陳 吼， 龍鳳來(lái)， 李黔蜀

(楊凌職業(yè)技術(shù)學(xué)院， 陜西 楊凌 712100)

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柿葉藥材的鑒別及總黃酮提取工藝探索

陳 吼， 龍鳳來(lái)， 李黔蜀

(楊凌職業(yè)技術(shù)學(xué)院， 陜西 楊凌 712100)

摘要：目的：優(yōu)選柿葉總黃酮的提取工藝。方法：采用乙醇加熱回流提取法進(jìn)行正交試驗(yàn)。結(jié)果：確定柿葉中總黃酮 的最佳提取條件為乙醇濃度為70%，料液比為1∶40，回流提取時(shí)間為1 h，提取兩次。結(jié)論：A3B2C2D2條件下柿葉總黃酮提取效果理想，為柿葉藥材的臨床應(yīng)用及市場(chǎng)開(kāi)發(fā)提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：柿葉； 總黃酮； 提取

柿葉入藥始見(jiàn)于明《滇南本草》記載“經(jīng)霜葉敷臁瘡”,《本草再新》記載用于“治咳嗽吐血,止渴生津”。主要用于止血、降壓、治療冠心病、心絞痛及胃潰瘍出血、肺結(jié)核出血、功能性子宮出血等內(nèi)臟出血病癥[1]。現(xiàn)代藥理研究表明,柿葉還具有抗氧化、抑制特異性皮炎、增強(qiáng)免疫功能、減肥降脂、抗癌、抗菌等作用[2]。柿葉化學(xué)成分較復(fù)雜,主要含有黃酮、三萜、酚類(lèi)等化合物[3]。國(guó)內(nèi)外研究表明,以柿葉為原料制取的柿葉制劑、柿葉茶、柿葉提取物及柿葉黃酮苷具有清熱解毒、清血利尿、抑菌、止血、降血脂、降低膽固醇、抑制腫瘤生長(zhǎng)等多方面的生理功能[4-6]。

查閱相關(guān)文獻(xiàn)資料，柿葉的主要有效成分是黃酮類(lèi)化合物。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)過(guò)單因素考察和正交試驗(yàn)分析，最終得到柿葉的總黃酮可行提取工藝。

1儀器和試劑

WFH-201B紫外透射反射儀； UV-1102；RE-3000旋蒸器；KH-400KDE超聲清洗器；乙醇(分析純)；G型薄層層析硅膠(青島海洋化工有限公司)；槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：10081-200406)及山奈酚標(biāo)品(110861-200808)； 柿葉采集自陜西關(guān)中地區(qū)，經(jīng)鑒定為柿樹(shù)屬植物柿的干燥葉。

2方法與結(jié)果

2.1原藥材的鑒定

精密稱(chēng)取柿葉藥材(過(guò) 40 目篩)2.0 g，照10版藥典薄層色譜法取供試藥液(標(biāo)為1、3)和槲皮素標(biāo)品(2、4)、山奈酚(5)；以乙酸乙酯-甲酸-水(8∶1∶1)溶液為展開(kāi)劑,365 nm紫外檢測(cè)，結(jié)果與對(duì)照品顯相同顏色，但斑點(diǎn)不清晰。以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(9∶3∶1)溶液為展開(kāi)，斑點(diǎn)清晰可見(jiàn)如圖1。

2.2工藝參數(shù)考察

2.2.1供試品溶液的制備取過(guò) 40 目篩的柿葉藥材粉末2.0 g，按表3設(shè)計(jì)回流提取，合并濾過(guò)，濃縮，加乙醇定容至 50 mL量瓶中作為供試品備用。

圖1　柿葉藥材的鑒定

2.2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取槲皮素對(duì)照品 4.9 mg于 10 mL 量瓶加乙醇稀釋至刻度搖勻，備用。

