慢性乙型肝炎患者外周血T細(xì)胞亞群的表達(dá)及意義

覃羽華岑光旅1王俊利許桂丹唐任光

(右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，廣西百色533000)

關(guān)鍵詞〔〕慢性乙型肝炎；T細(xì)胞亞群；細(xì)胞免疫功能

中圖分類(lèi)號(hào)〔〕R512.6+2〔

基金項(xiàng)目：百色市科學(xué)研究與技術(shù)開(kāi)發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(No.1005004)

通訊作者：唐任光(1966-)，男，教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)和臨床輸血檢驗(yàn)研究。

1百色市人民醫(yī)院

第一作者：覃羽華(1985-)，女，副主任技師，主要從事細(xì)胞免疫學(xué)研究。

慢性乙型肝炎(CHB)可發(fā)展為肝硬化，肝衰竭以及肝細(xì)胞癌等。機(jī)體在感染乙型肝炎病毒(HBV)后，通過(guò)誘發(fā)機(jī)體的免疫反應(yīng)間接損傷肝細(xì)胞，病毒的控制和清除有賴(lài)于機(jī)體的免疫系統(tǒng)，因此疾病發(fā)生、發(fā)展與宿主的細(xì)胞免疫功能狀態(tài)密切相關(guān)〔1〕。桂西地區(qū)是乙型肝炎的高發(fā)地區(qū)，對(duì)其進(jìn)行相應(yīng)的研究具有重要的意義。為此，本文檢測(cè)該地區(qū)105例CHB患者T細(xì)胞亞群的表達(dá)規(guī)律，以了解患者機(jī)體的細(xì)胞免疫功能變化及與臨床的關(guān)系。

1對(duì)象與方法

1.1對(duì)象①CHB組：選取2010年1月至2011年3月間桂西地區(qū)臨床診斷為CHB的住院及門(mén)診患者105例(輕度26例，中度34例，重度32例,肝炎后肝硬化13例)，其中男63例，女42例，年齡26～68歲，平均(47.2±19.8)歲。診斷標(biāo)準(zhǔn)符合2000年中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲(chóng)病學(xué)會(huì)和肝病學(xué)分會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議制定的標(biāo)準(zhǔn)〔2〕，所選病例均不合并其他病毒感染，如甲、丙、戊、庚型肝炎病毒和HIV病毒感染等。②對(duì)照組：20例，男12例，女8例，年齡24～58歲，平均(41.2±17.6)歲，均為醫(yī)院健康查體和醫(yī)務(wù)工作者。

1.2試劑和儀器實(shí)驗(yàn)中使用三標(biāo)記單克隆抗體CD3-PC5/CD4-FITC/CD8-PE，雙標(biāo)記單克隆抗體CD3/CD16+CD56-PE，CD28-FITC，均購(gòu)自BECKMAN COULTER公司產(chǎn)品。流式細(xì)胞儀為美國(guó)BD FACSCalibur型。

1.3方法分別在兩個(gè)試管中先加入擬標(biāo)記抗體10 μl，再加入EDTA抗凝的外周靜脈血50 μl(另設(shè)一管陰性對(duì)照)，輕微振蕩混勻，室溫避光放置15 min,每管加入溶血?jiǎng)?00 μl充分混勻，室溫避光放置15 min，待完全溶血后1 200 r/min離心5 min，棄去上清，加入1 000 μl鞘液，混勻1 200 r/min離心5 min，棄上清，加鞘液500 μl，充分混勻使細(xì)胞懸浮，流式細(xì)胞儀檢測(cè)，每管獲取細(xì)胞10 000個(gè)。T細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞的測(cè)定結(jié)果用CellQuest 軟件分析。

2結(jié)果

與對(duì)照組相比較，CHB組CD3+CD4+CD8-和CD8+CD28+的百分率及CD4+/CD8+比值均有所降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，尤其是重度CHB和肝炎后硬化組下降更為顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，下降幅度與疾病的嚴(yán)重程度有關(guān)；肝炎后硬化組CD3+CD4-CD8+和CD8+CD28-的百分率比對(duì)照組偏高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；重度CHB和肝炎后肝硬化組CD3-/CD16+56+的百分率則比對(duì)照組偏低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05和P<0.01)，其余組與對(duì)照組相比均無(wú)明顯改變(P>0.05)；各組CD3+T細(xì)胞的百分率無(wú)明顯改變(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1　CHB患者外周血T細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果

