涂小麗，　陳　琦，　張洪洲，　鄢瑞娟，　吳延慶

(南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科，江西 南昌 330006)

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CXCR7在動(dòng)脈粥樣硬化模型ApoE-/-小鼠的表達(dá)及阿托伐他汀的干預(yù)作用*

涂小麗，陳琦，張洪洲，鄢瑞娟，吳延慶△

(南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科，江西 南昌 330006)

[摘要]目的： 研究CXC趨化因子受體7(CXC chemokine receptor 7，CXCR7)在動(dòng)脈粥樣硬化模型載脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠中的表達(dá)并探究阿托伐他汀的干預(yù)作用。方法: 8周齡ApoE-/-雄性小鼠，隨機(jī)分為正常對照組、高脂組與高脂+阿托伐他汀組，實(shí)驗(yàn)干預(yù)12周建立動(dòng)脈粥樣硬化模型；油紅O及HE染色觀察動(dòng)脈粥樣硬化病變，Western blot及免疫組化法檢測動(dòng)脈CXCR7的表達(dá)，Western blot檢測動(dòng)脈eNOS和Akt的表達(dá)。結(jié)果: (1)動(dòng)脈油紅O及HE染色示高脂組可見有明顯粥樣核心及纖維帽的顯著斑塊，高脂+阿托伐他汀組也可見斑塊，但斑塊負(fù)荷較模型組減輕，正常對照組未見明顯斑塊形成；(2)免疫組化示高脂組動(dòng)脈細(xì)胞著色淺，CXCR7表達(dá)量少，高脂+阿托伐他汀組與高脂組比較，細(xì)胞著色增加，CXCR7表達(dá)量增加，正常對照組顆粒呈深棕黃色，示CXCR7大量表達(dá)；(3)Western blot結(jié)果示高脂組CXCR7、eNOS和Akt的表達(dá)較正常對照組降低，給予阿托伐他汀干預(yù)后CXCR7、eNOS和Akt的表達(dá)較高脂組增加，較正常對照組相比CXCR7、eNOS和Akt的表達(dá)下降，但磷酸化eNOS的水平未見差異。結(jié)論: 高脂血癥可損傷血管內(nèi)皮，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展，下調(diào)動(dòng)脈CXCR7、eNOS和Akt的表達(dá)；阿托伐他汀可改善動(dòng)脈粥樣硬化，緩解ApoE-/-小鼠動(dòng)脈CXCR7、eNOS和Akt蛋白表達(dá)的下調(diào)。

[關(guān)鍵詞]動(dòng)脈粥樣硬化； 載脂蛋白E； CXC趨化因子受體7； 阿托伐他汀

趨化因子是一類8～12 kD的小分子多肽類物質(zhì)，是一種強(qiáng)有力的化學(xué)誘導(dǎo)物，能誘導(dǎo)成熟與未成熟造血細(xì)胞的增殖與分化，促進(jìn)干細(xì)胞的增殖、生存及歸巢，參與多種病理生理過程[1]。基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1(stromal cell-derived factor-1，SDF-1),也稱CXC趨化因子12(CXC chemokine 12，CXCL12)，是一個(gè)多效性的趨化因子并廣泛表達(dá)于多種組織中，在許多重要的生命過程中發(fā)揮著作用，如在缺氧復(fù)氧性腦損傷的大鼠中，通過調(diào)節(jié)間充質(zhì)干細(xì)胞CXC趨化因子受體4(CXC chemokine receptor 4，CXCR4)的表達(dá)可調(diào)控間充質(zhì)干細(xì)胞的遷移，進(jìn)而起到保護(hù)作用[2]。此外在動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)病變中，CXCL12的受體CXCR4能通過調(diào)節(jié)中性粒細(xì)胞的遷移預(yù)防AS的發(fā)展[3]；在內(nèi)膜損傷的修復(fù)過程中，CXCL12對平滑肌祖細(xì)胞(smooth muscle progenitor cells，SPCs)的動(dòng)員聚集加重了內(nèi)膜增生，但是在系統(tǒng)給予CXCL12藥物治療時(shí)，SPCs的動(dòng)員反而能起到穩(wěn)定斑塊的作用，表明CXCL12及其受體CXCR4對于AS病變的保護(hù)性效應(yīng)[4]。以上研究表明了CXCL12與其受體CXCR4的生物學(xué)效應(yīng)，但關(guān)于CXCL12的另一個(gè)受CXCR7在AS中的作用機(jī)制卻仍不明確。本研究通過動(dòng)脈粥樣硬化模型小鼠，探討AS與 CXCR7 的關(guān)系以及阿托伐他汀干預(yù)的影響。

