王玉坤，馮將，魏玉好，胡冰野，楊夜陽(yáng)，姜玲玲，周思旋2,，王魯

(1.貴州大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴陽(yáng) 550025；2. 貴州省生化工程中心，貴陽(yáng) 550025；3. 貴州省畜牧獸醫(yī)研究所，貴陽(yáng) 550005)

止痢散及其拆方對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)的影響

王玉坤1,2，馮將1,2，魏玉好1,2，胡冰野1,2，楊夜陽(yáng)1,2，姜玲玲3，周思旋2,3，王魯2*

(1.貴州大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴陽(yáng) 550025；2. 貴州省生化工程中心，貴陽(yáng) 550025；3. 貴州省畜牧獸醫(yī)研究所，貴陽(yáng) 550005)

為了研究家畜新獸藥止痢散及其拆方中多葉勾兒茶、地榆和烏藥組方對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)的影響，評(píng)價(jià)家畜新獸藥止痢散及其拆方的抗腹瀉作用并初步探索其抗腹瀉的作用機(jī)制，采用動(dòng)物模型觀察止痢散及其多葉勾兒茶、地榆和烏藥組方的抗腹瀉效果，對(duì)正?；蛐滤沟拿髦挛改c痙攣小鼠腸推進(jìn)、胃殘留率的影響，對(duì)家兔離體回腸平滑肌收縮活動(dòng)的影響。結(jié)果表明，止痢散及多地組、多地烏組都可極顯著減少小鼠腹瀉次數(shù)(P<0.01)；同時(shí)可顯著減少正常小鼠腸推進(jìn)率和胃排空率(P<0.01)；但不能顯著減少新斯的明致胃腸痙攣模型小鼠腸推進(jìn)率和胃排空率(P>0.05)。止痢散及多地組、多地烏組都可顯著減小家兔離體回腸平滑肌收縮張力的變化(P<0.01)。綜上所述，止痢散及其拆方的抗腹瀉作用是與其抑制腸推進(jìn)和胃排空，減小腸平滑肌收縮張力有關(guān)，但都不能對(duì)抗痙攣性胃腸運(yùn)動(dòng)，止痢散的這一作用與方劑中的多葉勾兒茶、地榆和烏藥關(guān)系密切，這為止痢散的組方和在臨床上的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供了數(shù)據(jù)參考。

止痢散；拆方；腸推進(jìn)；胃殘留率

家畜止痢散是以多葉勾兒茶為主要組成輔以地榆、烏藥等中草藥組合的新復(fù)方中藥制劑。多葉勾兒茶作為傳統(tǒng)中藥，具有清肺化痰功效，現(xiàn)代藥理研究表明其具有保肝、抑菌、止咳平喘、抑制酶活性等多種作用[1]。地榆作為傳統(tǒng)中藥，其味苦酸，性寒，入肝、大腸經(jīng)[2]，藥理作用主要有止血、止吐、抗炎、抑菌、抗實(shí)驗(yàn)性腹瀉[3]和對(duì)離體兔腸，低濃度使收縮減弱，高濃度則使收縮加強(qiáng)，甚至呈痙攣狀態(tài)[2]等。烏藥作為傳統(tǒng)中藥，其味辛帶微苦，性溫，藥理作用主要有抗炎鎮(zhèn)痛、促進(jìn)胃腸動(dòng)力、緩解胃腸痙攣和抑制潰瘍等[4]。前期研究表明家畜新獸藥止痢散具有明顯的抑菌效果且抗菌成分較穩(wěn)定，不易被熱、酸、堿等所破壞。對(duì)仔豬腹瀉、牛羊腹瀉具有較好的治療效果[5]，具有抗腹瀉的作用與其抑制胃腸運(yùn)動(dòng)有關(guān)，但不能對(duì)抗痙攣的胃腸運(yùn)動(dòng)[6]。本文進(jìn)一步觀察了止痢散及多葉勾兒茶、地榆和烏藥組方對(duì)在體正常及胃腸痙攣小鼠胃排空、腸推進(jìn)的影響和對(duì)家兔離體回腸平滑肌收縮活動(dòng)的影響，以期評(píng)價(jià)多葉勾兒茶、地榆和烏藥對(duì)止痢散的抗腹瀉貢獻(xiàn)，為多葉勾兒茶在抗腹瀉方面的研究填補(bǔ)了數(shù)據(jù)，同時(shí)為止痢散的組方和在臨床上的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 SPF級(jí)昆明小白鼠，體重20±2 g，購(gòu)自解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK(渝)2012-0003)，在貴州大學(xué)貴州省生化工程中心SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室(動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK(黔) 2013-0001) 飼養(yǎng)，新西蘭大耳兔，體重2.5～3.0 kg，貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院，試驗(yàn)過(guò)程中對(duì)動(dòng)物的處理方法符合中華人民共和國(guó)科學(xué)技術(shù)部頒發(fā)的《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見(jiàn)(2006)》的規(guī)定。

