李秀秀，金中義，金福厚

(1.黑龍江省齊齊哈爾市中醫(yī)醫(yī)院，黑龍江 齊齊哈爾 161000；2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040)

桃紅四物湯促進(jìn)骨折愈合的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展

李秀秀1，金中義2△，金福厚1

(1.黑龍江省齊齊哈爾市中醫(yī)醫(yī)院，黑龍江 齊齊哈爾 161000；2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040)

桃紅四物湯在骨折臨床治療中應(yīng)用廣泛，近年來對(duì)桃紅四物湯促進(jìn)骨折愈合的實(shí)驗(yàn)研究取得豐碩成果，為桃紅四物湯對(duì)骨折的治療提供了理論依據(jù)。本文通過查閱近年發(fā)表的有關(guān)桃紅四物湯促進(jìn)骨折愈合實(shí)驗(yàn)研究方面的文獻(xiàn)，對(duì)該領(lǐng)域的研究予以綜述。

桃紅四物湯；骨折愈合；研究進(jìn)展

骨折即骨或骨小梁的連續(xù)性、完整性遭到破壞，是臨床比較常見的的骨科疾病。骨折的愈合是一個(gè)“瘀去，新生，骨合”的復(fù)雜而連續(xù)的過程。從組織學(xué)和細(xì)胞學(xué)的變化，通常將其分為三個(gè)階段，分別為血腫炎癥機(jī)化期、原始骨痂形成期和骨板形成塑性期。桃紅四物湯是中醫(yī)活血化瘀法治療骨折的代表方劑，具有補(bǔ)血活血，止痛消腫，化瘀生新之功效，在骨折臨床治療中應(yīng)用廣泛。近年來對(duì)桃紅四物湯促進(jìn)骨折愈合的實(shí)驗(yàn)研究取得豐碩成果，為桃紅四物湯對(duì)骨折的治療提供了理論依據(jù)。本文參考2000年以來國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)，將桃紅四物湯促進(jìn)骨折愈合的相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究成果概述如下。

1 對(duì)骨折局部血液供應(yīng)的影響

1.1 對(duì)血液流變和血管新生的影響 清代名醫(yī)陳士鐸認(rèn)為“血不活則骨不能接”、“瘀不去則骨不能接”，提出了活血化瘀在骨傷科治療中的重要性。骨的血供對(duì)于維持骨的生長(zhǎng)、重建至為重要，骨折后血供的好壞更直接影響骨的修復(fù)過程，關(guān)系到其愈合，骨形成和骨改建均離不開血管生成[1]。蔡昫等[2]研究桃紅四物湯對(duì)大白兔股骨干骨折術(shù)后血液流變學(xué)的影響，發(fā)現(xiàn)桃紅四物湯能顯著降低家兔全血粘度、血漿粘度以及紅細(xì)胞壓積，改善血液流變學(xué)特性，從而改善微循環(huán)，為骨折愈合提供良好的內(nèi)環(huán)境。韓嵐等[3]進(jìn)行桃紅四物湯活血化瘀作用的研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，桃紅四物湯能夠顯著延長(zhǎng)模型大鼠體內(nèi)血栓形成時(shí)間和凝血時(shí)間，能顯著降低瘀血大鼠的全血比粘度，從而有效的改善血液的濃、粘、凝、聚，可以起到活血化瘀而促進(jìn)愈合的作用。季兆潔等[4]研究桃紅四物湯對(duì)閉合性骨折早期的治療作用，結(jié)果桃紅四物湯高、中、低劑量組可明顯降低骨折大鼠血液黏度；桃紅四物湯高、中、低劑量組與模型組比較，均有毛細(xì)血管以及由毛細(xì)血管轉(zhuǎn)化的靜脈新生，表明桃紅四物湯有明顯的促進(jìn)骨折區(qū)血管新生，促進(jìn)局部微循環(huán)重建的作用。

1.2 抗血小板活化，對(duì)TXB2，6-Keto-PGF1的含量以及TXB2/6-Keto-PGF1的影響 TXA2和PGI2能夠?qū)ρ“寰奂M(jìn)行調(diào)節(jié)，其中TXA2能夠促進(jìn)血小板聚集，加速血栓形成，而PGI2是一種血小板抑制劑。TXB2為TXA2的代謝產(chǎn)物，6-Keto-PGF1為PGI2的代謝產(chǎn)物。因此，通過檢測(cè)TXB2和6-Keto-PGF1的水平可以間接反映出TXA2和PGI2的水平。季兆潔等[4]通過實(shí)驗(yàn)，研究對(duì)桃紅四物湯對(duì)大鼠脛骨閉合性骨折模型TXB2，6-Keto-PGF1的含量以及TXB2/6-Keto-PGF1的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：桃紅四物湯各劑量組血漿TXB2水平均有顯著性降低，而血漿6-Keto-PGF1水平則輕度的下降。表明桃紅四物湯通過降低TXA2而發(fā)揮抗血小板聚集的作用，改善血液流動(dòng)性，促進(jìn)骨折愈合。韓嵐等[5]通過測(cè)定桃紅四物湯對(duì)血瘀證模型大鼠血漿TXB2和6-Keto-PGF1含量的影響，發(fā)現(xiàn)桃紅四物湯能顯著降低大鼠血漿中TXB2水平，增強(qiáng)血漿6-Keto-PGF1水平，具有良好的抗血小板活化作用。

