程楓 王偉斌 朱磊

[摘要] 目的 觀察腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAMs）在甲狀腺乳頭狀癌（PTC）的表達(dá)，探討其在PTC侵襲轉(zhuǎn)移中的作用。方法 選取我院2010年10月～2013年10月期間經(jīng)病理診斷為PTC患者80例，取病理標(biāo)本，采用免疫組化法檢測(cè)TAMs表達(dá)，對(duì)其臨床特征進(jìn)行分析。 結(jié)果 TAMs在PTC中存在較高的表達(dá)（3～66/HP），高密度TAMs組腫瘤組織直徑（1.6±0.1）cm明顯大于低密度TAMs組（1.0±0.1）cm（P<0.01）。高密度TAMs組較低密度TAMs組腫瘤浸潤(rùn)深度更深，且有更多的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，Ⅲ期以上病例數(shù)也更多。 結(jié)論 TAMs有促進(jìn)PTC生長(zhǎng)的作用，在PTC的侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮促進(jìn)作用。

[關(guān)鍵詞] 腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞；甲狀腺乳頭狀癌；免疫組化；侵襲轉(zhuǎn)移

[中圖分類號(hào)] R736.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-9701（2015）34-0011-03

The expression and clinical significance of tumor-associated macrophages in papillary thyroid carcinoma

CHENG Feng1 WANG Weibin2 ZHU Lei1

1.Department of General Surgery，the Central Hospital of Lishui City in Zhejiang Province， Lishui 323000， China；2.Department of Oncology Surgery，the First Affiliated Hospital to College of Medicine of Zhejiang University， Hangzhou 310003， China

[Abstract] Objective To investigate the expression of tumor-associated macrophages（TAMs） in human papillary thyroid carcinoma （PTC） and the role of TAMs in invasion and metastasis of PTC. Methods Eighty patients who underwent surgeries after being diagnosed with PTC from Oct 2010 to Oct 2013 were included. Their paraffin-embedded tumor tissues were investigated using immunohistochemistry （IHC） and the clinical characteristics according to TAMs density was evaluated. Results The TAM densities varied from 3-66/HP， and tumors in the high density group were larger than those in the low density group [（1.6±0.1） cm vs （1.0±0.1） cm，P<0.01]. Meanwhile， in the high density group， the tumor infiltration was deeper， and more lymph node metastasis and the number of post-phase Ⅲ cases were found. Conclusion TAMs has an effect on promoting the growth of the PTC， and plays an important role in invasion and metastasis of PTC.

[Key words] Tumor-associated macrophages； Papillary thyroid carcinoma； Immunohistochemistry； Invasion and metastasis

腫瘤相關(guān)的巨噬細(xì)胞（tumor-associated macrophages，TAMs），早在上世紀(jì)80年代被描述，是一類與腫瘤相關(guān)有復(fù)雜功能的單核-巨噬細(xì)胞的總稱，由外周血單核細(xì)胞在一些趨化因子和腫瘤壞死因子的作用下定向遷移至腫瘤組織中分化而成。TAMs是一種分泌功能很強(qiáng)的細(xì)胞，可分泌多種細(xì)胞生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移因子、降解細(xì)胞基質(zhì)的酶等，從多方面影響腫瘤細(xì)胞局部的微環(huán)境，加速腫瘤的浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移[1，2]。TAMs作用有一定的組織特異性，高密度TAMs存在于腫瘤晚期并提示預(yù)后差，像乳腺癌、肺癌、膀胱癌等[3-5]。盡管高密度的TAMs存在于低分化的乳頭狀甲狀腺癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）有被報(bào)道，但其分布和功能在PTC中仍未被研究清楚。我們討論TAMs在PTC組織中表達(dá)并結(jié)合臨床特征研究TAMs在PTC發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料來(lái)源

