劉 丹 張 偉 孫洪英 董向力 王貴喜 賈 璐 李新輝 張 佳 楊 靜

包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 包頭 014010

·論著·

動脈粥樣硬化性腦梗死患者CXCL16TNF-α血清水平的相關(guān)研究

劉 丹 張 偉 孫洪英 董向力 王貴喜 賈 璐 李新輝 張 佳 楊 靜

包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 包頭 014010

目的 探討血清CXC型趨化因子配體16（CXC ligand 16，CXCL16）、腫瘤壞死因子a（tumor necrosis Factor-α，TNF-α）水平與動脈粥樣硬化性腦梗死的關(guān)系。方法 采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測120例急性動脈粥樣硬化性腦梗死患者血清CXCL16、TNF-α水平，與75例健康對照者進(jìn)行比較。結(jié)果 腦梗死組血清CXCL16、TNF-α水平均顯著高于對照組（P＜0.05）。腦梗死患者病情嚴(yán)重程度各組的血清CXCL16水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而TNF-α水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），且血清CXCL16水平與腦梗死患者病情嚴(yán)重程度呈等級正相關(guān)（r＝0.434，P＝0.000）。梗死灶大小各組和梗死部位各組的血清CXCL16、TNF-α水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。聯(lián)表卡方檢驗的相關(guān)分析得出，血清CXCL16、TNF-α水平均與發(fā)生動脈粥樣硬化性腦梗死呈正相關(guān)（C＝0.475，P＝0.000，C＝0.252；P＝0.001）。腦梗死急性期血清CXCL16水平與腦梗死各危險因素及TNF-α水平之間無顯著相關(guān)性（P＞0.05）。結(jié)論 血清CXCL16、TNF-α水平在動脈粥樣硬化性腦梗死急性期升高，與腦梗死的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。血清CXCL16水平可作為預(yù)測動脈粥樣硬化性腦梗死發(fā)病、評估病情和判斷預(yù)后的可靠生物學(xué)標(biāo)記物之一。

腦梗死；CXC型趨化因子配體16；腫瘤壞死因子α

腦梗死是由于多種原因?qū)е碌哪X血管病變，腦組織缺血、缺氧從而造成神經(jīng)功能缺損的一類疾病，其發(fā)病率、致死率、致殘率高，嚴(yán)重危害人類健康。目前，已知炎癥是動脈粥樣硬化（atherosclerosis，As）的重要病理生理學(xué)機(jī)制［1］。趨化因子是一類小分子分泌蛋白，在炎癥和免疫應(yīng)答過程中起重要作用，是聯(lián)系炎癥與As發(fā)生的樞紐［2］。近年來，在人As損傷部位的巨噬細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)一種新的趨化因子，命名為CXC配體16（CXCL16）［3-4］。研究表明，CXCL16與As的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，且其表達(dá)受TNF-α等的依賴性調(diào)節(jié)［3-5］。已熟知TNF-α是體內(nèi)重要的炎性細(xì)胞因子，而腦梗死主要病因是動脈粥樣硬化，炎癥反應(yīng)又參與了腦梗死的病理生理機(jī)制。本研究采用病例對照研究方法，探討CXCL16、TNF-α血清水平與急性腦梗死的可能關(guān)系，以期為急性腦梗死的診斷、預(yù)防和治療提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012-09—2013-06在我科連續(xù)住院的急性動脈粥樣硬化性腦梗死患者（發(fā)病1周內(nèi)），不包括腔隙性梗死和腦栓塞患者，均符合全國第4屆腦血管病學(xué)術(shù)會議通過的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)頭顱CT或MRI檢查證實。有嚴(yán)重感染、惡性腫瘤、結(jié)締組織病以及1a內(nèi)患組織損傷疾病，如心肌梗死，重大外科手術(shù)及接受免疫抑制劑治療者除外。同期選擇我院體檢中心體檢的健康人群作為對照組。入組者均為包頭市長住居民，均為漢族，彼此無親緣關(guān)系。病例組120例，男73例，女47例；平均年齡（62.43±11.72）歲。對照組75例，男45例，女30例；平均年齡（61.69±9.68）歲。2組年齡、性別差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。由表1可見，與對照組比較，腦卒中組吸煙者比例、收縮壓、舒張壓、空腹血糖、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-c）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-c）、血小板水平增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），總膽固醇水平雖增高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 研究方法

