侯冬巖，刁全平，李鐵純，回瑞華，宋美蓉

(鞍山師范學院 化學與生命科學學院,遼寧 鞍山 114007)

茶寄生中茶多酚含量的分析

侯冬巖，刁全平，李鐵純，回瑞華，宋美蓉

(鞍山師范學院 化學與生命科學學院,遼寧 鞍山 114007)

對茶寄生中茶多酚的含量進行分析.茶多酚是混合物，由于各種茶多酚結(jié)構(gòu)相似，較難分離.沒食子酸(EC)、表沒食子兒茶素 (EGC)、沒食子兒茶素沒食子酸酯 (EGCG)、表兒茶素沒食子酸酯 (ECG)4種茶多酚是茶葉中茶多酚的主要成分.本研究采用高效液相色譜(HPLC)法同時測定了EC、EGC、EGCG、ECG 4種茶多酚，4種茶多酚在15 min內(nèi)達到有效分離，方法的變異系數(shù)小于0.036 0%，回收率為95.2%～104.2%.實驗結(jié)果表明，茶寄生樣品中只含有茶多酚中的EGC,其中云南粗莖茶寄生樣品中的EGC含量略高于云南細莖茶寄生樣品中EGC含量.

茶寄生；高效液相色譜法；茶多酚；測定

茶寄生即茶樹枝干上的一種寄生物，因形如蟹肢而得名“螃蟹腳”.茶寄生為多年生草本植物，綠色，曬干后為棕黃色.

茶多酚又叫茶單寧、茶鞣質(zhì)，是茶葉中酚類及其衍生物的總稱.茶多酚具有很強的抗氧化能力，其抗氧化能力可達L-抗壞血酸的100倍.現(xiàn)代科學研究認為，人體衰老的原因在于人體的細胞在代謝過程中連續(xù)不斷地產(chǎn)生具有高度活性的自由基和細胞自身的抗氧化酶及超氧化物歧化酶(SOD)不斷消除作用的失衡而使自由基濃度過剩.茶多酚具有很強的清除人體自由基的作用，是極強的消除有害自由基的天然物質(zhì).茶葉中含有豐富的茶多酚，已有不少研究結(jié)果發(fā)表[1～6]，而茶寄生中茶多酚的含量的分析未見報道.本文采用高效液相色譜法，對茶寄生中茶多酚含量相對較高組分即沒食子酸、表沒食子兒茶素、沒食子兒茶素沒食子酸酯和表兒茶素沒食子酸酯進行分析，為進一步開發(fā)利用茶寄生提供科學參考.

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

Waters 1525-2996-tcm 液相色譜儀(美國Waters公司)；KQ-250B型超聲波清洗器(昆山市超聲波儀器有限公司)；80-2B型臺式離心機(上海安亭科學儀器廠).

甲醇(色譜純)、乙酸乙酯(分析純)、冰乙酸(分析純).

標準品：EC(中國藥品生物制品檢定所)；EGC(天津一方科技有限公司)；EGCG(天津一方科技有限公司)；ECG(天津一方科技有限公司).

1.2 實驗樣品

茶寄生樣品：云南粗莖茶寄生，云南細莖茶寄生，均產(chǎn)于云南.

將樣品在中藥粉碎機中粉碎，過0.425 mm孔徑的篩子，裝袋備用.

1.3 實驗方法

1.3.1 標準溶液配制 準確稱取0.004 1 mg的EC標準品，甲醇溶解、定容至10 mL容量瓶中，搖勻備用.準確稱取0.002 6 mg的EGC標準品，甲醇溶解、定容至10 mL容量瓶中，搖勻備用.0.006 5 mg的EGCG標準品，甲醇溶解、定容至5 mL容量瓶中，搖勻備用.準確稱取0.006 8 mg的ECG標準品，甲醇溶解、定容至5 mL容量瓶中，搖勻備用.