1.2 藥品與試劑 止痢散、多葉勾兒茶、地榆和烏藥均由貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所提供；番瀉葉購(gòu)于貴陽(yáng)市同濟(jì)堂藥店，鹽酸哌洛丁胺膠囊(國(guó)藥準(zhǔn)字H10910085，由西安楊森制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為141111266)；甲硫酸新斯的明注射液(國(guó)藥準(zhǔn)字H31022770，由上海信誼金朱藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為080723)；毛果蕓香堿注射液(國(guó)藥準(zhǔn)字H12021239，由天津金耀藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為1407111)。

1.3 儀器 數(shù)顯恒溫水浴鍋(型號(hào)：HH-2，金壇市城西崢嶸實(shí)驗(yàn)儀器廠)；多功能恒溫離體腸管及平滑肌實(shí)驗(yàn)槽(型號(hào)：PHJ-1，成都儀器廠)；電子天平(型號(hào)：HZT-A100，美國(guó)康州HZ電子科技有限公司)；BL-420E生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(型號(hào)：BM6240BD，成都泰盟科技有限公司)。

2 方法

2.1 止痢散、多地和多地烏對(duì)番瀉葉引起小鼠腹瀉的影響 參照文獻(xiàn)[7]方法制備生藥濃度1 g/mL番瀉葉煎液。將120只小鼠隨機(jī)分為6組，每組20只(雌雄各半)，設(shè)空白組、模型組、陽(yáng)性藥物組、止痢散組、多地組(多葉勾兒茶和地榆配藥前搖勻，按照2∶1的體積比配成)和多地烏組(多葉勾兒茶、地榆和烏藥配藥前搖勻，按照10∶5∶2的體積比配成)。除空白組給予0.3 mL生理鹽水灌胃外，各組均以番瀉葉生藥0.3 mL灌胃。0.5 h后，止痢散組予止痢散0.4 g/kg(體質(zhì)量)灌胃0.4 mL，多地組、多地烏組和空白對(duì)照組分別予等體積多地、多地烏、生理鹽水灌胃，陽(yáng)性藥物組予鹽酸哌洛丁胺膠囊32 mg/kg(體質(zhì)量)灌胃(按人的用量換算小鼠的用量)0.4 mL。參考文獻(xiàn)[8]，小鼠單籠飼養(yǎng)，籠下鋪置濾紙，觀察4 h，每次拉稀都將換紙一次，統(tǒng)計(jì)小鼠的腹瀉次數(shù)。