1.2.1 血液標(biāo)本收集與測定：病例組患者在入院第2天06：00空腹采集靜脈血4mL，離心后取血清，放于-30℃低溫冰箱中保存待測CXCL16和TNF-α血清濃度。檢測方法采用酶聯(lián)免疫吸附法，試劑盒是美國RD公司分裝，操作過程按試劑盒說明。對照組在體檢當(dāng)天亦空腹采血，保存和檢測方法同上。

表1 2組一般資料比較

1.2.2 病例登記：登記內(nèi)容包括：（1）患者一般資料：包括姓名、性別、年齡、職業(yè)、民族、住院號、地址、聯(lián)系電話等；（2）既往情況：既往病史及健康狀況、吸煙飲酒史；（3）住院情況：包括入院日期、入院NIHSS評分、實驗室血液學(xué)檢驗值、頸部血管超聲、頭顱影像結(jié)果、出院日期、并發(fā)癥等。

1.2.3 腦梗死病情嚴(yán)重程度分組：病例組根據(jù)美國國立衛(wèi)生院神經(jīng)功能缺損評分（NIHSS）標(biāo)準(zhǔn)在入院第1天進(jìn)行評分，分為輕型組（＜4分）、中型組（4～10分）、重型組（＞10分）。

1.2.4 病灶大小分組：測量責(zé)任病灶最大層面的病灶長徑。分為大梗死組（＞5cm）、中梗死組（3～5cm）、小梗死組（＜3cm）。多發(fā)性梗死則只計算最大責(zé)任病灶的最大層面的長徑。

1.2.5 梗死灶部位分組：根據(jù)責(zé)任病灶所在部位分為皮質(zhì)梗死、皮質(zhì)下梗死、皮質(zhì)+皮質(zhì)下梗死、腦干、小腦梗死5組。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 17.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。計數(shù)資料，如研究對象的性別構(gòu)成、吸煙、飲酒例數(shù)的比較采用卡方檢驗；計量資料，如總膽固醇、三酰甘油和血清CXCL 16、TNF-α水平等符合正態(tài)分布，用±s表示，多個獨立樣本的比較用方差分析，2組比較用t檢驗。兩因素相關(guān)性用Peason直線相關(guān)分析和列聯(lián)表卡方檢驗的相關(guān)分析，等級相關(guān)性用Spearman等級相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 病例組和對照組血清CXCL16、TNF-α水平比較 病例組血清CXCL16、TNF-α水平均顯著高于對照組（t＝5.984，P＝0.000；t＝2.715，P＝0.007）。見表2。

表2 2組血清CXCL16、TNF-α水平比較（±s）

表2 2組血清CXCL16、TNF-α水平比較（±s）

注：與對照組比較，aP＜0.05

組別 n CXCL16（ng/mL） TNF-α（pg/mL）病例組 120 0.250±0.195a 4.098±7.998a對照組750.091±0.151 1.572±1.149

2.2 腦梗死患者不同病情嚴(yán)重程度各組血清CXCL16、TNF-α水平比較 腦梗死患者120例，患者病情嚴(yán)重程度在入院第1天根據(jù)NIHSS評分標(biāo)準(zhǔn)分為輕型組70例，中型組26例，重型組24例。由輕型到中、重型組，患者血清CXCL16水平逐漸增高，且3組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。血清TNF-α水平3組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表3。