材料和方法

1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

8周齡雄性ApoE-/-小鼠，SPF級(jí)，體重18～22 g，購于愛爾麥特科技有限公司。

2主要試劑

動(dòng)脈粥樣硬化疾病模型的誘導(dǎo)飼料(江蘇美迪森公司)；阿托伐他汀鈣片(輝瑞制藥有限公司)；CXCR7 多克隆抗體、eNOS單克隆抗體(Abcam)；phospho-eNOS抗體(Affinity)；phospho-Akt多克隆抗體(CST)；血清總膽固醇(total cholesterol，TC)試劑盒、甘油三酯(triglyceride，TG)試劑盒、低密度脂蛋白膽固醇(low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C)試劑盒和高密度脂蛋白膽固醇(high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C)試劑盒(中生北控生物科技公司)。

3主要方法

3.1動(dòng)脈粥樣硬化模型的建立及實(shí)驗(yàn)分組36只ApoE-/-小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，禁食不禁水12 h，采用眼眶后靜脈叢采血0.5 mL左右，室溫靜置離心取上清。隨后將小鼠隨機(jī)分為正常對照組、高脂組和高脂+阿托伐他汀組，其中正常對照組給予常規(guī)齲齒類動(dòng)物飼料，高脂組及高脂+阿托伐他汀組則給予高脂飼料，而高脂+阿托伐他汀組在給予高脂飼料4周后開始阿托伐他汀(10 mg·kg-1·d-1)灌胃干預(yù)治療，其它組則予同體積生理鹽水灌胃，連續(xù)灌胃9周，共喂養(yǎng)高脂飼料12周。干預(yù)結(jié)束后，給予10%水合氯醛0.07 mL腹腔注射麻醉，摘眼球取血法采血，離心分離血清。取主動(dòng)脈根部至髂總動(dòng)脈分叉處整條動(dòng)脈，一部分經(jīng)多聚甲醛固定，一部分則液氮速凍，-80 ℃冰箱凍存?zhèn)溆谩?/p>

3.2血脂檢測根據(jù)試劑盒說明書測定血清TC、TG、LDL-C和HDL-C水平，其中TC和TG檢測采用酶法，LDL-C和HDL-C采用選擇性沉淀法測定。

3.3動(dòng)脈HE染色將標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋，切片，采取蘇木精-伊紅(HE)染色、經(jīng)無水乙醇脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片。

3.4主動(dòng)脈整體油紅O染色分離主動(dòng)脈外膜脂肪組織，4%多聚甲醛固定過夜，磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗后，異丙醇脫水?dāng)?shù)分鐘，室溫下經(jīng)油紅O染色4 h(避光)，再經(jīng)70%異丙醇沖洗4次，每次5 min，PBS沖洗干凈并將動(dòng)脈伸展開，行數(shù)碼拍照。

3.5免疫組化法主動(dòng)脈組織切片脫蠟后，置于PBS中，經(jīng)抗原修復(fù)液高溫修復(fù)(5 min×3次)，Tris-HCl緩沖鹽溶液(TBS)清洗2次，3%過氧化氫溶液室溫10 min，清除內(nèi)源性過氧化物酶，TBS清洗3次，血清封閉液封閉1 h，滴加抗CXCR7多克隆抗體(1∶100)4 ℃過夜，添加 II 抗1 h，DAB 染色，蘇木精復(fù)染，中性樹膠封固。