標準品混合溶液：向10 mL的容量瓶中，加入以上配制好的EC、EGC標準溶液各2 mL，EGCG、ECG的標準溶液各1 mL，用甲醇定容，搖勻，此即標準品的混合溶液[7].

1.3.2 樣品前處理及樣品溶液的制備 于50 mL的錐形瓶中，稱取1.00 g的樣品固體粉末，在10 mL的沸水浴中提取20 min，離心10 min，取上層清液用乙酸乙酯10 mL(分2次，每次5 mL)萃取，合并萃取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去萃取液中的乙酸乙酯，用2 mL甲醇溶解旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后的溶液，此即為待測溶液.測定前經(jīng)過0.45 μm的一次性有機膜過濾，得濾液備用[8].

1.3.3 色譜條件 色譜柱：Kromasil C18(250 mm×4.6 mm)；流動相：甲醇∶乙酸∶水=25∶2∶73(V/V)；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL/min；進樣量：10.0 μL；檢測器：紫外檢測器；掃描波長：210～400 nm；檢測波長：274.8 nm.

1.3.4 測定方法 將樣品分別按1.3.2處理，按1.3.3色譜條件進行測定，每個樣品測定3次.

2 結(jié)果與討論

2.1 最大吸收波長的確定和標準曲線的繪制

分別將1.3.1的標準品和1.3.2處理的樣品按1.3.3色譜條件進樣，在210～400 nm掃描其紫外吸收，最大吸收波長分別為272.4，272.4，274.8，278.4 nm，綜合考慮，確定274.8 nm為茶多酚的紫外檢測波長.

分別將1.3.1的4種標準溶液進行稀釋，組成一系列不同濃度的溶液，在1.3.3的色譜條件下分別進樣，進樣量為10 μL，記錄峰面積.以積分峰面積為橫坐標，以質(zhì)量濃度為縱坐標，繪制標準曲線，4種茶多酚標準品的線性方程及相關(guān)系數(shù)列在表1中.

表1 4種茶多酚標準品的標準曲線方程

由表1回歸方程和相關(guān)系數(shù)可知，標準品峰面積與標準品濃度呈良好線性關(guān)系，可按標準曲線法進行定量分析.

2.2 精密度實驗

分別從1.3.1的標準品儲備液中精確量取1.0 mL，并制成一定質(zhì)量濃度的溶液，在1.3.3的色譜條件下分別進樣10 μL，相同條件下測定9次，記錄峰面積，代入2.1的標準曲線中，計算出對應濃度.求得其標準偏差和變異系數(shù)，方法精密度結(jié)果如表2.

表2 精密度實驗

2.3 回收率實驗

對4種茶多酚分別進行加標回收率實驗.向樣品中分別加入不同量的標準品，在1.3.3色譜條件下進樣，根據(jù)記錄的峰面積計算對應的濃度，得到回收率,如表3.

表3 方法的回收率實驗

2.4 最低檢出限

取1.3.1中的標準儲備液逐級稀釋后進樣，當響應值為基線噪音2倍時，測定其峰面積，所對應的濃度為該檢測方法的最低檢出限，EC、EGC、EGCG、ECG的最低檢出限分別為0.01，0.02，0.002 ,0.001 mg/L.

2.5 樣品中茶多酚含量的測定

2.5.1 茶多酚標準品和樣品的色譜圖 分別取1.3.1的混合標準溶液和1.3.2處理后的樣品溶液，在1.3.3的條件下進樣測定，得到色譜圖，如圖1～3.

圖1 標準品混合溶液的色譜圖

圖2 云南細莖茶寄生的色譜圖

圖3 云南粗莖茶寄生的色譜圖

由圖1可知，在混合標準溶液中，EC的保留時間為3.484 min，EGC的保留時間為4.402 min，EGCG的保留時間為6.294 min，ECG的保留時間是11.869 min.而樣品色譜圖圖2和圖3中只檢測到EGC，即茶寄生樣品中只含有茶多酚中的EGC.