表3 腦梗死患者不同病情嚴(yán)重程度各組血清CXCL16、TNF-α水平比較（±s）

表3 腦梗死患者不同病情嚴(yán)重程度各組血清CXCL16、TNF-α水平比較（±s）

注：與重型組比較，aP＜0.05；與輕型組比較，bP＜0.05

組別 n CXCL16（ng/mL） TNF-α（pg/mL）輕型組 70 0.186±0.148a2.890±0.834中型組 26 0.269±0.212ab 8.391±2.327重型組24 0.415±0.204 2.969±0.467

2.3 腦梗死患者不同病灶大小各組血清CXCL16、TNF-α水平比較 腦梗死患者根據(jù)病灶大小分為小梗死組51例，中梗死組40例，大梗死組29例。3組間血清CXCL16、TNF-α水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表4。

表4 腦梗死患者不同病灶大小各組血清CXCL16、TNF-α水平比較（±s）

表4 腦梗死患者不同病灶大小各組血清CXCL16、TNF-α水平比較（±s）

組別 n CXCL16（ng/mL） TNF-α（pg/mL）小梗死組51 0.217±0.205 5.269±10.214中梗死組 40 0.25±10.156 3.412±7.040大梗死組29 0.305±0.219 2.984±3.477

2.4 腦梗死患者不同梗死灶部位各組血清CXCL16、TNF-α水平比較 腦梗死患者根據(jù)責(zé)任病灶所在部位分為皮質(zhì)梗死3例，皮質(zhì)下梗死64例，皮質(zhì)+皮質(zhì)下梗死31例，腦干梗死15例，小腦梗死7例。3組間血清CXCL16、TNF-α水平差異比較無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表5。

表5 腦梗死患者不同梗死部位各組血清CXCL16、TNF-α水平比較（±s）

表5 腦梗死患者不同梗死部位各組血清CXCL16、TNF-α水平比較（±s）

組別 n CXCL16（ng/mL）TNF-α（pg/mL）皮質(zhì)梗死組3 0.230±0.134 2.025±0.915皮質(zhì)下梗死組 64 0.272±0.196 3.723±7.147皮質(zhì)+皮質(zhì)下梗死組31 0.247±0.222 3.363±5.447腦干梗死組 15 0.206±0.166 8.721±14.768小腦梗死組7 0.157±0.126 1.761±2.939

表6 病例組血清CXCL16水平與腦梗死各危險因素及TNF-α的相關(guān)性

2.5 相關(guān)分析 病例組和對照組的血清CXCL16、TNF-α水平分段，進(jìn)行列聯(lián)表卡方檢驗的相關(guān)分析得出，血清CXCL16水平與發(fā)生動脈粥樣硬化性腦梗死呈正相關(guān)（C＝0.475，P＝0.000），血清TNF-α水平與發(fā)生動脈粥樣硬化性腦梗死呈正相關(guān)（C＝0.252，P＝0.001）。血清CXCL16水平與動脈粥樣硬化性腦梗死患者病情嚴(yán)重程度各組進(jìn)行Spareman相關(guān)分析顯示，二者呈等級正相關(guān)（r＝0.434，P＝0.000）。

2.6 血清CXCL16與腦梗死各危險因素及TNF-α水平的相關(guān)性 動脈粥樣硬化性腦梗死急性期血清CXCL16水平與腦梗死各危險因素及TNF-α水平之間無顯著相關(guān)性（P＞0.05）。見表6。

3 討論

2000年Matlourbian等［6］和Wilbanks等［7］發(fā)現(xiàn)了一種新的趨化因子——CXCL16，是一類跨膜蛋白分子，屬于CXC趨化因子亞家族，同時具有CC家族和CX3C家族趨化因子的特征。CXCL16蛋白由254個氨基酸組成，分子量約為30 000。CXCL16存在兩種形式，即可溶分泌型和膜結(jié)合型，不僅具有趨化因子的功能，而且還有清道夫受體的作用。CXCR6是其唯一受體。

