SDF-1和LGR5在結(jié)腸癌中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系

馬靖靖劉付寶1馮振中2

(蚌埠醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院普外二科，安徽蚌埠233000)

摘要〔〕目的探討結(jié)腸癌組織中基質(zhì)細(xì)胞衍生因子(SDF)-1和富含亮氨酸重復(fù)序列的G蛋白耦聯(lián)受體(LGR)5在人結(jié)腸癌中的表達(dá)情況及其與結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的關(guān)系。方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測SDF-1及LGR5在結(jié)腸癌組織標(biāo)本80例以及癌旁正常結(jié)腸組織標(biāo)本20例中的表達(dá)水平，分析其與臨床病理因素之間的關(guān)系。結(jié)果結(jié)腸癌組織中SDF-1和LGR5陽性表達(dá)率分別為61.25%(49/80)、55.00%(44/80)，SDF-1以及LGR5在癌旁正常組織中的陽性率分別為15.00%(3/20)和5.00%(1/20)，兩者存在顯著差異。SDF-1的表達(dá)與腫瘤分化程度、TNM分期以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)，但與性別、年齡無關(guān)(P>0.05)。LGR5在結(jié)腸癌組織中的陽性表達(dá)與TNM分期以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)，但與腫瘤分化程度、性別、年齡無關(guān)(P>0.05)。結(jié)論SDF-1、LGR5在結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展過程中起到促進(jìn)的作用，有可能作為結(jié)腸癌早期篩查和后期靶向治療的腫瘤分子標(biāo)志物，同時(shí)可能為結(jié)腸癌患者的治療開辟新的途徑。

關(guān)鍵詞〔〕SDF-1；LGR-5；結(jié)腸癌

中圖分類號(hào)〔〕R735〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A〔

1安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院

2蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院病理科

第一作者：馬靖靖(1983-)，女，住院醫(yī)師，主要從事普外科研究。

富含亮氨酸重復(fù)序列的G蛋白耦聯(lián)受體(LGR5)也稱為G蛋白耦聯(lián)受體(GPR)49，是一種腸干細(xì)胞分子標(biāo)志物。大量研究〔1，2〕表明，LGR5在結(jié)直腸癌、卵巢癌、食管腺癌等各種惡性腫瘤組織中有過陽性表達(dá)?；|(zhì)細(xì)胞衍生因子(SDF)-1及其受體——CXC趨化因子受體(CXCR)4參與多種信號(hào)傳導(dǎo)過程，影響細(xì)胞的存活、繁殖并引起轉(zhuǎn)化細(xì)胞內(nèi)鈣流等信號(hào)的發(fā)生，同時(shí)也是炎癥細(xì)胞遷移的重要因子。SDF-1能調(diào)控心臟與神經(jīng)發(fā)育、干細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、血管形成及腫瘤發(fā)生等多種生物學(xué)過程，并且與造血干祖細(xì)胞的動(dòng)員和歸巢關(guān)系密切。本研究通過檢測SDF-1及LGR-5在結(jié)腸癌組織和癌旁正常組織中的表達(dá)，探討其與結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的關(guān)系。

1材料與方法

1.1研究對象收集本院2012年4月到2013年10月資料完整的結(jié)腸癌組織標(biāo)本80例以及癌旁正常結(jié)腸組織標(biāo)本20例，男46例，女34例，年齡55～85〔平均(69.11±2.25)〕歲。對所有被收集標(biāo)本的臨床病理參數(shù)包括年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤分級、腫瘤TNM分期等信息進(jìn)行分析，所有病理組織均經(jīng)4%中性甲醛固定及石蠟包埋處理。

1.2主要試劑和方法兔抗人SDF-1多克隆抗體(Santa Cruz，USA)工作濃度為1∶50，兔抗人LGR5抗體(Abcam公司)，即用型鼠、兔聯(lián)用二抗、DAB 顯色液(Dako公司)，稀釋度1∶400。免疫組化染色及雙標(biāo)染色按照試劑盒說明操作。采用直接法免疫熒光染色，操作步驟參照試劑盒說明書。LGR5的免疫組化陽性標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)陽性細(xì)胞比例和染色強(qiáng)度分別行半定量評分，SDF-1的陽性標(biāo)準(zhǔn)按照染色均勻的陽性表達(dá)腫瘤區(qū)域和染色強(qiáng)度兩個(gè)方面進(jìn)行判斷。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS19.0軟件行χ2檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1SDF-1和LGR5的表達(dá)LGR5陽性染色位于胞質(zhì)，多靠近胞核，呈顆粒狀，在癌旁正常組織中SDF-1僅在少量上皮細(xì)胞中表達(dá)，SDF-1以及LGR5在癌旁正常組織中的陽性率分別為15.00%(3/20)和5.00%(1/20)，結(jié)腸癌組織中SDF-1和LGR5陽性表達(dá)率分別為61.25%(49/80)、55.00%(44/80)，明顯高于癌旁正常組織(P<0.01)。熒光染色和雙標(biāo)染色的結(jié)果與免疫組化染色相似。見圖1。