于2010年10月～2013年10月在我院住院患者行甲狀腺全切或次切術(shù)，同時(shí)行頸部中央?yún)^(qū)淋巴結(jié)清掃，術(shù)后經(jīng)病理診斷為乳頭狀甲狀腺癌，有或無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。全部病例在術(shù)前均無(wú)放療、化療及免疫抑制治療史，無(wú)甲狀腺功能亢進(jìn)、類風(fēng)濕、糖尿病等疾病。標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，4 μm切片。

1.2 TAMs免疫組化染色

用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)TAMs的分子標(biāo)記物CD68，微波修復(fù)抗原，將已脫蠟的組織切片放入已預(yù)熱至100℃的EDTA修復(fù)液（1 mmol，pH 8.0）中保持15 min，加一抗4℃過(guò)夜，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，中性樹(shù)膠封片。一抗、二抗及SP試劑盒等均購(gòu)于上海生工生化公司。PBS代替一抗作陰性對(duì)照。

1.3 陽(yáng)性結(jié)果判定及分組

CD68陽(yáng)性表達(dá)于巨噬細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)，細(xì)胞質(zhì)含清晰的黃褐色至棕黃色顆粒狀者為陽(yáng)性細(xì)胞。低倍光學(xué)顯微鏡下找到5個(gè)CD68陽(yáng)性細(xì)胞聚集最多的“熱點(diǎn)”（hot spot）后，在200倍高倍光學(xué)顯微鏡下計(jì)數(shù)每個(gè)“熱點(diǎn)”區(qū)的5個(gè)視野，計(jì)算每個(gè)視野陽(yáng)性細(xì)胞的平均值標(biāo)記為該標(biāo)本中TAM的浸潤(rùn)密度。參考其他同類文獻(xiàn)，取本組所有甲狀腺癌病例的TAMs浸潤(rùn)密度的中位數(shù)作為高低密度的分界點(diǎn)，按TAM浸潤(rùn)密度分為低密度組和高密度組。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般臨床特征

回顧性分析我院2010年10月～2013年10月期間住院患者80例，其中女60例（75%），平均年齡（54.1±10.2）歲（38～79歲），腫瘤組織直徑大?。?.3±0.1）cm，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移占32例（40%），侵犯包膜占50例（62.5%），按照國(guó)際抗癌協(xié)會(huì)聯(lián)盟（UICC）和美國(guó)抗癌聯(lián)合會(huì)（AJCC）的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅲ期以上24例（30%），見(jiàn)表1。

2.2 TAMs染色結(jié)果及分組

免疫組化染色的切片中CD68陽(yáng)性的巨噬細(xì)胞呈棕紅色顆粒狀，胞漿和（或）胞膜著色，細(xì)胞體積較大，形態(tài)多樣，呈不規(guī)則形，在癌組織中彌散或聚集分布，見(jiàn)圖1A、B。80例甲狀腺癌病理切片中TAM為3～66/HP，其中位數(shù)為30.5/HP。以中位數(shù)為界將甲狀腺癌組分為兩組：TAMs高密度組和TAM低密度組。高密度組40例，TAM中位數(shù)為48（31～66）/HP；低密度組40例，TAM中位數(shù)為12（3～30）/HP。

2.3 兩組臨床特征比較

兩組患者的年齡、性別等無(wú)顯著差異，TAMs高密度組腫瘤直徑顯著高于低密度組[（1.6±0.1） cm vs. （1.0±0.1） cm，P<0.01]，高密度TAMs組較低密度TAMs組腫瘤浸潤(rùn)深度更深，有更多的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，Ⅲ期以上例數(shù)也更多，見(jiàn)表1。