近年研究發(fā)現(xiàn)，CXCL16與動脈粥樣硬化密切相關(guān)。主要通過以下方面的病理生理作用參與動脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展。（1）可溶分泌型CXCL16主要通過與T淋巴細(xì)胞表面的CXCR6結(jié)合，對T淋巴細(xì)胞起趨化作用，促使T淋巴細(xì)胞向動脈粥樣硬化部位遷移［8］。As病變部位的T淋巴細(xì)胞可產(chǎn)生和分泌多種細(xì)胞因子，如白細(xì)胞介素、趨化因子、生長因子、腫瘤壞死因子以及多種酶，進(jìn)而激活內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)平滑肌細(xì)胞增殖和斑塊形成、進(jìn)展［9-10］。T淋巴細(xì)胞還可促進(jìn)基質(zhì)金屬蛋白酶的激活［11］，而后者可促使纖維帽降解和斑塊破裂，從而加劇As進(jìn)展和斑塊不穩(wěn)定性。（2）介導(dǎo)巨噬細(xì)胞對oxLDL的攝取，參與As細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)聚集，促使巨噬細(xì)胞形成泡沫細(xì)胞。（3）還能作為一種血管源性因子誘導(dǎo)血管形成［12］。在As斑塊內(nèi)，大量新生血管形成浸潤至病灶，促進(jìn)斑塊發(fā)生、發(fā)展，甚至誘發(fā)斑塊出血和斑塊破裂［13-14］，成為在動脈粥樣硬化性疾病中的核心事件。（4）強(qiáng)烈趨化激活CD8+T細(xì)胞，CD8+T細(xì)胞的激活會引發(fā)As斑塊部位細(xì)胞的凋亡。

臨床研究表明，CXCL16參與了動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。呂永清等［15］采用實時定量RT-PCR方法檢測頸動脈斑塊組和健康組外周血單個核細(xì)胞CXCL16及其受體CXCR6基因表達(dá)情況。結(jié)果顯示頸動脈斑塊組比健康組CXCL16及其受體CXCR6基因表達(dá)水平顯著增高。頸動脈粥樣硬化是全身As的局部體現(xiàn)，說明CXCL16是動脈硬化發(fā)生的危險因素之一。

本文結(jié)果顯示，腦梗死急性期血清CXCL16水平顯著高于對照組（P＜0.05），血清CXCL16與發(fā)生動脈粥樣硬化性腦梗死呈正相關(guān)（C＝0.475，P＝0.000），且血清CXCL16水平與腦梗死患者病情嚴(yán)重程度呈等級正相關(guān)（r＝0.434，P＝0.000），CXCL16水平越高，腦梗死患者病情越重，均提示血清CXCL16水平升高與腦梗死的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，但血清CXCL16水平升高與腦梗死病灶大小和部位無關(guān)。由于As是腦梗死的主要病因，我們推測，血清CXCL16可能通過參與As發(fā)生和發(fā)展過程而促進(jìn)腦梗死的發(fā)生、發(fā)展。腦梗死組血清CXCL16表達(dá)水平與腦梗死各傳統(tǒng)危險因素及TNF-α水平均無顯著相關(guān)性，提示血清CXCL16表達(dá)水平不受各危險因素影響而獨立起作用。

腫瘤壞死因子（TNF-α）是一種具有廣泛生物學(xué)功能的多肽類細(xì)胞因子，不僅介導(dǎo)抗腫瘤及調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能，是一種重要的免疫細(xì)胞因子，又是一種重要的炎性細(xì)胞因子，在感染性疾病中具有重要的病理生理作用［16］。

