.1 中藥軟膏劑處方 中藥浸膏25.0 g、硬脂酸10.0 g、單硬脂酸甘油脂3 g、液體石蠟5 g、凡士林2 g、羊毛脂5.0 g，三乙醇胺0.7 g、尼泊金乙酯0.5 g、氮酮1.0 g、蒸餾水加至100 g。

2.2 中藥浸膏的制備 按照處方稱取蛇床子100份、苦參80份、川楝子50份、土茯苓40份、川芎20份、白芷20份、冰片10份、斑蝥3份，粉碎后加65%乙醇煎煮2次，每次2 h，濾過，合并濾液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，85 ℃濃縮至半流體稠膏狀濃縮，然后將半流體稠膏狀置于80 ℃水浴中加熱至稠膏，備用。

2.3 中藥軟膏劑的制備 參考文獻(xiàn)方法[6]，按比例稱取硬脂酸、單甘脂、液體石蠟、凡士林、羊毛脂、氮酮置容器內(nèi)，水浴加熱至熔化，于水浴鍋上70 ℃～80 ℃保溫，作為油相；將三乙醇胺、尼泊金乙酯、蒸餾水，加熱至完全溶解，作為水相。將水相緩慢倒入油相中，攪拌均勻后加入中藥浸膏，邊加邊攪拌，至乳化完全，放冷即得。

2.4 中藥軟膏劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

2.4.1 中藥軟膏劑的穩(wěn)定性試驗(yàn)

2.4.1.1 離心試驗(yàn) 取中藥軟膏劑10 g放入帶刻度離心管中，3000 r/min離心30 min，觀察有無分層及破乳現(xiàn)象。

2.4.1.2 耐寒耐熱試驗(yàn) 將中藥軟膏劑置于離心管內(nèi)，分別置50 ℃恒溫箱6 h和-20 ℃冰箱24 h，觀察有無分層破乳、霉敗以及色澤、均勻性改變等現(xiàn)象。2.4.1.3 加速試驗(yàn) 將中藥軟膏劑裝入離心管內(nèi)，置于溫度為(45±2) ℃、相對(duì)濕度為75%的恒溫培養(yǎng)箱中，連續(xù)放置3個(gè)月，定期考察，觀察有無分層破乳、霉敗以及色澤、均勻性改變等現(xiàn)象。

2.4.2 中藥軟膏劑的安全性試驗(yàn)[7]

2.4.2.1 刺激性試驗(yàn) 取體重相近的白色家兔，脫毛后將無破損皮膚家兔分為完整皮膚給藥組和破損皮膚給藥組，每組3只。試驗(yàn)組家兔用使用無菌大頭針劃破表皮，不傷及真皮，以皮膚出現(xiàn)輕度滲血為度。2組家兔右側(cè)脫毛區(qū)每天涂藥2次，每次涂抹1 g，并用無刺激性膠布固定，左側(cè)涂生理鹽水2 mL作陰性對(duì)照，并分籠飼養(yǎng)，連續(xù)用藥7 d，在最后一次給藥12 h后取下包扎，分別在除去藥物1、6、12、24、48、72、120 h觀察皮膚有無紅斑和水腫現(xiàn)象，并按照表1進(jìn)行刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)。

2.4.2.2 過敏性試驗(yàn) 取白色豚鼠8只，硫化鈉脫毛，選皮膚無破損的豚鼠隨機(jī)分成兩組，既對(duì)照組和試驗(yàn)組，每組4只。試驗(yàn)組豚鼠右側(cè)脫毛區(qū)涂1 g中藥乳膏劑，對(duì)照組豚鼠右側(cè)脫毛區(qū)滴加濃度1%2，4-二硝基氯苯0.2 mL，左側(cè)涂生理鹽水2 mL為陰性對(duì)照，并用無刺激性膠布固定。隔日致敏1次，共3次，于每次致敏后6 h去除固定物并觀察皮膚有無紅斑、水腫等皮膚過敏反應(yīng)出現(xiàn)，并按照表2進(jìn)行評(píng)價(jià)分析。