2.2 止痢散、多地和多地烏對(duì)正常小鼠胃殘留率和腸推進(jìn)的影響 將100只小鼠隨機(jī)分為5組，每組20只(雌雄各半)，設(shè)空白組、陽(yáng)性藥物組、止痢散組、多地組和多地烏組。止痢散組予止痢散0.4 g/kg(體質(zhì)量)灌胃0.4 mL，多地組、多地烏組和空白組分別予等容量多地、多地烏、生理鹽水灌胃，陽(yáng)性藥物組予鹽酸哌洛丁胺膠囊32 mg/kg(體質(zhì)量)灌胃0.4 mL，1次/d，連續(xù)5 d，末次給藥前禁食18～24 h，禁食期間自由飲水，末次給藥 40 min后實(shí)驗(yàn)各組予40 mg/kg(體質(zhì)量)炭末糊[9](羧甲基纖維素10 g，淀粉8 g，葡萄糖8 g，奶粉16 g，碳末 2 g拌勻，加蒸餾水300 mL成糊)。灌胃20 min后脫頸處死小鼠，量取幽門(mén)括約肌至炭末糊最前端和盲腸的距離。計(jì)算小腸推進(jìn)率(%)=(炭末營(yíng)養(yǎng)固體糊推進(jìn)距離/幽門(mén)至盲腸的距離)×100 %[10]；再自幽門(mén)括約肌處取出各組小鼠的胃，濾紙拭干稱(chēng)重，沿大彎側(cè)剪開(kāi)，將胃內(nèi)殘留物充分洗凈，濾紙?jiān)俅问酶煞Q(chēng)重。計(jì)算胃殘留率(%)=[(胃全重-胃凈重)/半固體營(yíng)養(yǎng)糊]×100 %[11]。2.3 止痢散、多地和多地烏對(duì)胃腸痙攣模型小鼠胃殘留率和腸推進(jìn)的影響 將120只小鼠隨機(jī)分為6組，每組20只(雌雄各半)，設(shè)空白組、模型組、陽(yáng)性藥物組、止痢散組、多地組和多地烏組?？瞻捉M和模型組予等容量生理鹽水灌胃，止痢散組、多地組、多地烏組和陽(yáng)性藥物組及實(shí)驗(yàn)各組炭末糊的給藥方法同 2.2。末次給藥20 min后，空白組小鼠皮下注射生理鹽水0.2 mg/kg(體質(zhì)量)，其余各組小鼠皮下注射甲硫酸新斯的明注射液0.2 mg/kg(按人的用量換算小鼠的用量)，20 min后炭末糊灌胃，然后20 min后脫頸處死小鼠，檢測(cè)指標(biāo)同2.2。

2.4 止痢散、多地和多地烏對(duì)家兔離體回腸平滑肌收縮活動(dòng)的影響 家兔試驗(yàn)前禁食24 h，期間自由飲水，猛擊后腦致死后立即解剖，剪取回腸并將其分剪成2.5～3 cm的腸段，然后將其置于38 ℃臺(tái)氏液中除去腸系膜及內(nèi)容物并存放至新鮮臺(tái)氏液中備用。保持浴槽內(nèi)溫度38±0.5 ℃并調(diào)節(jié)供氧閥為80～100個(gè)氣泡/min。調(diào)試張力換能器及生物信號(hào)采集系統(tǒng)，使其正常采集信號(hào)。取一段腸管對(duì)角線分別穿線，其一端與張力換能器相連，另一端固定在盛有新鮮臺(tái)氏液的浴槽內(nèi)，調(diào)節(jié)線的松緊度，穩(wěn)3～5 min后，記錄一段正常曲線，然后依次加入毛果蕓香堿、陽(yáng)性組、止痢散、多地、多地烏，每次換藥后用臺(tái)氏液沖洗標(biāo)本3～5次[12]。

