聶鯤

(北京市海淀區(qū)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所,北京 100094)

0 引言

雙酚A是一種環(huán)境內(nèi)分泌干擾物，在工業(yè)上主要合成工業(yè)產(chǎn)品聚碳酸酯和環(huán)氧樹脂。有研究證明：雙酚A具有此激素效應(yīng)，能干擾野生生物和人類的內(nèi)分泌系統(tǒng)，已引起世界各國的關(guān)注，并成為一類新的研究和監(jiān)測的主要物質(zhì)。［1-2］由于牛奶中雙酚A的含量很低，目前，雙酚A的測定主要采取高效液相色譜法［3］、液相色譜法-質(zhì)譜法等測定雙酚A［4］，但液相色譜等分析要消耗大量有毒有害的流動(dòng)相溶液，易對(duì)環(huán)境造成污染，并且運(yùn)行成本較高。本文通過對(duì)牛奶中的雙酚A的提取，衍生化的溫度和衍生物試劑用量等條件進(jìn)行優(yōu)化，建立了GC-ECD測定雙酚A的方法。雙酚A衍生物色譜峰峰形良好，檢出限較低，適合采用氣相色譜定性、定量分析。本法精密度、回收率高，成本較低，且對(duì)環(huán)境造成的污染較少，可用于日常的樣品中雙酚A的測定。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 儀器與試劑

美國Agilent7890型氣相色譜儀，配電子捕獲檢測器（ECD），HP-5毛細(xì)管色譜柱(30m×0.32mm×0.25μm)色譜柱；窩旋混合器。

無水乙醚為色譜純，亞鐵氰化鉀、乙酸鋅、無水硫酸鈉為分析純,在650℃下灼燒4 h后置于干燥器中備用，載氣為高純氮?dú)猓兌葹?9.999%）；雙酚A標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/mL,純度＞99%)；七氟丁酰咪唑(純度98%)。

亞鐵氰化鉀溶液（109g/L）:稱取109 g亞鐵氰化鉀，用水定容至1 000 mL容量瓶中。

乙酸鋅溶液（219 g/L）:稱取219 g乙酸鋅，用水定容至1 000 mL容量瓶中。

1.2 方法

（1）樣品的提取。取牛奶10 mL于25 mL刻度試管中,加入2.5 mL亞鐵氰化鉀溶液和2.5 mL乙酸鋅溶液后用水定容至刻度，充分振搖后靜置10 min。濾紙過濾后吸取濾液10 mL于另一支25 mL刻度試管中，加入無水乙醚20 mL，震蕩1 min后靜置分層，取上清液過無水硫酸鈉，再加入15×2 mL無水乙醚震蕩靜置分層，合并有機(jī)相于雞心瓶內(nèi)40℃旋蒸近干，氮?dú)獯蹈珊笥? mL異辛烷定容，供衍生化用。

（2）衍生化反應(yīng)。往上述溶液內(nèi)加入40 μL七氟丁酰咪唑,于70℃烘箱30 min后拿放涼后加入2mL飽和食鹽水，渦旋混合1 min，靜置，取上層有機(jī)相供GC-ECD分析用。

（3）標(biāo)準(zhǔn)溶液的衍生化。分別吸取不同體積的標(biāo)準(zhǔn)溶液，氮?dú)獯蹈珊笥卯愋镣槎ㄈ葜? mL，此后操作同樣品處理。

（4）色譜條件。雙酚A衍生物HP-5毛細(xì)管色譜柱(30 m×0.32 mm×0.25 μm)；柱溫升溫程序:從90℃開始保持1min，以20℃/min的速率升至250℃(保持7 min)后。ECD檢測器溫度300℃,進(jìn)樣口溫度250℃。不分流進(jìn)樣,進(jìn)樣量1 μL，流速1 mL/min。尾吹氣流量60 mL/min。采用峰面積外標(biāo)法定量。