3.6Western blot實(shí)驗(yàn)取出動(dòng)脈組織置于冰上，加入液氮研磨，裂解液裂解60 min后離心取上清得到樣品，測定蛋白濃度。蛋白在10%SDS-聚丙烯酰胺凝膠中電泳分離，并經(jīng)濕轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，含5%脫脂奶粉的TBST封閉1 h，結(jié)合 I 抗(CXCR7多克隆抗體，濃度為1∶1 500；β-tubulin單克隆抗體，濃度為1∶1 000；eNOS單克隆抗體，濃度為1∶500；p-eNOS抗體，濃度為：1∶500；p-Akt多克隆抗體，濃度為1∶1 000)，4 ℃過夜，TBST 漂洗3 次，滴加辣根酶標(biāo)記的羊抗兔IgG II 抗(1∶5 000)室溫孵育1 h，TBST漂洗3 次，并ECL發(fā)光顯影攝片。

3.7一氧化氮的檢測根據(jù)一氧化氮檢測試劑盒說明書測定血清中NO的濃度。

4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

經(jīng)SPSS 19.0處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，多樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1血脂檢測

3組小鼠的基礎(chǔ)血脂水平示各組小鼠血清TC、TG、LDL-C和HDL-C無明顯差異；經(jīng)高脂飲食干預(yù)12周后高脂組小鼠血清TC、TG和LDL-C水平較正常對照組明顯升高(P<0.05)，HDL-C水平明顯低于正常對照組(P<0.05)；經(jīng)阿托伐他汀干預(yù)后小鼠血清TC、TG和LDL-C水平較高脂組下降(P<0.05)，HDL-C水平較高脂組升高(P<0.05)；高脂+阿托伐他汀組與正常對照組之間血脂水平的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

表1ApoE-/-小鼠基礎(chǔ)血脂及高脂飲食或阿托伐他汀干預(yù)后血脂水平

Table 1.Blood lipid concentration ofApoE-knockout mice before or after treated with high-fat diet (HFD) or atorvastatin (Sat). (mmol/L. Mean±SD.n=12).

TimepointGroupTCTCLDL-CLDL-C9weeksNDC12.60±1.711.21±0.351.56±0.631.64±0.71HFD10.79±4.631.35±0.571.66±0.681.42±0.60HFD+Sat11.75±3.501.39±0.451.64±0.781.45±0.6921weeksNDC10.71±2.651.39±0.351.56±0.351.97±0.42HFD21.37±4.50*2.76±0.56*4.40±0.94*0.82±0.30*HFD+Sat11.82±4.00#1.43±0.56#1.83±0.75#1.69±0.47#

NDC: normal diet control.*P<0.05vsNDC;#P<0.05vsHFD.

2病理學(xué)形態(tài)觀察

主動(dòng)脈弓HE染色示高脂組小鼠主動(dòng)脈內(nèi)可見有粥樣核心及纖維帽的顯著斑塊，高脂+阿托伐他汀組也可見泡沫細(xì)胞以及典型的粥樣斑塊，但斑塊少于高脂組，正常對照組內(nèi)膜完整，未見泡沫細(xì)胞的聚集及AS斑塊的形成，見圖1。主動(dòng)脈整體油紅O染色示高脂組紅染脂質(zhì)斑塊明顯，高脂+阿托伐他汀組也可見斑塊，但較模型組斑塊負(fù)荷輕，正常對照組內(nèi)膜光滑，僅在主動(dòng)脈弓處可見極少量紅染斑塊，各組之間斑塊相對面積(斑塊面積/血管整體面積)比較示高脂組及高脂+阿托伐他汀組小鼠AS斑塊相對面積高于正常對照組(P<0.05)，且高脂+阿托伐他汀組較高脂組也有減少(P<0.05)，見圖2。

Figure 1.Representative sections ofApoE-knockout mice aortas (HE staining，×200).