與對(duì)照組比較：1)P<0.05,2)P<0.01

3討論

人體感染HBV后,體內(nèi)抗病毒的免疫反應(yīng)主要是細(xì)胞免疫,而T細(xì)胞在特異性免疫應(yīng)答中起關(guān)鍵作用,當(dāng)細(xì)胞免疫功能正常時(shí)，T細(xì)胞通過(guò)有效地溶細(xì)胞或非溶細(xì)胞機(jī)制清除病毒,感染可得到控制，但細(xì)胞免疫功能低下時(shí)，機(jī)體不能有效清除HBV導(dǎo)致病毒長(zhǎng)期存在引發(fā)肝炎慢性化〔3，4〕。T細(xì)胞亞群是目前臨床上最常用的反映細(xì)胞免疫功能狀態(tài)的指標(biāo)，本研究從對(duì)照組到肝炎后肝硬化組，CD4+T細(xì)胞百分比和CD4+/CD8+比值逐漸下降，與文獻(xiàn)〔5〕報(bào)道相同。CD4+T細(xì)胞主要為輔助性T細(xì)胞(Th細(xì)胞)，被抗原激活后可促進(jìn)CD8+T細(xì)胞的活化與增殖，同時(shí)使B細(xì)胞分泌抗體,誘導(dǎo)細(xì)胞免疫和體液免疫的產(chǎn)生，對(duì)HBV的清除起重要作用。本結(jié)果表明在CHB患者中存在細(xì)胞免疫功能紊亂、低下，使得HBV復(fù)制增強(qiáng)不能被有效清除，與李鴻賓等〔6〕報(bào)道一致。本文顯示，各CHB組患者CD8+和CD8+CD28-的比例與對(duì)照組無(wú)明顯差異，在肝炎后肝硬化組中的百分率比對(duì)照組略高，CD8+CD28+的比例則隨著病程的進(jìn)展而降低。CD8+T細(xì)胞具有特異性殺傷靶細(xì)胞抗感染的功能，但在清除病毒的同時(shí)也引起了肝細(xì)胞的破壞、凋亡，肝功能的損害，與肝炎后肝硬化、肝腹水的形成有一定的關(guān)系。CD8+CD28+T細(xì)胞的降低和CD8+CD28-T細(xì)胞的增多是T細(xì)胞功能下降的標(biāo)志〔7〕。CD8+CD28+T細(xì)胞的減少使特異性細(xì)胞免疫功能降低，CD8+CD28-T細(xì)胞相對(duì)增多而抑制CD4+T細(xì)胞，使機(jī)體對(duì)病毒反應(yīng)性減弱，引起清除病毒的能力降低，這兩方面與HBV存在持續(xù)感染、病情遷延不愈相關(guān)〔8，9〕。NK細(xì)胞不表達(dá)特異性抗原識(shí)別受體，屬非特異性免疫細(xì)胞，無(wú)需抗原預(yù)先致敏，就可直接殺傷病毒感染的靶細(xì)胞，在維持和調(diào)節(jié)特異性免疫中起重要作用。本研究表明，HBV侵入人體會(huì)破壞機(jī)體NK細(xì)胞的功能,表現(xiàn)為重度CHB和肝炎后肝硬化患者外周血CD16+56+細(xì)胞比例顯著低于對(duì)照組，說(shuō)明機(jī)體細(xì)胞免疫功能處于抑制狀態(tài)，對(duì)NK細(xì)胞進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀(guān)察有助于判定免疫增強(qiáng)類(lèi)藥物的療效。

綜上所述，特異性免疫及非特異性免疫在CHB損傷中都發(fā)揮了重要的作用，值得深入研究〔10〕。了解CHB患者外周血T細(xì)胞亞群的表達(dá)，對(duì)尋找能夠有效抑制或消除HBV，減少和防止不良預(yù)后發(fā)生的治療方法或藥物有著重要的意義。

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〔2013-03-01修回〕

(編輯曹夢(mèng)園)