賀振燕++胡雪烈++徐亞熙++吳光焰++朱振葉

[摘要] 目的探討抑郁對急性心肌梗死后大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響。方法30只SD大鼠隨機(jī)分為三組，假手術(shù)組，心肌梗死對照組，心肌梗死抑郁組，每組10只。制備相應(yīng)模型并干預(yù)后，用TUNEL法檢測心肌細(xì)胞凋亡，用免疫組織化學(xué)法檢測心肌細(xì)胞Bc1-2、Bax蛋白的表達(dá)。結(jié)果心肌梗死抑郁組和心肌梗死對照組大鼠心肌細(xì)胞凋亡率以及心肌細(xì)胞Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)均高于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），心肌梗死抑郁組大鼠心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)以及心肌細(xì)胞Bax蛋白表達(dá)高于心肌梗死對照組，而心肌細(xì)胞Bcl-2蛋白表達(dá)低于心肌梗死對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P

[關(guān)鍵詞] 抑郁；心肌梗死；大鼠；凋亡；B細(xì)胞淋巴瘤/白血病基因-2；BCl-2相關(guān)基因X

中圖分類號：R542.2

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1009-816X（2015）06-0457-02

急性心肌梗死嚴(yán)重威脅人類健康，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量，心功能不全是心肌梗死發(fā)展的主要結(jié)局，其間發(fā)生一系列的變化：如心肌壞死，心肌重塑等。近年來大量的研究發(fā)現(xiàn)，急性心肌梗死后細(xì)胞凋亡在這個過程中發(fā)揮了至關(guān)重要的作用。近年研究還表明，抑郁已成為急性心肌梗死的獨立危險因素，急性心肌梗死后，尤其是冠狀動脈支架植入者，術(shù)后出現(xiàn)抑郁較常見，再住院率高，備受關(guān)注。本文旨在探討抑郁對急性心肌梗死心肌細(xì)胞的潛在作用機(jī)制，為心肌梗死后心臟康復(fù)方案的介入提供實驗數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料：

1.1.1 實驗動物：健康雄性SD大鼠，共30只，體重250g左右，購于上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司（國家嚙齒類實驗動物種子中心）。

1.1.2 主要試劑：原位末端標(biāo)記（terminal deoxynu- cleotidyl transferase mediated dUTP nick end labeling，TUNE）細(xì)胞凋亡原位檢測試劑盒（武漢博士德公司）；B細(xì)胞淋巴瘤/白血病基因-2（B-cell lymphonma/leukemia gene 2.Bcl-2）、Bcl-2相關(guān)基因X（Bcl-2 Assaci-ated X protein，Bax）抗體、免疫組化試劑盒（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）。

1.2 實驗方法：

1.2.1 大鼠急性心肌梗死模型的制作：1.5%戊巴比妥溶液腹腔注射麻醉大鼠后，行氣管插管連接呼吸機(jī)，于左側(cè)第4肋間開胸，暴露心臟并結(jié)扎左冠狀動脈前降支，檢測肢導(dǎo)心電圖ST明顯抬高或Q波出現(xiàn)即可認(rèn)為心肌梗死動物模型造模成功。

1.2.2 大鼠抑郁模型的制作：根據(jù)文獻(xiàn)，心肌梗死模型造模成功后大鼠孤養(yǎng)，隨機(jī)選取以下各種刺激：冰水游泳、禁食、電擊足底、夾尾、鼠籠傾斜、停水、懸吊、40度環(huán)境，制作大鼠抑郁模型。參照文獻(xiàn)，少動并有焦慮及抑郁樣癥狀的大鼠作為抑郁癥大鼠成功制備標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.3 分組雄性SD大鼠30只，隨機(jī)抽取10只大鼠作為假手術(shù)組，其余20只進(jìn)行急性心肌梗死造模。假手術(shù)組手術(shù)步驟同急性心肌梗死模型組，但不結(jié)扎冠狀動脈。大鼠心肌梗死模型制作成功1周后，隨機(jī)分成兩組，心肌梗死對照組（n=10）：不給予任何刺激，群養(yǎng)每籠5只；心肌梗死抑郁組（n=10）瓢養(yǎng)，按照上述大鼠抑郁模型方案制作。

1.2.4 檢測指標(biāo)及方法：①心肌細(xì)胞凋亡檢測應(yīng)用TUNEL法原位標(biāo)記凋亡細(xì)胞核。嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。心肌細(xì)胞凋亡率：視野內(nèi)凋亡心肌細(xì)胞核數(shù)/視野內(nèi)所有細(xì)胞核數(shù)×100%。②Bcl-2和Bax蛋白的檢測采用SP免疫組織化學(xué)染色法，參照免疫組化試劑盒說明書，嚴(yán)格按照SP試劑盒操作步驟行免疫組織化學(xué)染色，每張切片隨機(jī)取5個高倍視野（×400），計數(shù)每個高倍視野內(nèi)的陽性細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞總數(shù)，求其平均值。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理：使用SPSS18.0版統(tǒng)計軟件，計量資料以（x±s）表示，多組間比較用方差分析和q檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

抑郁對心肌梗死大鼠心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)及Bcl-2、Bax表達(dá)的影響：心肌梗死對照組與心肌梗死抑郁組大鼠心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)均高于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），心肌梗死抑郁組大鼠心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)高于心肌梗死對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。心肌梗死抑郁組與心肌梗死對照組大鼠心肌細(xì)胞Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)均高于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），心肌梗死抑郁組大鼠心肌細(xì)胞Bax蛋白表達(dá)高于心肌梗死對照組，而Bcl-2蛋白表達(dá)低于心肌梗死對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），見表1。

3 討論

急性心肌梗死后心肌細(xì)胞壞死，致心肌細(xì)胞數(shù)量急劇減少，并發(fā)生形態(tài)學(xué)改變，加致血流動力學(xué)障礙，最終導(dǎo)致心功能受損。心肌梗死后患者心理壓力大，生活質(zhì)量下降，但其心理狀況很少被重視，導(dǎo)致抑郁發(fā)病率增高。Alcantara等研究，抑郁可增加急性心肌梗死患者的死亡率。心肌梗死后抑郁生活狀態(tài)，導(dǎo)致心功能進(jìn)一步下降，給社會和家庭造成沉重的負(fù)擔(dān)。急性心肌梗死后多種因素誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡，從而加速心室重構(gòu)，加快心功能惡化進(jìn)程。目前研究認(rèn)為細(xì)胞凋亡基因Bcl-2，Bax起重要的決定作用。Bcl-2抑制細(xì)胞凋亡，Bax基因高度表達(dá)會加速細(xì)胞凋亡。Bcl-2及Bax比值增大說明細(xì)胞凋亡被抑制程度高，反之則細(xì)胞凋亡程度高。本研究顯示：心肌梗死抑郁組大鼠心肌細(xì)胞Bcl-2蛋白表達(dá)低于心肌梗死對照組，而Bax蛋白表達(dá)高于心肌梗死對照組。從而得出抑郁可增加急性心肌梗死大鼠心肌細(xì)胞凋亡，其作用可能與促進(jìn)促凋亡基因Bax表達(dá)、抑制抗凋亡基因Bcl-2的表達(dá)有關(guān)，由此為早期心臟心理康復(fù)介入提供實驗數(shù)據(jù)，也可作為進(jìn)一步研究具體機(jī)制的基礎(chǔ)。