A：有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌中LGR5表達(dá)( );B：無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌中LGR5表達(dá)(+);C：結(jié)腸高分化腺癌中SDF-1表達(dá)(+);D：結(jié)腸低分化腺癌中SDF-1表達(dá)( ) 圖1　SDF-1和LGR5的表達(dá)情況(×40)

2.2結(jié)腸癌 SDF-1和LGR5臨床病理資料分析SDF-1的表達(dá)與腫瘤分化程度、TNM分期以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)，但與性別、年齡無關(guān)(P>0.05)。LGR5在結(jié)腸癌組織中的陽性表達(dá)與TNM分期以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)，但與腫瘤分化程度、性別、年齡無關(guān)(P>0.05)。見表1。

表1結(jié)腸癌組織SDF-1和LGR5表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系〔n(%)〕

臨床病理參數(shù)nSDF-1陽性χ2/P值LGR5陽性χ2/P值性別 男4630(65.22)0.718/>0.0527(58.70)0.597/>0.05 女3419(55.88)17(50.00)年齡(歲)55～704328(65.12)0.586/>0.0526(60.47)1.122/>0.0571～853721(56.76)18(48.65)腫瘤分化程度低分化2923(79.31)6.417/<0.0515(51.72)4.392/>0.05中分化3418(52.94)19(55.88)高分化178(47.06)10(58.82)TNM分期Ⅰ期104(40.00)9.907/<0.052(20.00)9.301/<0.05Ⅱ期219(42.86)10(47.62)Ⅲ期2516(64.00)14(56.00)Ⅳ期2420(83.33)18(75.00)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有2924(82.76)8.867/<0.0521(72.41)4.721/<0.05無5125(49.02)23(45.10)

3討論

相關(guān)研究〔3，4〕證實(shí)，腫瘤細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移受到趨化因子的調(diào)控；同時(shí)，不同組織器官起源的腫瘤具有不同的轉(zhuǎn)移特點(diǎn)以及靶器官親嗜性，而此親嗜性是由于靶器官特異性表達(dá)多種趨化因子與腫瘤細(xì)胞表達(dá)的受體相互作用導(dǎo)致的。因此，研究人員推測，在腫瘤的轉(zhuǎn)移過程當(dāng)中可能也采用了與白細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)類似的趨化因子介導(dǎo)機(jī)制〔5〕。

趨化因子SDF-1由68個(gè)氨基酸組成，屬于CXC趨化因子家族，國際命名為CXCL12。SDF-1是一種炎癥趨化因子；SDF-1又與腫瘤相關(guān)，是CXCR4的特異性配體，由SDF-1/CXCR4構(gòu)成的生物軸對腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及浸潤轉(zhuǎn)移發(fā)生作用。有實(shí)驗(yàn)〔6〕表明，SDF-1/CXCR4在胃癌組織中高表達(dá)，尤其在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中的表達(dá)更明顯，并且與漿膜外浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，提示SDF-1/CXCR4軸可能在促進(jìn)胃癌組織生長、侵襲、轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。同時(shí)，有研究〔5〕表明CXCR4可在包括結(jié)腸癌在內(nèi)的很多腫瘤中表達(dá)。

LGR5是一種腸干細(xì)胞分子標(biāo)志物，是最新發(fā)現(xiàn)的Wnt通路的靶基因，是潛在的結(jié)腸癌干細(xì)胞標(biāo)志物，與結(jié)腸癌的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)〔7〕。且有研究〔1，2〕表明，LGR-5表達(dá)在胃腺體的底部，譜系追蹤實(shí)驗(yàn)表明整個(gè)腺體來源于LGR5細(xì)胞，并且LGR5細(xì)胞在胃上皮可能代表了干細(xì)胞。

本研究結(jié)果顯示，SDF-1和LGR5在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁正常組織，說明SDF-1和LGR5能夠影響結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展。LGR5作為干細(xì)胞分子標(biāo)志物，其在結(jié)腸癌中的高表達(dá)說明結(jié)腸癌的發(fā)生可能與腫瘤干細(xì)胞有關(guān)。研究〔8〕發(fā)現(xiàn)配對的癌旁組織中 LGR5表達(dá)的陽性率雖然明顯高于癌旁正常組織，但是與癌組織比率幾乎相同，說明LGR5已經(jīng)在結(jié)腸癌形成之前或癌變早期發(fā)揮作用。因此，LGR5可能作為結(jié)腸癌早期篩查和診斷的腫瘤分子標(biāo)志物。SDF-1及其受體在促進(jìn)腫瘤細(xì)胞定向遷移中起著重要的作用。所以SDF-1 抑制劑的研究可以為結(jié)腸癌患者的治療開辟新的途徑。

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〔2013-11-21修回〕

(編輯徐杰)