（5）色譜分析。采用自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣，將衍生化后的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品注入氣相色譜中，在相同的色譜條件下，以保留時(shí)間定性，以樣品峰面積和標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行比較定量。標(biāo)準(zhǔn)品色譜如圖1所示。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)品色譜

2 結(jié)果與討論

2.1 提取條件的選擇

根據(jù)雙酚A的極性和相關(guān)文獻(xiàn)的報(bào)道,較多的提取溶劑有乙酸乙酯、甲醇、無水乙醚等或者它們的混合溶劑。選擇無水乙醚作為提取溶劑,因無水乙醚具有提取率高，濃縮簡單的特點(diǎn),可以有效地提取雙酚A且干擾物少。

2.2 衍生化時(shí)間的選擇

由于衍生化試劑是大大過量的，因此衍生化反應(yīng)達(dá)到平衡的時(shí)間也較短。將5，10，20，30，45 min等不同衍生化時(shí)間所得衍生物的峰面積進(jìn)行比較后發(fā)現(xiàn)，衍生30 min后峰面積基本保持不再變化，即衍生化反應(yīng)基本達(dá)到了平衡。

2.3 衍生化試劑用量的選擇

取40 μL質(zhì)量濃度為0.5 μg/mL雙酚A標(biāo)準(zhǔn)工作液5份，分別用氮?dú)獯蹈?，用異辛烷定容?mL，向其加入10，20，30，40 μL和50 μL七氟丁酰咪唑，70℃衍生30min后進(jìn)行GC-ECD測定。結(jié)果表明：當(dāng)七氟丁酰咪唑用量為40 μL時(shí)，衍生物相應(yīng)值較高，相應(yīng)值與50 μL時(shí)基本無差異。

2.4 線性與檢測限

按1.2(2)和1.2(3)中的實(shí)驗(yàn)方法對(duì)雙酚A標(biāo)準(zhǔn)工作液衍生后進(jìn)行方法的線性及檢出限測定，質(zhì)量濃度分別為0.1,0.25,0.5,1,5,10 ng/mL的雙酚A標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行衍生化并進(jìn)行GC-ECD分析，按選定的色譜條件進(jìn)樣,以衍生物的峰面積和雙酚A的濃度做標(biāo)準(zhǔn)曲線,雙酚A為0.1～10 ng/mL質(zhì)量濃度和響應(yīng)值線性關(guān)系良好，具體數(shù)據(jù)如表1所示。

表1 雙酚A衍生物的保留時(shí)間、線性和檢出限

2.5 回收率和精密度

取10 mL樣品若干份(已測得此樣的雙酚A殘留本底值為空白),分別加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)品溶液,3個(gè)添加水平,分別為0.05，0.2，1 μg/L,每個(gè)添加水平6個(gè)平行,充分混勻后按“1.2”項(xiàng)操作進(jìn)行測定,求平均回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)。具體數(shù)據(jù)如表2所示。

表2 雙酚A衍生物的平均回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)

3 結(jié)論

本方法操作簡便、快捷、試劑用量很少，靈敏度高，準(zhǔn)確度、精密度均滿足殘留量分析的要求，適合在短時(shí)間大批量樣品的分析。

[1]謝桂勉.食品及其包裝材料中雙酚A的檢測研究進(jìn)展[J］.食品工業(yè)科技,2012,14:388-391.

[2]肖晶,邵兵,吳永寧，等.用高壓液相色譜法檢測灌裝食品中類雌激素雙酚A和烷基酚［J］.中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2007,41(6):449-452.

[3]胡霞林,劉景富,彭錦峰.固相微萃取-高效液相色譜聯(lián)用測定環(huán)境牛奶樣中雙酚A的自由溶解態(tài)濃度［J］.分析實(shí)驗(yàn)室,2006,25(7):14-16.

[4]楊紅梅,王浩.液相色譜-串聯(lián)三重四級(jí)桿質(zhì)譜詞典牛奶中雙酚A殘留［J］.食品研究與開發(fā),2009,30(12):137-139.