伍建業(yè)+++楊苗苗+++錢(qián)賢峰

[摘要] 目的 分析老年乙肝（CHB）和乙肝病毒（HBV）相關(guān)肝硬化患者外周血輔助性T細(xì)胞17（Th17）臨床意義，探討Th17對(duì)相關(guān)疾病的診斷價(jià)值。 方法 將我院收治的老年HBV感染者按病變類(lèi)型分為CHB組及HBV相關(guān)性肝硬化組，另選80例老年健康體檢者納入正常組。比較各組Th17頻率、白細(xì)胞介素-17（IL-17）、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）表達(dá)與分布，探討Th17、IL-17、α-SMA表達(dá)的相關(guān)性。 結(jié)果 HBV相關(guān)肝硬化組Th17頻率、IL-17、IL-17 mRNA及α-SMA水平顯著高于CHB組，CHB組上述指標(biāo)顯著高于正常組（P<0.05）。CHB組ALT、HBV DNA載量顯著高于HBV相關(guān)性肝硬化組，而TBIL顯著低于后者，兩組ALT、TBIL均顯著高于正常組（P<0.05）。相關(guān)性分析表明，Th17頻率與IL-17、α-SMA呈正相關(guān)（P<0.05），與ALT、TBIL、HBV DNA載量無(wú)明顯相關(guān)性（P>0.05）。結(jié)論 老年肝病患者Th17頻率與肝臟炎癥程度變化密切關(guān)聯(lián)，檢測(cè)Th17頻率有助于早期明確疾病嚴(yán)重程度，預(yù)測(cè)病情轉(zhuǎn)歸。

[關(guān)鍵詞] 乙型肝炎病毒；慢性乙型肝炎；肝硬化；輔助性T細(xì)胞17；α-平滑肌肌動(dòng)蛋白

[中圖分類(lèi)號(hào)] R512.62 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2016）26-0037-03

乙型肝炎病毒（HBV）感染導(dǎo)致的慢性乙型肝炎（CHB）是我國(guó)常見(jiàn)病、高發(fā)病[1]。研究表明，輔助性T細(xì)胞17（Th17）可產(chǎn)生大量白細(xì)胞介素-17（IL-17），并參與肝臟疾病的發(fā)生、發(fā)展環(huán)節(jié)[2]。已有學(xué)者證實(shí)，Th17細(xì)胞頻率改變、Th17/調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）比例失衡與多種免疫性疾病的發(fā)病密切關(guān)聯(lián)[3]。作為以免疫病理為主要發(fā)病機(jī)制的疾病，CHB和HBV相關(guān)性肝硬化亦可能與Th17細(xì)胞頻率改變存在一定相關(guān)性。老年人群因其肝功能的自然衰減，其肝病轉(zhuǎn)歸對(duì)其生命健康有著至關(guān)重要的影響?；跒槔夏暌腋渭耙腋蜗嚓P(guān)疾病的臨床診治提供高效診斷依據(jù)的目的，本文選取我院收治的174例老年HBV感染者及同期80名老年健康體檢者，進(jìn)行了對(duì)照研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1 一般資料

選擇我院2013年10月～2015年10月收治的174例老年HBV感染者，按照其病變類(lèi)型分為CHB組（n=77）及HBV相關(guān)性肝硬化組（n=97），另選同期80健康體檢者納入正常組。CHB組男41例，女36例；年齡65～83歲，平均（69.26±12.37）歲；HBV相關(guān)肝硬化組男52例，女45例；年齡67～86歲，平均（68.83±9.26）歲；正常組男42例，女38例；年齡65～85歲，平均（66.94±10.31）歲。各組年齡、性別等比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。本臨床研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，受試者均知情同意且自愿參與。

1.2 納入排除標(biāo)準(zhǔn)

HBV感染者納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥65歲；②參照《慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）》[4]確診CHB或HBV相關(guān)性肝硬化；③6個(gè)月內(nèi)無(wú)抗病毒或免疫調(diào)節(jié)治療史；④未合并其他肝炎病毒感染。健康體檢者納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥65歲；②無(wú)肝炎病史；③HBV血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)陰性。排除標(biāo)準(zhǔn)：①年齡<65歲；②合并心、肝、腎等其他重要臟器嚴(yán)重病變；③合并HIV感染、惡性腫瘤患者。

1.3方法

（1）Th17細(xì)胞頻率：受試者空腹采靜脈血3 mL，使用Calibur流式細(xì)胞儀（美國(guó)BD公司）檢測(cè)CD4+、IFNγ-、IL17+、IL22-，即為T(mén)h17細(xì)胞頻率[5]。（2）IL-17：取離心血漿以酶免法檢測(cè)IL-17水平；取肝組織以實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)IL-17 mRNA。（3）α-SMA：取肝組織石蠟包埋標(biāo)本，以SP法依次切片—脫蠟—水化—修復(fù)—一抗、二抗溫育—顯色—復(fù)染—脫水—透明—封片，以PBS代替一抗為空白對(duì)照，胞漿呈棕黃色即可判定為陽(yáng)性細(xì)胞[6]，由Image 6.0軟件計(jì)算平均光密度（AOD）。（4）其他指標(biāo)：使用C8000生化分析儀（美國(guó)雅培公司）檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、總膽紅素（TBIL）等指標(biāo)，使用ABI7300型熒光定量PCR儀（美國(guó)ABI公司）檢測(cè)HBV血清學(xué)標(biāo)志物及HBV DNA載量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，行χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以（x±s）表示，行t檢驗(yàn)；采用Pearson法或Spearman法分析Th17細(xì)胞頻率與ALT、TBIL等其他指標(biāo)的相關(guān)性；P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組Th17細(xì)胞頻率、IL-17表達(dá)水平、α-SMA表達(dá)水平比較