圖1主動(dòng)脈弓HE染色

3免疫組化檢測

主動(dòng)脈弓免疫組化提示CXCR7表達(dá)陽性時(shí)呈棕黃色顆粒，正常對照組小鼠主動(dòng)脈組織中CXCR7表達(dá)量較多，呈深棕黃色的顆粒，細(xì)胞著色較深，高脂組及高脂+阿托伐他汀組較對照組表達(dá)量減少，細(xì)胞著色較淺，平均吸光度值降低(P<0.05)，經(jīng)阿托伐他汀治療后高脂+阿托伐他汀組細(xì)胞著色較高脂組增強(qiáng)(P<0.05)，見圖3。

4Western blot檢測動(dòng)脈組織CXCR7、p-Akt和eNOS的蛋白水平

4.1CXCR7的表達(dá)經(jīng)高脂刺激后小鼠主動(dòng)脈CXCR7的表達(dá)明顯低于正常對照組(P<0.05)，他汀藥物治療后，CXCR7的表達(dá)仍低于正常對照組(P<0.05)，但與高脂組相比有所增加(P<0.05)，見圖4。

Figure 2.Oil red O staining for lipids within the wall of atherosclerotic aortas fromApoE-knockout mice and the measurement of lipid stained area in the aortas. Mean±SD.n=6.*P<0.05vsNDC;#P<0.05vsHFD.

圖2主動(dòng)脈整體油紅O染色及相對斑塊面積比

Figure 3.The protein expression of CXCR7 in the aortas ofApoE-knockout mice (immunohistochemistry,×400). Mean±SD.n=6.*P<0.05vsNDC;#P<0.05vsHFD.

圖3免疫組化檢測主動(dòng)脈CXCR7的表達(dá)情況

Figure 4.The protein expression of CXCR7 in the aortas ofApoE-knockout mice detected by Western blot. Mean±SD.n=6.*P<0.05vsNDC;#P<0.05vsHFD.

圖4Western blot檢測動(dòng)脈組織CXCR7蛋白的表達(dá)

4.2p-Akt的蛋白水平經(jīng)高脂干預(yù)后小鼠動(dòng)脈組織p-Akt的蛋白水平明顯低于正常對照組(P<0.05)，阿托伐他汀藥治療后，小鼠主動(dòng)脈p-Akt的蛋白水平雖低于正常對照組(P<0.05)，但與高脂組相比仍有增加(P<0.05)，見圖5。

Figure 5.The protein levels of p-Akt in the aortas ofApoE-knockout mice detected by Western blot. Mean±SD.n=6.*P<0.05vsNDC;#P<0.05vsHFD.

圖5Western blot檢測動(dòng)脈組織p-Akt蛋白的表達(dá)

4.3eNOS的蛋白水平經(jīng)高脂干預(yù)后小鼠動(dòng)脈組織的eNOS及p-eNOS的蛋白水平明顯低于正常對照組(P<0.05)，阿托伐他汀治療后，小鼠主動(dòng)脈eNOS和p-eNOS的蛋白水平較高脂組明顯增加(P<0.05)，但與正常對照組相比eNOS仍明顯降低(P<0.05)，而p-eNOS的蛋白水平與正常對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見圖6。

Figure 6.The protein levels of eNOS and p-eNOS in the aortas ofApoE-knockout mice detected by Western blot. Mean±SD.n=6.*P<0.05vsNDC;#P<0.05vsHFD.

圖6Western blot檢測動(dòng)脈組織p-eNOS和eNOS蛋白的水平

5血清NO的濃度測定

高脂干預(yù)后小鼠血清NO的濃度明顯低于正常對照組(P<0.05)，阿托伐他汀干預(yù)治療后，小鼠NO的生成較高脂組明顯增加(P<0.05)，但與正常對照組相比差異無統(tǒng)計(jì)意義，見圖7。

Figure 7.The concentration of NO in the plasma ofApoE-knockout mice. Mean±SD.n=12.*P<0.05vsNDC;#P<0.05vsHFD.