3 討論

TAMs是一類與腫瘤相關(guān)、有復(fù)雜功能的單核-巨噬細(xì)胞的總稱，近年越來(lái)越多的研究表明腫瘤組織通過(guò)表達(dá)CD68分子的巨噬細(xì)胞（TAMs）參與腫瘤血管生成、免疫抑制等多種機(jī)制促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展，在促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)、侵犯和轉(zhuǎn)移中起重要作用，臨床研究表明在肺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、膀胱癌、經(jīng)典型霍奇金氏淋巴瘤組織中TAMs浸潤(rùn)密度與腫瘤患者的生存密切相關(guān)，可能是獨(dú)立的預(yù)后因子[6-15]。然而，TAMs在PTC中的作用尚存爭(zhēng)議，相關(guān)研究的資料目前仍十分有限，尤其是基礎(chǔ)方面的研究。

本研究顯示TAMs在PTC中存在較高的表達(dá)，高密度TAMs組腫瘤組織體積明顯大于低密度組，同時(shí)更多的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、更多的包膜侵犯等發(fā)生在高密度TAMs組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?；谶@些發(fā)現(xiàn)，我們認(rèn)為T(mén)AMs有促進(jìn)PTC癌細(xì)胞生長(zhǎng)作用，并在腫瘤轉(zhuǎn)移和侵犯中發(fā)揮重要作用。與既往的一些研究相似。Ryder[16]等發(fā)現(xiàn)TAMs密度在低分化的PTC和間變的甲狀腺癌中均高于分化良好的PTC，Qing[17]等報(bào)道TAM密度在3期腫瘤組織中更高。然而，F(xiàn)iumara[18]等用CD68免疫組化發(fā)現(xiàn)TAMs避免了腫瘤在部分病人轉(zhuǎn)移，這些患者有更少的血管浸潤(rùn)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)等。雖說(shuō)研究結(jié)果不一致，但總的來(lái)說(shuō)，傾向于TAMs有促進(jìn)甲狀腺癌增長(zhǎng)的報(bào)道多一些。

TAMs在腫瘤或PTC生長(zhǎng)、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制是多方面的，結(jié)合既往研究結(jié)果，其可能的原因有[19-24]：①TAMs在腫瘤微環(huán)境中經(jīng)腫瘤細(xì)胞作用下喪失了殺滅腫瘤作用而轉(zhuǎn)為促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)效應(yīng)，從而造成腫瘤的免疫逃逸。②腫瘤細(xì)胞生存和轉(zhuǎn)移依賴新生血管生成，TAMs多集聚在血管紊亂、腫瘤壞死的低氧區(qū)，低氧又促進(jìn)TAMs聚集，參與腫瘤血管生成及細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）降解。③腫瘤組織中都有大量免疫細(xì)胞浸潤(rùn)，如T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、NK 細(xì)胞和TAMs，而TAMs數(shù)量常占顯著優(yōu)勢(shì)。TAMs多具M(jìn)2表型，抗原遞呈能力弱，抗腫瘤效應(yīng)被抑制，具有促腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移作用。

在本研究中我們也觀察了TAMs形態(tài)學(xué)，發(fā)現(xiàn)盡管TAMs存在，但甲狀腺癌組織的形態(tài)學(xué)特征仍被保持，因此，我們懷疑TAMs并沒(méi)有對(duì)PTC發(fā)展起到特別巨大的作用，這也和我們的研究結(jié)果基本一致，如雖然更多的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、更多的包膜侵犯等發(fā)生在高密度TAMs組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

關(guān)于TAMs在甲狀腺癌中的研究今年來(lái)逐漸增多，特別是國(guó)外，但是關(guān)于機(jī)制的研究數(shù)據(jù)仍然很少。甲狀腺癌因?yàn)槠湓鲋乘俣嚷?，有相?duì)良好的進(jìn)程，因此，其病理生理過(guò)程中并沒(méi)有特別適合TAMs的作用。當(dāng)前，TAMs的作用僅僅在侵襲性的乳腺癌、肺癌和膀胱癌有相對(duì)一致的意見(jiàn)。我們的研究結(jié)果顯示TAMs同樣存在于PTC，其作用在癌癥的發(fā)展中是存在的。不管怎么說(shuō)，更大樣本的、前瞻性的研究在接下來(lái)是必需的。

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（收稿日期：2015-06-09）