3 結(jié)果

3.1 止痢散、多地和多地烏對(duì)番瀉葉引起小鼠腹瀉的影響 結(jié)果如表1所示，在4 h內(nèi)，與模型組相比，陽(yáng)性藥物組小鼠分別在1、2、3、4、1～4 h的腹瀉次數(shù)差異顯著或極顯著減少(P<0.05，P<0.01)；止痢散組小鼠分別在3、1～4 h的腹瀉次數(shù)差異極顯著減少(P<0.01)，多地組與多地烏組小鼠在1～4 h的腹瀉次數(shù)差異極顯著減少(P<0.01)，另外多地組小鼠3 h的腹瀉次數(shù)差異極顯著減少(P<0.01)。與陽(yáng)性組相比，止痢散組、多地組、多地烏組小鼠分別在1、2、4、1～4 h的腹瀉次數(shù)差異顯著或極顯著增加(P<0.05，P<0.01)。

表1 止痢散、多地和多地烏對(duì)番瀉葉引起的小鼠腹瀉的影響±SE)

*，** 分別表示與模型對(duì)照組比較P<0.05，P<0.01；#，## 分別表示與同陽(yáng)性組比較P<0.05，P<0.01；△，△△ 表示與空白組比較P<0.05，P<0.01。

3.2 止痢散、多地和多地烏對(duì)正常小鼠胃殘留率和腸推進(jìn)的影響 結(jié)果如表2所示，與空白組相比，陽(yáng)性藥物組、止痢散、多地和多地烏各組小鼠炭末糊的胃殘留率極顯著增加(P<0.01)，腸推進(jìn)率極顯著減少(P<0.01)。與陽(yáng)性組相比，止痢散、多地和多地烏各組小鼠炭末糊的胃殘留率極顯著減少(P<0.01)，腸推進(jìn)率極顯著增加(P<0.01)。止痢散、多地組、多地烏三組相比較，多地烏組可以較好的增加胃殘留率，而多地組可以更好的減少腸推進(jìn)率。

表2 止痢散、多地和多地烏對(duì)正常和胃腸痙攣小鼠胃殘留率和腸推進(jìn)的影響±SE)

*，** 分別表示與模型對(duì)照組比較P<0.05，P<0.01；#，## 分別表示與同陽(yáng)性組比較P<0.05，P<0.01；△，△△ 表示與空白比較P<0.05，P<0.01。

3.3 止痢散、多地和多地烏對(duì)胃腸痙攣小鼠胃殘留率和腸推進(jìn)的影響 結(jié)果如表2所示，與空白組比較，模型組小鼠炭末糊的胃殘留率有所減少，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，腸推進(jìn)率顯著增大(P<0.05)；與模型組比較，陽(yáng)性藥物組的小鼠炭末糊的胃殘留率極顯著增大(P<0.01)，腸推進(jìn)率極顯著減小(P<0.01)；止痢散、多地和多地烏組小鼠腸推進(jìn)和胃排空率都有抑制趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。與陽(yáng)性組相比，止痢散、多地和多地烏組小鼠炭末糊的胃殘留率極顯著減少(P<0.01)，腸推進(jìn)率極顯著增加(P<0.01)。止痢散、多地組、多地烏三組相比較，多地組可以較好的增加胃殘留率，減少腸推進(jìn)率。

3.4 止痢散、多地和多地烏對(duì)家兔離體回腸平滑肌收縮活動(dòng)的影響 如表3所示，各組之間的收縮頻率差異不顯著(P>0.05)；與正常組比較，除毛果蕓香堿組張力收縮變化極顯著增大(P<0.01)外，其余各組張力收縮變化極顯著減小(P<0.01)。與陽(yáng)性組比較，各藥物組張力收縮變化極顯著增大(P<0.01)。與毛果蕓香堿組比較，各藥物組張力收縮變化極顯著減小(P<0.01)。

表3 止痢散、多地和多地烏對(duì)家兔離體回腸平滑肌收縮活動(dòng)的影響

*，** 分別表示與毛果蕓香堿組比較P<0.05，P<0.01；#，## 分別表示與同陽(yáng)性組比較P<0.05，P<0.01；△，△△ 表示與正常組比較P<0.05，P<0.01。