2.5.2 樣品中茶多酚含量的測定 將樣品經(jīng)過1.3.2處理后，按照1.3.3色譜條件進樣，茶多酚EGC在茶寄生樣品中的含量如表4.

表4 茶寄生樣品中EGC的含量

3 結(jié)論

茶多酚是茶葉中多酚類物質(zhì)的總稱，它是混合物，由于各種茶多酚結(jié)構(gòu)相似，較難分離.本研究采用HPLC法同時測定了EC、EGC、EGCG、ECG4種茶多酚,4種茶多酚在15 min內(nèi)達到有效分離,且精密度和準確度較好.

據(jù)文獻報道，EC、EGC、EGCG、ECG4種茶多酚是茶葉中茶多酚的主要成分.本實驗結(jié)果表明，茶寄生樣品中只含有茶多酚中的EGC.在云南粗莖茶寄生和云南細莖茶寄生樣品中，云南粗莖茶寄生樣品中的EGC含量略高于云南細莖茶寄生樣品中EGC含量.

[1] 侯冬巖，回瑞華，劉曉媛.紅茶茶多酚及抗氧化性能測定[J].食品科學，2005，26(8)：367-370

[2] 陳繼英,郭嘉林,張存彥.茶多酚的研究進展[J].中草藥,2004,35(10):11-13.

[3] Lu YR,Foo LY.Antioxidant and radieal scavenging activities of polyphenols from apple pomace[J].Food Chem,2000,68(1):81-85.

[4] 曾磊,張玉軍,鄒正.茶多酚的功能特性及應用[J].鄭州工程學院學報,2002,23(2):90-94.

[5] Sano M,Tabata M,Suzuki M,et al.Simultaneous determination of twelve tea cateeins by high-Performance liquid chromatogramphy with electrochemical deteetion[J].Analyst,2001,126(6):816-820.

[6] 袁華芳，侯冬巖，回瑞華.紫外光譜法比較烏龍茶和烏龍茶嫩莖中的茶多酚含量[J].鞍山師范學院學報,2007,9(4):53-55.

[7] 陳鶴立.高效液相色譜法測定茶葉中茶多酚及咖啡堿含量[J].福建醫(yī)藥雜志,2006,28(1):80-81.

[8] 康海寧,陳波,韓超.HPLC法測定茶葉水浸提液中五種兒茶素和咖啡堿及其用于茶葉分類的研究[J].分析測試學報,2007,3(2):211-215.

(責任編輯：陳 欣)

The analysis of tea polyphenol content in tea parasitic

HOU Dongyan,DIAO Quanping,LI Tiechun，HUI Ruihua，SONG Meirong

(SchoolofChemistryandLifeScience，AnshanNormalUniversity,AnshanLiaoning114007,China)

The content of tea polyphenols in the tea parasitic are analyzed.Tea polyphenols is a mixture,for a variety of tea polyphenol structure similar,more difficult to separate.EC (gallic acid),EGC (gallic catechin),EGCG (gallic catechin gallic acid ester),ECG (epicatechin gallic acid ester) are the main four components of tea polyphenols in tea.This study adopts the method of HPLC (high performance liquid chromatography) and the determination of the EC,EGC,EGCG,ECG tea polyphenols.Four kinds of tea polyphenols achieve effective separation within 15 min.Method of variation coefficient is less than 0.036 0%,recovery rate of 95.2% to 104.2%.The experimental results show that the tea contains only parasitic samples in the tea polyphenols EGC.The parasitic crude stem tea and yunnan in yunnan fine tea stem parasitic samples,thick stems in yunnan tea parasitic EGC content in the samples is slightly higher than that of yunnan fibrous tea parasitic EGC content in the samples.

tea parasitic;HPLC;tea polyphenol;determination

2016-10-09

遼寧省教育廳科學技術(shù)基金資助課題(20331079).

侯冬巖(1962-)，男，吉林省吉林市人，鞍山師范學院化學與生命科學學院教授，主要從事天然功能食品科學研究.

O657．3

A

1008-2441(2016)06-0041-04