腦梗死的病理生理機(jī)制很復(fù)雜，目前仍不完全清楚，其中涉及血腦屏障的破壞、氧自由基的大量釋放、炎癥免疫反應(yīng)、興奮性氨基酸的毒性作用、細(xì)胞內(nèi)鈣超載、細(xì)胞凋亡等方面。炎癥反應(yīng)是重要的損傷機(jī)制之一［17］。而As發(fā)生發(fā)展的病理學(xué)過程中，炎癥反應(yīng)也發(fā)揮至關(guān)重要的作用。

我們的研究結(jié)果顯示，腦梗死急性期血清TNF-α水平顯著高于對照組（P＜0.05），與辛雅萍等［18］研究結(jié)果一致，進(jìn)一步分析得出，血清TNF-α水平與發(fā)生動脈粥樣硬化性腦梗死呈正相關(guān)（C＝0.252，P＝0.001），但與腦梗死患者病情嚴(yán)重程度、梗死灶大小和梗死部位無顯著相關(guān)。表明血清TNF-α水平升高與腦梗死的發(fā)生密切相關(guān)，參與了腦梗死的病理生理過程。

綜上所述，血清CXCL16、TNF-α水平在動脈粥樣硬化性腦梗死急性期升高，與腦梗死的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。血漿CXCL16、TNF-α水平與發(fā)生動脈粥樣硬化性腦梗死有很好的相關(guān)性，可作為預(yù)測動脈粥樣硬化性腦梗死發(fā)病、評估病情和判斷預(yù)后的可靠生物學(xué)標(biāo)記物，為疾病的調(diào)查研究、診斷和治療提供幫助。但我們的研究僅對血清可溶性CXCL16、TNF-α進(jìn)行研究，且病例數(shù)量有限，臨床有待進(jìn)一步深入研究CXCL16、TNF-α與腦梗死的關(guān)系以及二者在人體內(nèi)更為詳盡的作用機(jī)制。

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（收稿2014-05-12）

Study on serum CXCL16 and TNF-αlevels in patients with the atherosclerosis cerebral infarction

Liu Dan，Zhang Wei，Sun Hongying，Dong Xiangli，Wang Guixi，Jia Lu，Li Xinhui，Zhang Jia，Yang Jiang
Department of Neurology，the First Affiliated Hospital of Baotou Medical College，Baotou014010，China

Objective To investigate the changes of serum CXCL16and TNF-αlevels in patients with acute atherosclerosis cerebral infarction.Methods The serum CXCL16and TNF-αlevels were measured by enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）in 120patients with acute atherosclerosis cerebral infarction compared with 75healthy controls.Results The serum CXCL16and TNF-αlevels in patient group were significantly higher than those in control group（P＜0.05）.The serum CXCL16level had significant difference in each of patient group which was divided into minor group，moderate group and severe group according to the severity of disease（P＜0.05）and was hierarchically positively correlated with severity of cerebral infarction（r＝0.434，P＝0.000），while TNF-αlevel had no statistical difference（P＞0.05）.The serum CXCL16，TNF-αlevels had no significant difference in each group of patient group classified by volume and area of infarction（P＞0.05）.It was shown that both serum CXCL16and TNF-αlevel were positively related to atherosclerosis cerebral infarction（C＝0.475，P＝0.000，C ＝0.252；P＝0.001）by related analysis of contingency table and chi-square test.Conclusion The serum CXCL16，TNF-αlevels increased in acute atherosclerosis cerebral infarction，which a closely related with the occurrence and development of cerebral infarction.The serum CXCL16level is regarded as one of the reliable biological marker in predicting incidence，estimating condition and evaluating prognosis of atherosclerosis cerebral infarction.

Cerebral infarction；CXC ligand 16；Tumor necrosis factor-α

R743.33

A

1673-5110（2015）05-0001-04

內(nèi)蒙古自治區(qū)自然科學(xué)基金項目（編號：2013MS1174）；內(nèi)蒙古自治區(qū)高等學(xué)?？茖W(xué)技術(shù)研究一般項目（編號：NJZY13245）；包頭市社會發(fā)展科技支撐項目（編號：2012S2006-04-08）