4 討論

本文采用番瀉葉致小鼠腹瀉試驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)止痢散及其拆方的抗腹瀉能力，結(jié)果顯示止痢散組、多地組和多地烏組都可以有效地減緩番瀉葉所致小鼠的腹瀉，其中止痢散的抗腹瀉作用與前期報(bào)道[6]的結(jié)果一致，再次證明止痢散具有抗腹瀉作用。家畜新獸藥止痢散是以多葉勾兒茶為主要組成輔以地榆、烏藥等中草藥組合的新復(fù)方中藥制劑。雖有文獻(xiàn)報(bào)道多葉勾兒茶[5]、地榆[3]、烏藥[12]都具有抗腹瀉作用，但通過(guò)拆方結(jié)果多地組的抗腹瀉效果優(yōu)于其他組說(shuō)明止痢散的抗腹瀉作用主要通過(guò)多葉勾兒茶、地榆來(lái)起作用。烏藥的加入雖然不能顯著的增加抗腹瀉效果，但可以增加正常組的胃殘留，減緩胃排空。這同前期文獻(xiàn)報(bào)道烏藥對(duì)小鼠的體內(nèi)作用表現(xiàn)為促進(jìn)胃腸收縮,如降低小鼠胃中甲基橙殘留率,促進(jìn)小腸炭末推進(jìn)率[12]的結(jié)論是不一致的。可能由于烏藥對(duì)胃腸平滑肌有雙重作用,既能促進(jìn)腸蠕動(dòng)加速,收縮加強(qiáng),又能抑制胃腸平滑肌,緩解其痙攣[13]，至于這種結(jié)果的出現(xiàn)是否與劑量有關(guān),作用的機(jī)理如何未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道,有待進(jìn)一步研究。多地組在抗腹瀉方面較止痢散組好，提示各藥可能在混煎的過(guò)程中發(fā)生拮抗性變化。

腹瀉的發(fā)生與胃腸的運(yùn)動(dòng)紊亂關(guān)系密切，多地和多地烏的組方都顯著減少正常狀態(tài)的腸推進(jìn)，增加胃殘留，抑制胃腸的運(yùn)動(dòng)，各組都不能完全抑制新斯的明所致小鼠的腸痙攣。止痢散、多地和多地烏都能極顯著減小離體腸平滑肌收縮張力的變化。選用的陽(yáng)性藥物鹽酸哌洛丁胺為阿片受體激動(dòng)劑，可以阻止乙酰膽堿和前列腺素的釋放，拮抗平滑肌收縮，而減少腸蠕動(dòng)和分泌。多葉勾兒茶、地榆和烏藥這三味的組方可能與這些作用機(jī)制有關(guān)，但中藥復(fù)方發(fā)揮作用往往是通過(guò)多種途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)的,本方是否還存在其它途徑而起效,同時(shí)至于這三味對(duì)止痢散抗腹瀉作用機(jī)制的直接貢獻(xiàn)如何，這都有待進(jìn)一步研究。

[1] 陳立,董俊興.勾兒茶屬植物化學(xué)成分及其生物活性研究進(jìn)展[J].中草藥,2006,37(4):627-630.

[2] 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典[M].上海:上?？萍技夹g(shù)出版社,2001:462,806.

[3] 金美花.地榆藥理作用與臨床應(yīng)用[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生,2009,25(16):2479.

[4] 陳方亮,余翠琴.烏藥的藥理研究概況[J].海峽藥學(xué),2011,23(12):44-46.

[5] 楊何,蔣秀全.獸用止痢、止瀉中草藥新制劑的藥理試驗(yàn)[J].中獸醫(yī)學(xué)雜志,2014(10):86.

[6] 王玉坤,李欣,馮將,等.家畜止痢散抗實(shí)驗(yàn)性腹瀉及對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)的影響[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)雜志,收錄,待見(jiàn)刊。.

