林耿冰，郭　楠,林李嵩，施　斌

(1.福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院口腔科，福建 福州 350003；2.福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院口腔頜面外科，福建 福州 350003)

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表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)在口腔癌病理中的應(yīng)用體會(huì)①

林耿冰1，郭楠1,林李嵩2，施斌2

(1.福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院口腔科，福建 福州 350003；2.福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院口腔頜面外科，福建 福州 350003)

摘要:目的:探討表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)在口腔癌病理中的應(yīng)用效果。方法：對(duì)我院收治的31例口腔癌患者資料進(jìn)行分析，將其設(shè)置為對(duì)照組，選擇同期醫(yī)院的31例正?；颊咦鳛閷?duì)照組，采用主成分分析和線性判別分析方采用表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)進(jìn)行分析，比較兩組患者組織間的差異。結(jié)果：光譜的測(cè)量范圍400~1750cm-1波數(shù)。且和沒(méi)有加入膠體組織樣本常規(guī)拉曼光譜信號(hào)相比能夠明顯的觀察譜峰，并且則會(huì)增強(qiáng)譜峰強(qiáng)度，金膠與腫瘤病理組織之間具有較強(qiáng)的作用；31例正正常者口腔組織和口腔癌組織SERS光譜及其標(biāo)準(zhǔn)差具有較大的相似性和其他光譜峰強(qiáng)度差異顯著(P<0.05)。結(jié)論：口腔癌患者在進(jìn)行口腔癌病理分析時(shí)采用表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)效果理想，能夠提高臨床確診率，值得推廣使用。

關(guān)鍵詞:表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)；口腔癌病理；應(yīng)用效果

口腔癌是臨床上常見(jiàn)的疾病，這種疾病發(fā)病率較高，且隨著人們生活節(jié)奏的加快其發(fā)病率出現(xiàn)上升趨勢(shì)，患者發(fā)病后臨床癥狀顯著，且如果不采取積極有效的方法治療將會(huì)誘發(fā)其他疾病，威脅患者生命[1]。常規(guī)方法在檢測(cè)口腔癌時(shí)臨床誤診率或漏診率較高，病理診斷雖然能提高臨床精度，但是診斷時(shí)敏感性較差，從而延誤了患者最佳治療時(shí)機(jī)。近年來(lái)表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)在口腔癌病理中廣為使用，并取得階段性進(jìn)展，這種方法和其他診斷方法相比優(yōu)勢(shì)較多，它能夠提高臨床確診率，為患者后續(xù)治療提供依據(jù)[2]。為了探討表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)在口腔癌病理中的應(yīng)用效果。對(duì)2013-04~2014-04在我院治療的31例口腔癌患者資料進(jìn)行分析，報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

對(duì)在我院治療的31例患者資料進(jìn)行分析，將其設(shè)置為實(shí)驗(yàn)組，其中男21例，女10例，年齡35～68歲，平均(46±0.8)歲，患者從發(fā)病到入院治療時(shí)間為1.1~5.9月，平均病程為(3.2±1.1)月；選擇同期醫(yī)院的31例正?；颊咦鳛閷?duì)照組，男27例，女11例，年齡38～67歲，平均(45±1.3)歲。實(shí)驗(yàn)組患者對(duì)治療方案、護(hù)理措施等有知情權(quán)，患者年齡、病程等差異不顯著(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

入選患者均給予常規(guī)方法檢查，采用主成分分析和線性判別分析方采用表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)進(jìn)行分析，具體如下：(1)材料準(zhǔn)備。采用上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)生的氯金酸、檸檬酸三那，采用質(zhì)量法對(duì)混合統(tǒng)計(jì)以及溶液進(jìn)行調(diào)配，實(shí)驗(yàn)中所使用的天平誤差為是萬(wàn)分之一。(2)金膠的調(diào)配。檢查時(shí)利用檸檬酸鹽還原氯金酸法進(jìn)行配制，調(diào)配方法參照相關(guān)操作步驟進(jìn)行。研究中最終獲得的金膠吸收峰為525mm，金那木離子的平均粒徑為(34±5)nm，然后在離心速度為15000r/min下進(jìn)行10min離心，并將下層濃縮的金膠進(jìn)行避光保存[3]。(3)樣品的準(zhǔn)備和收集。取口腔癌患者以及健康者組織樣品直徑為5~10mm組織塊。所有樣品均采用生理鹽水進(jìn)行清洗，并保存在-80℃條件下，將其制成厚度為25im的冰凍切片，放置在高純度鋁片上。(3)將2μL經(jīng)過(guò)離心濃縮在金膠均勻的滴在組織表面，1min后進(jìn)行測(cè)量，SERS光譜的測(cè)量范圍為400~1650cm-1，設(shè)置相關(guān)參數(shù)，如：激光波長(zhǎng)785nm，顯微鏡頭為20倍物鏡，曝光時(shí)間控制在10s，曝光2次[4]。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS16.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料進(jìn)行χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料行t檢驗(yàn)，采用(均數(shù)±方差)表示，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

本研究中，光譜的測(cè)量范圍400~1750cm-1波數(shù)。且和沒(méi)有加入膠體組織樣本常規(guī)拉曼光譜信號(hào)相比能夠明顯的觀察譜峰，并且則會(huì)增強(qiáng)譜峰強(qiáng)度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：金膠與腫瘤病理組織之間具有較強(qiáng)的作用，見(jiàn)圖1。