表1 皮膚刺激反應(yīng)及評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

表2 皮膚過敏反應(yīng)及評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

3 試驗(yàn)結(jié)果

3.1 中藥軟膏劑外觀狀況 本試驗(yàn)所制備的中藥軟膏劑外觀細(xì)膩，黃褐色，稠度適宜，易涂布。

3.2 中藥軟膏劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)結(jié)果

3.2.1 中藥軟膏劑的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果 本試驗(yàn)制備的中藥軟膏劑具有良好的穩(wěn)定性，離心試驗(yàn)、耐寒耐熱試驗(yàn)與加速試驗(yàn)中均未見乳膏出現(xiàn)分層破乳、霉敗以及色澤、均勻性改變等現(xiàn)象。

圖1 耐熱試驗(yàn)結(jié)果

圖2 耐寒試驗(yàn)結(jié)果

3.2.2 中藥軟膏劑的安全性試驗(yàn)結(jié)果

3.2.2.1 中藥軟膏劑的刺激性試驗(yàn)結(jié)果。 中藥軟膏劑對(duì)皮膚刺激性試驗(yàn)結(jié)果見表3。結(jié)果顯示：完整皮膚給藥組受試兔皮膚未出現(xiàn)充血和水腫，破損皮膚給藥組受試兔皮膚未出現(xiàn)水腫，但表現(xiàn)出輕微紅斑，紅斑在6 h內(nèi)均消褪。在試驗(yàn)的一周內(nèi)，6只兔子精神良好，采食、尿液及糞便均正常，未見中毒或異常癥狀。

圖3 加速試驗(yàn)結(jié)果

圖4 加速試驗(yàn)結(jié)果

時(shí)間完整皮膚組損失皮膚組充血水腫充血水腫1h000.606h000012h000024h000048h000072h0000120h0000

3.2.2.2 中藥軟膏劑的過敏性試驗(yàn)結(jié)果 中藥軟膏劑對(duì)皮膚過敏性試驗(yàn)結(jié)果見表4，結(jié)果顯示：試驗(yàn)組豚鼠未出現(xiàn)紅斑、水腫、休克等過敏癥狀。對(duì)照組豚鼠局部出現(xiàn)重度充血及水腫，而且還表現(xiàn)出疼痛、不安、躲閃等現(xiàn)象。

表4 中藥軟膏劑皮膚過敏性試驗(yàn)結(jié)果

4 討論

4.1 中藥軟膏劑的制備 臨床中使用的軟膏基質(zhì)主要分為三類，既油脂性、乳劑型和水溶性基質(zhì)，在三種基質(zhì)中以乳劑型基質(zhì)中的藥物釋放、穿透、吸收速度最快，其次是油/水(o/w)型基質(zhì)，藥物的釋放和穿透最慢的為水/油(w/o)型基質(zhì)[8]，因此本試驗(yàn)中采用油/水(o/w)型基質(zhì)進(jìn)行中藥軟膏的配制。通常情況下藥物在軟膏中溶解狀態(tài)比混懸狀態(tài)有較好的透皮效果，所以研究采用將中藥提取液溶于水中，作為水相制成乳膏的方法。乳化方法采用連續(xù)相加到分散相中，水相緩緩加入油相，開始形成w/o，當(dāng)繼續(xù)加入水相時(shí)，乳劑轉(zhuǎn)型，而形成o/w，從而產(chǎn)生更為細(xì)小的分散相粒子，以達(dá)到更好的透皮效果。

4.2 中藥軟膏劑質(zhì)量評(píng)價(jià) 中藥制劑具有相對(duì)的安全性，但是中藥的成分十分復(fù)雜，一些成份有可能引發(fā)過敏反應(yīng)或毒副作用，甚至引起變應(yīng)性皮膚病，重者危及生命，因此有必要對(duì)中藥安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)。軟膏劑是外用制劑，臨床用以患部涂擦，臨床應(yīng)用中可能會(huì)出現(xiàn)局部刺激性反應(yīng)，因此外用藥物臨床用藥前毒理學(xué)評(píng)價(jià)主要以考察其皮膚刺激性[9-10]。本試驗(yàn)選擇家兔和豚鼠為模型，考察中藥軟膏劑的刺激性和過敏性，試驗(yàn)結(jié)果顯示完整皮膚組受試兔在藥物處理后未表現(xiàn)刺激和毒性反應(yīng)，而受損皮膚組有輕微刺激表現(xiàn)，但在藥物去除6 h后表現(xiàn)正常，且無毒性反應(yīng)，這和文獻(xiàn)報(bào)道外用制劑對(duì)破損皮膚有輕度的刺激相一致[11]。試驗(yàn)組豚鼠未出現(xiàn)充血、水腫、哮喘或體克的現(xiàn)象等過敏反應(yīng)，表明此中藥軟膏劑對(duì)豚鼠無致敏性。