[7] 夏旭婷,樊俊陽(yáng),王碧玉,等.脾虛證慢傳輸型便秘小鼠模型構(gòu)建方法的比較研究[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2014,34(12):4-7,81.

[8] 張程亮,王硯,向道春,等.穿心蓮內(nèi)酯對(duì)小鼠腹瀉模型的治療作用研究[J].中國(guó)藥師,2011,14(8):1102-1105.

[9] 張旭,馬波,杜鋼軍,等.白蘿卜提取物對(duì)小鼠胃排空、腸推進(jìn)及家兔離體回腸平滑肌的影響[J].河南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2011,30(1):36-38.

[10]倪竹南,呂圭源,樓招歡,等.當(dāng)歸揮發(fā)油化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2007(7):93-95.

[11]吳春福,陳多.小鼠胃排空模型的探討[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),1997,13(3):271-273.

[12]好桂新,李慶林,王崢濤,等.烏藥提取物對(duì)消化系統(tǒng)的作用[J].中國(guó)野生植物資源,1999,18(3):52-53,57.

[13]王本祥.現(xiàn)代中藥藥理與臨床[M].天津:天津科技翻譯出版公司,2004:307.

(編輯：陳希)

Experiment Research in Anti-diarrhoea Effects of Jiachu Zhili San and Its Disassemble Prescription

WANG Yu-kun1,2, FENG Jiang1,2,WEI Yu-hao1,2,HU Bing-ye1,2,YANG Ye-yang1,2,JIANG Ling-ling3,ZHOU Si-xuan2,3,WANG Lu2*

(1.CollegeofAnimalScience,GuizhouUniversity,Guiyang,China550025;2.BiochemistryEngineeringCenterofGuizhouProvince,GuizhouUniversity,Guiyang,China550025 3.HusbandryandVeterinaryResearchInstitute,Guiyang,China550005)

To evaluate the anti-diarrhea action of Jiachu Zhili San and its disassemble prescription，containing by three components, berchemia polyphylla, burnet and lindera, the paper studies the gastroin -testinal motility effect of Jiachu Zhili San and its disassemble prescription. The method of rat diarrhea by senna were carried out to evaluate the effects of Jiachu Zhili San and its disassemble prescription on the times of diarrhea in healthy mice and the effects of them on gastric emptying and small bowel peristalsis in healthy mice and neostigmine-treated mice in vivo and smooth muscle of ileum of rabbitsinvitro. The results showed that both Jiachu Zhili San and its disassemble prescription could extremely significantly reduce the times of diarrhea (P<0.01), and all dose groups could extremely significant suppress alvine pushing rate and gastric emptying rate of healthy mice (P<0.01).However, all the dose groups could not significantly suppress intestinal propulsion and gastric emptying rate in neostigmine-treated mice(P>0.05). Both Jiachu Zhili San and its ingredients could extremely significant reduce contractive activities of smooth muscle of ileum in rabbitsinvitro(P<0.01).The conclusion of the study is that Jiachu Zhili San has good anti-diarrhea effect, which makes it mainly by inhibiting the propulsion of the gastrointestine and reduce contractive activities of smooth muscle of ileum, and this has a close relation to berchemia polyphylla, burnet and lindera, hoping this can provide reference data for clinical therapy and its further development.

Jiachu Zhili San; divided-form; intestinal propulsion; gastric emptying rate

貴州省重大專(zhuān)項(xiàng)(黔科合重大專(zhuān)項(xiàng)字[2013]6014)；貴州省農(nóng)業(yè)類(lèi)工程技術(shù)研究中心項(xiàng)目(黔科合農(nóng)G字[2015]4001)

王玉坤，碩士研究生，從事中獸醫(yī)學(xué)及中藥藥理學(xué)方面研究。

王魯。E-mail: wanglu7007@163.com

2016-05-12

A

1002-1280 (2016) 07-0057-05

S853.74