2.2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制作精密吸取對(duì)照品0,0.3，0.6，0.9，1.2，1.5 mL，分置于10 mL 量瓶，加蒸餾水 4 mL，5% NaNO20.3 mL,混勻，放置 6 min，加10% Al(NO3)30.3 mL,混勻，放置 6 min，再加4% NaOH 4.0 mL,加水至刻度搖勻，放置 15 min，在 510 nm 測(cè)吸收度 A。以對(duì)照品含量為橫坐標(biāo)， A 為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算得回歸方程為A=0.110C+0.003，r2=0.998，結(jié)果如圖2。

圖2　槲皮素標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

2.2.4L9(34)正交試驗(yàn)采用四因素三水平的正交試驗(yàn)對(duì)乙醇濃度(A)、溶劑用量(B)、提取次數(shù)(C)、提取時(shí)間(D)進(jìn)行考察，設(shè)計(jì)方案如表1；實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2、3。

表1　正交試驗(yàn)因素水平表

2.3結(jié)論與討論

從方差分析和直觀分析可以看出，提取次數(shù)對(duì)柿葉總黃酮有效部位影響最大，各因素最佳組合為A3B2C2D2，即乙醇濃度70%，加40倍量，提取1 h,2次。本實(shí)驗(yàn)預(yù)考察了提取方法，選擇超聲提取、加熱回流提取、索式提取，結(jié)果加熱回流提取法提取率明顯高于其他方法。經(jīng)驗(yàn)證，正交實(shí)驗(yàn)確定的最佳提取工藝穩(wěn)定可行，此工藝僅為實(shí)驗(yàn)室小試階段，但可為實(shí)際工業(yè)生產(chǎn)提供參考依據(jù)。

表2　直觀分析表

表3　方差分析表

參考文獻(xiàn)：

[1]Jiang W K. Persimmon leaves-resource with huge exploiturepotential [J].J Guiyang Coll Tradit Chin Med, 1997,19(2):52.

[2]張秋燕,王 亮,肖 峰,等.柿葉藥理作用研究進(jìn)展[J].河北職工醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2004,21(3):39-40.

[3]Mallavadhani U V, Panda A K, Rao Y R. Pharmocology andchemotaxonomy ofDiospyros[J].Phytochemistry, 1998,49(4):901-951.

[4]吳小南,汪家梨.柿葉茶抗氧化、降血脂保健作用的初步實(shí)驗(yàn)[J].食品科學(xué),1998,19(11):39-41.

[5]楊建雄,原江鋒,李發(fā)榮.柿葉黃酮的體外抗氧化作用研究[J].營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào), 2003，(2):215-217.

[6]歐陽(yáng)平,貝偉劍,賴(lài)文巖,等.柿葉黃酮對(duì)缺氧復(fù)氧以及晚期糖基化終產(chǎn)物誘導(dǎo)的乳鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響[J].第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào), 2003, (7):680-682.

Identification of the Persimmon Leaf and Exploration on

Its Technology of Extracting Total Flavonoids

CHEN Hou, LONG Feng-lai, LI Qian-shu

(Yangling Vocational and Technical College, Yangling, Shaanxi 712100, China)

Abstract:In order to optimize the technology of extracting persimmon leaf total flavonoids, the orthogonal experiment was conducted through the method of ethanol heating reflux extraction. The result shows the best extraction condition of total flavonoids of persimmon leaves is that the methanol concentration is 70%, the ratio of material liquid is 1∶40, reflux extraction time is 1 h, extraction for two times. It is concluded that under the condition of the A3B2C2D2，the experiment effect of persimmon leaf flavonoids extraction is ideal, which provides the experimental basis for the clinical application of persimmon leaf as medicinal materials and market development.

Key words:persimmon leaves； total flavonoids； extracting

中圖分類(lèi)號(hào)：TQ461

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1671-9131(2015)04-0030-02

作者簡(jiǎn)介：陳 吼(1983-)，陜西永壽人，講師。主要從事中藥制藥技術(shù)的教學(xué)與研究工作。