圖7血清中一氧化氮的濃度

討論

動(dòng)脈粥樣硬化性疾病是一種慢性炎癥性疾病，是多因素導(dǎo)致的老年性疾病，其中冠狀動(dòng)脈粥樣硬化是冠心病的病理基礎(chǔ)，而血脂異常與其關(guān)系非常密切。研究表明ApoE基因敲除小鼠經(jīng)過高脂飲食誘導(dǎo)后可形成嚴(yán)重的AS，且與人類粥樣斑塊的相似性較高[5]。本實(shí)驗(yàn)通過對ApoE-/-小鼠進(jìn)行高脂飲食干預(yù)后小鼠血清血脂代謝出現(xiàn)明顯異常，血清TC、TG和LDL-C水平升高，HDL-C降低；且小鼠動(dòng)脈HE染色及油紅O染色均可見粥樣斑塊形成，斑塊負(fù)荷明顯，成功建立了動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型小鼠。

CXCL12是一個(gè)多效性的趨化因子，既往認(rèn)為其唯一受體是CXCR4，但Balabanian等[6]于2005年發(fā)現(xiàn)SDF-1的另一個(gè)受體CXCR7，其與配體CXCL12結(jié)合的親和力比CXCR4高10倍左右。與CXCR4相比，CXCR7是一個(gè)非典型性趨化因子受體，其不激活細(xì)胞內(nèi)的G蛋白偶聯(lián)信號(hào)通路，而是通過誘導(dǎo)β-抑制蛋白2的聚集，導(dǎo)致受體的內(nèi)化或者下游信號(hào)通路的激活，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞的生長與黏附[7]。

在成年的ApoE-/-小鼠中，條件性的CXCR7基因缺陷，并給予損傷頸動(dòng)脈及高脂飲食干預(yù)后，發(fā)現(xiàn)在受損的部位有明顯的內(nèi)膜增生及巨噬細(xì)胞的堆積，而給予CXCR7人工配體CCX771能夠明顯改善高脂血癥誘導(dǎo)的血管損傷及斑塊的形成[8]。Zhang等[9]發(fā)現(xiàn)高血壓患者循環(huán)中CXCR7的水平較正常人低，而下調(diào)CXCR7的表達(dá)可以激活p38 MAPK信號(hào)通路，誘導(dǎo)內(nèi)皮祖細(xì)胞caspase-3的表達(dá)，進(jìn)而降低內(nèi)皮祖細(xì)胞的黏附及增殖，損傷內(nèi)皮祖細(xì)胞對高血壓患者損傷內(nèi)皮的修復(fù)作用。而在本實(shí)驗(yàn)中同樣發(fā)現(xiàn)在高脂組中小鼠動(dòng)脈組織在受到高脂因素?fù)p傷后，不僅促進(jìn)了AS的發(fā)展，同時(shí)也下調(diào)了動(dòng)脈組織CXCR7的表達(dá)，表明CXCR7在AS發(fā)展過程中起到保護(hù)性效應(yīng)，可以改善高脂對血管的損傷。

阿托伐他汀被廣泛用于治療及預(yù)防高脂血癥與冠心病，除可降低低密度脂蛋白膽固醇之外，許多研究表明阿托伐他汀還可以改善AS病變的炎癥性改變，促進(jìn)細(xì)胞生存等效應(yīng)[10]。如在心肌梗死小鼠模型中發(fā)現(xiàn)短期服用阿托伐他汀能夠增加受損心肌細(xì)胞CXCR4的表達(dá)，并進(jìn)一步引起eNOS/NO信號(hào)通路的激活起到抗炎及抗凋亡效應(yīng)[11]，在本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)小鼠動(dòng)脈組織CXCR7表達(dá)與阿托伐他汀的干預(yù)呈正相關(guān)，經(jīng)他汀干預(yù)后可以改善高脂損傷導(dǎo)致的CXCR7表達(dá)下降的情況，使其表達(dá)量較高脂組增加，推測阿托伐他汀改善AS病變可能與CXCR7的表達(dá)相關(guān)，他汀可能通過調(diào)節(jié)趨化因子受體的表達(dá)改善高脂對血管的損傷。

磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidyl inositol 3-kinase，PI3K)是一種胞內(nèi)磷脂酰肌醇激酶，分布于多種細(xì)胞內(nèi)，其可通過磷酸化產(chǎn)生磷脂酰肌醇，并與蛋白激酶B(protein kinase B，Akt)結(jié)合，使Akt從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜，進(jìn)而激活下游信號(hào)通路，對細(xì)胞進(jìn)行調(diào)節(jié)。在內(nèi)皮細(xì)胞的研究中發(fā)現(xiàn)上調(diào)PI3K/Akt信號(hào)通路能夠改善氧化低密度脂蛋白導(dǎo)致的內(nèi)皮損傷，抑制氧化應(yīng)激、黏附分子等的表達(dá)，而PI3K、Akt或eNOS的抑制劑能明顯抑制藥物對內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)效應(yīng)[12]，表明影響細(xì)胞PI3K/Akt信號(hào)通路的激活能夠調(diào)節(jié)氧化低密度脂蛋白對細(xì)胞造成的損傷作用。而多數(shù)研究表明CXCR7能夠調(diào)節(jié)PI3K/Akt信號(hào)通路促進(jìn)細(xì)胞的存活，如T細(xì)胞中CXCL12/CXCR7通過與ERK 或Akt信號(hào)通路相互作用可以促進(jìn)T細(xì)胞的存活[13]；此外，血小板來源的巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子也能夠上調(diào)血小板表面CXCR7的表達(dá)，進(jìn)而激活PI3K/Akt信號(hào)通路，延遲血小板的存活以及減少磷脂酰絲氨酸的暴露而調(diào)節(jié)血栓形成[14]。這些表明CXCR7可能通過PI3K/Akt信號(hào)通路調(diào)節(jié)細(xì)胞的凋亡，PI3K/Akt信號(hào)通路是CXCR7的一個(gè)下游調(diào)節(jié)通路機(jī)制。在本實(shí)驗(yàn)中高脂飲食損傷血管并下調(diào)動(dòng)脈組織Akt蛋白的表達(dá)，而他汀干預(yù)后Akt的表達(dá)下調(diào)有所緩解，因此考慮動(dòng)脈組織CXCR7蛋白的表達(dá)上調(diào)可能通過激活細(xì)胞PI3K/Akt信號(hào)通路，進(jìn)而改善高脂血癥導(dǎo)致的內(nèi)皮損傷，氧化應(yīng)激以及炎癥損傷等情況，改善AS的進(jìn)展，但這還需要通過進(jìn)一步的研究進(jìn)行論證。

內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙是AS病變形成的關(guān)鍵起始因素，而內(nèi)皮功能在很大程度上依賴內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)的表達(dá)，由eNOS合成的一氧化氮(nitric oxide，NO)能抑制內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子的表達(dá)、細(xì)胞增殖、遷移，調(diào)節(jié)血管張力及血小板的激活等。因此上調(diào)eNOS表達(dá)促使NO的生成對改善AS非常重要。Akt是細(xì)胞生存的調(diào)節(jié)點(diǎn)，是PI3K的下游效應(yīng)器。許多因素都能夠通過PI3K/Akt信號(hào)通路激活eNOS活性，增加細(xì)胞NO的產(chǎn)生，調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、遷移、存活與血管增生；既往研究證明Akt主要通過磷酸化eNOS的Ser 1177位點(diǎn)，提高eNOS的酶活性，進(jìn)而促進(jìn)NO的生成[15]。在缺氧誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡中，SDF-1/CXCR4上調(diào)能夠減少細(xì)胞凋亡，而PI3K或eNOS的抑制劑的加入可以阻礙其抗凋亡效應(yīng)，表明SDF-1/CXCR4通過PI3K/Akt/eNOS的激活保護(hù)細(xì)胞[16]。在本實(shí)驗(yàn)中，高脂飼養(yǎng)導(dǎo)致ApoE-/-小鼠血管內(nèi)皮損傷及AS病變的發(fā)生，使動(dòng)脈CXCR7、eNOS及Akt蛋白的表達(dá)減少；而阿托伐他汀干預(yù)后緩解了ApoE-/-小鼠動(dòng)脈組織CXCR7、Akt及eNOS的蛋白下降的情況，增加eNOS的活性及NO的釋放，改善AS病變的進(jìn)展，因此推測阿托伐他汀可能通過上調(diào)CXCR7的表達(dá)，激活PI3K/Akt/eNOS信號(hào)通路，保護(hù)細(xì)胞功能，改善動(dòng)脈粥樣硬化，但關(guān)于兩者之間確切的因果關(guān)系仍需要進(jìn)一步的研究進(jìn)行證實(shí)。