HBV相關(guān)性肝硬化組Th17細(xì)胞頻率顯著高于CHB組，CHB組Th17細(xì)胞頻率顯著高于正常組（P<0.05）。以正常組肝組織IL-17 mRNA相對(duì)表達(dá)量為1.00，HBV相關(guān)性肝硬化組血漿IL-17、肝組織IL-17 mRNA表達(dá)顯著高于CHB組，CHB組上述指標(biāo)顯著高于正常組（P<0.05）。HBV相關(guān)肝硬化組肝組織α-SMA表達(dá)水平顯著高于CHB組，CHB組肝組織α-SMA表達(dá)水平顯著高于正常組（P<0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 各組受試者其他指標(biāo)比較

CHB組ALT、HBV DNA載量顯著高于HBV相關(guān)肝硬化組，而TBIL顯著低于后者，兩組患者ALT、TBIL均顯著高于正常組（P<0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 Th17細(xì)胞頻率與各項(xiàng)指標(biāo)的相關(guān)性

相關(guān)性分析示：Th17細(xì)胞頻率與IL-17、α-SMA呈正相關(guān)（P<0.05），與ALT、TBIL、HBV DNA載量無(wú)明顯相關(guān)性（P>0.05）。見(jiàn)表3。

3 討論

CHB的主要特征為肝臟慢性炎癥與繼發(fā)性纖維化，過(guò)往觀點(diǎn)認(rèn)為，CHB患者機(jī)體對(duì)HBV清除能力的不足是導(dǎo)致HBV感染慢性化的主要原因，其免疫機(jī)制與Th1和Th2免疫應(yīng)答失調(diào)有一定關(guān)聯(lián)[7]。最新研究表明，CHB患者外周血Th1細(xì)胞比例與健康人群無(wú)明顯差別，且與疾病嚴(yán)重程度亦無(wú)較大關(guān)聯(lián)，提示HBV感染的慢性化過(guò)程并非僅受單一因素影響，可能存在其他免疫機(jī)制影響肝臟損傷進(jìn)程[8]。

作為一種具有促炎作用的CD4+T淋巴細(xì)胞亞群，Th17可促進(jìn)IL-17等炎癥介質(zhì)分泌，近年來(lái)大量研究證實(shí)了Th17在自身免疫性疾病、腫瘤及感染性疾病發(fā)生與轉(zhuǎn)歸中扮演的重要角色[9]。本研究結(jié)果示：HBV相關(guān)性肝硬化組外周血Th17細(xì)胞頻率顯著高于CHB組，CHB組外周血Th17細(xì)胞頻率顯著高于正常組，說(shuō)明隨著HBV感染者肝臟損傷程度的加劇，其Th17細(xì)胞頻率逐漸上升。與此同時(shí)，受試者IL-17、IL-17 mRNA變化呈現(xiàn)相同趨勢(shì)。IL-17是Th17分泌的最重要效應(yīng)因子，其受體在體內(nèi)有廣泛表達(dá)，IL-17可誘導(dǎo)IL-6、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、趨化因子表達(dá)增加，促進(jìn)局部炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)與組織損傷[10]。相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，外周血Th17細(xì)胞頻率與IL-17表達(dá)水平呈正相關(guān)，表明Th17可通過(guò)促進(jìn)IL-17表達(dá)，在肝臟損傷的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用。

肝星狀細(xì)胞（HSC）激活是HBV相關(guān)肝硬化的主要病理特征，主要由長(zhǎng)期進(jìn)行性、彌漫性肝損害導(dǎo)致，這一過(guò)程的標(biāo)志為α-SMA高表達(dá)[11]。本次研究中隨著肝損傷的加重，肝組織α-SMA表達(dá)水平逐漸增高，印證了上述結(jié)論。同時(shí)，本研究提示外周血Th17細(xì)胞頻率與肝組織α-SMA表達(dá)亦呈正相關(guān)，與鄭超等[12]研究結(jié)論一致，表明Th17細(xì)胞亦參與了α-SMA高表達(dá)改變過(guò)程，考慮與Th17細(xì)胞可能參與HSC激活有關(guān)[13]。

有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，外周血Th17細(xì)胞頻率與血清ALT呈一定相關(guān)性[14]，但本研究結(jié)果示，外周血Th17與ALT、TBIL、HBV DNA載量均無(wú)明顯相關(guān)性，與上述研究結(jié)論存在一定出入，考慮與本研究CHB患者多處于輕度階段，Th17細(xì)胞頻率與ALT等肝功能指標(biāo)變化的關(guān)聯(lián)性不夠明顯有關(guān)。此外，Hobbs等[15]指出，肝損傷部位Th17細(xì)胞聚集增多，且其聚集程度與炎癥狀態(tài)呈正相關(guān)，其原因?yàn)镠BV抗原誘導(dǎo)及細(xì)胞壞死后大量細(xì)胞因子激活Th17細(xì)胞并進(jìn)一步促進(jìn)免疫反應(yīng)。因此，針對(duì)Th17細(xì)胞的靶向調(diào)節(jié)有望為CHB及HBV相關(guān)性肝硬化的治療提供新的策略。

綜上所述，隨著CHB及HBV相關(guān)性肝硬化患者肝損傷程度的加劇，其外周血Th17細(xì)胞頻率顯著上升，Th17細(xì)胞誘導(dǎo)的IL-17與α-SMA分泌可能是導(dǎo)致肝損傷發(fā)生、發(fā)展的主要原因，故定期檢測(cè)Th17細(xì)胞頻率有望早期判斷疾病嚴(yán)重程度，為患者病情的控制提供參考。

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（收稿日期：2016-06-30）