本試驗(yàn)制備的中藥軟膏色澤均勻，質(zhì)地細(xì)膩，粘稠度適當(dāng)，易于涂布皮膚，而且穩(wěn)定性高、無致敏性、無刺激性，具有良好的開發(fā)應(yīng)用前景。

[1] 賀星亮．某犬場(chǎng)犬主要體外寄生蟲和皮膚病調(diào)查及采取的措施[D]．南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，2003.

[2] Slesenop U,Busse M,Bohn K H.The importance of dematophytsis in dogs and cats areviav of 11 year of routine mycological diagnostic work[J]．Kleintierpraxls,1996 41 (7):483-491.

[3] 金藝鵬，林德貴．鹽酸特比萘芬對(duì)犬貓皮膚真菌病的療效觀察[J]．中國(guó)獸醫(yī)雜志，2003，39(06)：21-23.

[4] 周秋平，范小平．簡(jiǎn)述真菌性疾病治療藥物的臨床應(yīng)用[J]．中國(guó)獸藥雜志，2003，37(9)：56-57.

[5] 劉鐘杰，許劍琴．中獸醫(yī)學(xué)[M]．北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2003.

[6] 梁煜霞，李萍．苦參軟膏的制備及質(zhì)量評(píng)價(jià)[J]．國(guó)際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報(bào)，2012，18(1)：77-79.

[7] 黃芝瑛．中藥新藥一般毒理試驗(yàn)及評(píng)價(jià)[J]．藥品評(píng)價(jià)，2004，1(1)：50-52.

[8] 張志榮．藥劑學(xué)[M]．北京：高等教育出版社，2013.

[9] 郝智慧，張瑞麗，劉元元，等．復(fù)方氟康唑軟膏對(duì)家兔皮膚的刺激性觀察[J]．中國(guó)獸藥雜志，2012，46(8)：17-19.

[10]顧亞鳳．蠅蛆油對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物皮膚的刺激性、過敏性及燙傷治療藥效研究[J]．中國(guó)獸藥雜志，2004，38(10)：16-17，38.

[11]馬琪．犬皮膚真菌病治療藥物的篩選與臨床療效試驗(yàn)[D]．南京農(nóng)業(yè)大學(xué).2008.

(編輯：陳希)

Preparation and Quality Control of Prepared Traditional Chinese Herbal Medicines Ointment for Canine Dermatomycosis

WU Hai-gang, LIU Jin-ni, XU Guang-ke, LIU Ji-cheng, YI Ben-chi*

(XinyangCollegeofAgriculturalAndForestry,Xinyang,Henan, 464000)

In this stduies,To prepare traditional Chinese herbal medicines ointment for canine dermatomycosis,and the emulsification method was prepared.In order to formulate a quality standard and establish its quality control method,The cutaneous acute toxicity, irritation and allergic tests were carried out on guinea pig to appraisement the security evaluation. Traditional Chinese herbal medicines ointment has exquisite appearance, homogeneous structure, stable quality. No significant acute toxicity,no irritation,no local or systemic allergic reactions were found in guinea pig and with a good developing prospect.

traditional Chinese medicine ointment; canine; dermatoycosis;quality appraisemen

信陽(yáng)農(nóng)林學(xué)院青年教師基金項(xiàng)目(201401019);大別山區(qū)動(dòng)物重大疫病綜合防控技術(shù)科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(CXTD-201602)

吳海港，講師，碩士研究生，從事獸醫(yī)臨床藥理學(xué)研究及教學(xué)。

易本馳。 E-mail：benchi@126.com

2013-08-08

A

1002-1280 (2016) 05-0052-05

S852.65