綜上所述，高脂飲食可提高實(shí)驗(yàn)ApoE-/-小鼠血脂水平，損傷血管內(nèi)皮，促進(jìn)AS的發(fā)展并下調(diào)動(dòng)脈CXCR7、Akt和eNOS的表達(dá)；而阿托伐他汀干預(yù)后緩解了ApoE-/-小鼠動(dòng)脈CXCR7、Akt和eNOS蛋白水平下降的趨勢，并改善了AS病變，推測它們之間可能存在相關(guān)性。但本研究對于Akt、eNOS與CXCR7之間確切的關(guān)系并未明確，需要更進(jìn)一步的研究對其進(jìn)行論證。

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(責(zé)任編輯： 林白霜， 羅森)

Expression of CXC chemokine receptor 7 in atherosclerotic ApoE-deficient mice and therapeutic impact by atorvastatinTU Xiao-li, CHEN Qi, ZHANG Hong-zhou, YAN Rui-juan, WU Yan-qing

(DepartmentofCardiology,TheSecondAffiliatedHospitalofNanchangUniversity,Nanchang330006,China.E-mail:wuyanqing01@sina.com.cn)

[ABSTRACT]AIM: To evaluate the expression level of CXC chemokine receptor 7 (CXCR7) in atherosclerotic apolipoprotein E-deficient (ApoE-/-) mice induced by high-fat diet (HFD) and the effects of atorvastatin on it. METHODS: ApoE-/-male mice (8-week-old) were used and were randomly divided into 3 groups following 1-week normal rodent diet: normal diet control (NDC) group , HFD group and HFD+statins (HFD+Sat) group. HE staining and oil red O staining were used to observe the atherosclerotic lesion burdens in the aortas. The expression of CXCR7 on the aortas was detected by Western blot and immunohistochemistry. The expression of Akt and endothelial nitric oxide synthase (eNOS) in the aorta was determined by Western blot.RESULTS: Few lesions were found in the aortas in NDC group. Apparent atherosclerotic plaque burdens were seen in HFD group and HFD+Sat group, while the atherosclerotic plaque burdens in HFD+Sat group were notably reduced compared with HFD group. The protein levels of CXCR7, eNOS and Akt in aorta in HFD group and HFD+Sat group were significantly decreased compared with NDC group, while those in HFD+Sat group were increased compared with HFD group. The protein level of p-eNOS in the aorta and the concentration of NO in the plasma in HFD group were decreased compared with NDC group and HFD+Sat group. CONCLUSION: In ApoE-/-mice, HFD increases the lipid level and promotes the development of atherosclerosis by downregulating the expression of CXCR7, Akt and eNOS. Atorvastatin reverses the above effect of hypercholesterolemia on the expression of CXCR7, Akt and eNOS, thus playing the role in treating atherosclerosis.

[KEY WORDS]Atherosclerosis; Apolipoprotein E; CXC chemokine receptor 7; Atorvastatin

通訊作者△Tel: 023-63693702； E-mail：dy070306@126.com

[收稿日期]2015- 05- 28[修回日期] 2015- 08- 30

[文章編號(hào)]1000- 4718(2015)12- 2216- 05

doi:10.3969/j.issn.1000- 4718.2015.12.016

[中圖分類號(hào)]R541.4； R363

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A