圖1　食道癌組織與金膠的拉曼光譜

本研究中，31例正正常者口腔組織和口腔癌組織SERS光譜及其標(biāo)準(zhǔn)差具有較大的相似性和其他光譜峰強(qiáng)度差異顯著(P<0.05)，見(jiàn)圖2。

圖2　口腔癌組織與正常對(duì)照組織平均SERS光譜對(duì)比

3　討論

口腔癌是臨床上常見(jiàn)疾病，這種疾病發(fā)病率較高，且隨著人們生活節(jié)奏的加快其發(fā)病率出現(xiàn)上升趨勢(shì)，影響患者生活質(zhì)量。目前，對(duì)于口腔癌診斷方法相對(duì)較多，常規(guī)診斷方法診斷率雖然較高，但是誤診率或漏診率也較高，對(duì)患者最佳治療等產(chǎn)生很大的影響臨。因此，臨床研究積極有效的口腔癌診斷方法具有重要意義[5]。

近年來(lái)，表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)在口腔癌診斷中廣為使用，且效果理想，本次研究中，光譜的測(cè)量范圍400~1750cm-1波數(shù)。對(duì)比未加入膠體的組織樣本常規(guī)拉曼光譜信號(hào)，SERS光譜中可以觀察明顯譜峰，譜峰強(qiáng)度也有顯著增強(qiáng)。由此說(shuō)明：金膠與組織之間有著強(qiáng)烈的相互作用。研究中采用金納米為增強(qiáng)基底的組織SERS光譜結(jié)合PCA-LDA多元統(tǒng)計(jì)分析算法進(jìn)行口腔癌組織的檢測(cè)和診斷研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：正常組織和口腔癌組織在SERS光譜上存在一定的差異，并且診斷靈敏度和特異性也相對(duì)比較高。且口腔癌組織在發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中生物分子變化明顯[6]。如：和正常組織樣本相比，癌組織中蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)發(fā)生明顯的變化，磷脂質(zhì)的相對(duì)含量將出現(xiàn)明顯的降低，并且組織內(nèi)的氨基化合物和組蛋白等含量將出現(xiàn)上升趨勢(shì)。同時(shí)，臨床上利用表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)聯(lián)合PCA-LDA多元技術(shù)能夠區(qū)分，提高口腔癌確診率。但是，臨床上采用表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)時(shí)對(duì)設(shè)備等要求相對(duì)較高，對(duì)醫(yī)師的專業(yè)技能等要求也比較高，這些均需要進(jìn)一步研究和探討，從而為臨床應(yīng)用提供更加準(zhǔn)確、可靠的信息[7]。本次研究中，31例正正常者口腔組織和口腔癌組織SERS光譜及其標(biāo)準(zhǔn)差具有較大的相似性和其他光譜峰強(qiáng)度差異顯著(P<0.05)。Culha

和 Vo-Dinh等人進(jìn)行了一次實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)中發(fā)展了一系列利用SERS基因探針對(duì)口腔癌患者基因BRCA1和抗凋亡基因BAX的檢測(cè)方法，這種檢測(cè)方法和其他檢測(cè)方法相比優(yōu)勢(shì)較多，它通常是將拉曼活性分子和寡核苷酸鏈結(jié)合形成拉曼檢測(cè)探針，并采用這個(gè)探針和目標(biāo)鏈進(jìn)行雜交，從而將信號(hào)分析轉(zhuǎn)移到金屬基底表明并且能夠產(chǎn)生SERS信號(hào)，從而能夠?qū)δ繕?biāo)鏈實(shí)現(xiàn)檢測(cè)。此外，Cao等人進(jìn)行了一次實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)中將6種拉曼活性標(biāo)志物到6中不同的寡核苷酸鏈上，并且和直徑控制在13nm的金納米粒子結(jié)合得到核酸探針，并且將這個(gè)探針和目標(biāo)鏈在芯片上進(jìn)行一定時(shí)間內(nèi)的雜交，然后采用銀染的方法對(duì)信號(hào)進(jìn)行增強(qiáng)，從而能夠?qū)嶒?yàn)核酸的多組分檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：采用表面增強(qiáng)拉曼光檢測(cè)最低極限能夠達(dá)到20fM。根據(jù)相關(guān)研究結(jié)果顯示：針對(duì)口腔癌的致病基因設(shè)計(jì)的一段發(fā)卡形的分子新表，然后在其兩端修飾巰基和拉曼活性物分子并將其固定在銀納米粒子表面，當(dāng)目標(biāo)DNA和分子新表結(jié)合后可以實(shí)現(xiàn)不同基因的靈敏檢測(cè)[8]。綜上所述，口腔癌患者在進(jìn)行口腔癌病理分析時(shí)采用表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)效果理想，能夠提高臨床確診率，值得推廣使用。

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中圖分類號(hào)：R739.8

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：1008-0104(2015)06-0075-02

作者簡(jiǎn)介：①林耿冰(1972～)男，福建泉州人，博士，副主任醫(yī)師，研究方向：口腔頜面外科，口腔種植?？啤?/p>

(收稿日期：2015-05-25)