2 對(duì)成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞的影響

作為新骨生成的主要功能細(xì)胞之一，成骨細(xì)胞參與骨基質(zhì)的合成、分泌和鈣化，成骨細(xì)胞的數(shù)量、活性直接影響骨折局部新骨的形成。而破骨細(xì)胞在形成的編織骨進(jìn)行重吸收和改建，對(duì)骨折愈合十分重要。李樹強(qiáng)等的研究顯示[6]，桃紅四物湯含藥血清能促進(jìn)成骨細(xì)胞特異性標(biāo)志物ALP和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞I型膠原mRNA的表達(dá)，即桃紅四物湯有促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖的作用。胡楠[7]研究桃紅四物湯對(duì)骨痂中成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞形態(tài)影響，結(jié)果表明桃紅四物湯能促進(jìn)骨痂中成骨細(xì)胞的分裂和增殖，促進(jìn)骨痂中破骨細(xì)胞的增殖，促進(jìn)死骨的吸收，加快骨折的愈合。

3 細(xì)胞分子生物學(xué)研究

3.1 對(duì)VEGF的影響 VEGF是具有誘導(dǎo)血管生成能力的一種血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子，它能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖，促進(jìn)血管生成，促進(jìn)骨折端微循環(huán)的重建[8]。季兆潔等[4]研究桃紅四物湯對(duì)閉合性骨折早期的治療作用，實(shí)驗(yàn)采取檢測(cè)大鼠血清中的VEGF含量的方法來間接反映桃紅四物湯是否具有刺激骨折早期骨痂血管增生的作用，結(jié)果顯示桃紅四物湯各劑量組均可以顯著提高大鼠血清中VEGF的含量，從而達(dá)到促進(jìn)骨折愈合的目的。雄輝等[9]研究桃紅四物湯干預(yù)骨痂微血管新生及VEGF表達(dá)，發(fā)現(xiàn)桃紅四物湯通過提高骨折斷端骨痂組織內(nèi)VEGF表達(dá)，刺激骨折早期骨痂新生微血管的增生形成，加速骨折后期骨痂內(nèi)微血管改建完善，從而促進(jìn)骨折愈合過程。

3.2 對(duì)骨痂“成骨-破骨細(xì)胞共育系”中蛋白的影響 曾展鵬等[10]進(jìn)行桃紅四物湯對(duì)成骨與破骨細(xì)胞耦聯(lián)中OPG-RANKL-RANK影響的實(shí)驗(yàn)研究，主要目的是測(cè)定桃紅四物湯對(duì)骨痂成骨與破骨細(xì)胞耦聯(lián)中OPG-RANKL-RANK系統(tǒng)的作用，成骨細(xì)胞中的OPg，RANKL蛋白和基因表達(dá)的內(nèi)容，同時(shí)分析破骨細(xì)胞中RANK的蛋白和基因的表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)桃紅四物湯能促進(jìn)有小梁的生成增加，類成骨細(xì)胞及成骨細(xì)胞上維生素D受體表達(dá)；骨痂形成中期中使用藥可以明顯增加OPg，gp130的表達(dá)，增加骨質(zhì)的質(zhì)量。得出桃紅四物湯可以動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)OPG-RANKL-RANK傳導(dǎo)通路，對(duì)促進(jìn)骨組織重建與恢復(fù)有著積極的作用。桃紅四物湯補(bǔ)血活血化瘀兼顧，可使?fàn)I血調(diào)和，可補(bǔ)血而不生滯，活血而不妄行，與骨代謝中成骨-破骨耦聯(lián)動(dòng)態(tài)平衡有異曲同工之妙[10]。研究表明[11]RANKL是唯一能直接刺激破骨細(xì)胞發(fā)育并使之激活的細(xì)胞因子，能促進(jìn)破骨細(xì)胞的形成、分化、成熟，抑制破骨細(xì)胞凋亡，延長(zhǎng)存活時(shí)間，桃紅四物湯能促進(jìn)OPG表達(dá)，抑制RANKL表達(dá)，對(duì)骨折治療起促進(jìn)作用。

3.3 對(duì)eNOS和NO的影響 血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖是血管新生的重要步驟，內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)和一氧化氮(NO)是重要促血管新生因子[12]。池曉霞[13]通過實(shí)驗(yàn)證明桃紅四物湯可以通過提高eNOS活性及促進(jìn)NO分泌，誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞增殖，從而促進(jìn)新的血管系統(tǒng)的建立，這將有利于骨折的快速愈合。

3.4 對(duì)HIF-1的影響 HIF-1可以上調(diào)細(xì)胞存活、生長(zhǎng)、分化以及凋亡等基因的表達(dá)，在缺氧狀態(tài)下對(duì)氧的平衡起中心作用。尤其是在缺氧狀態(tài)下，HIF-1是血管生成的核心調(diào)控因子，通過影響相關(guān)生長(zhǎng)因子的表達(dá)，直接參與血管生成的全過程[14]。陳德喜等[15]研究加味桃紅四物湯對(duì)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞早期促缺氧誘導(dǎo)因子(HIF-1)的影響，發(fā)現(xiàn)加味桃紅四物湯能夠誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞在培養(yǎng)早期分泌HIF-1，說明在骨折早期加味桃紅四物湯通過改善局部血氧，達(dá)到促進(jìn)骨折愈合作用。

3.5 對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和骨鈣素影響 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)參與骨的修復(fù)過程，是目前組織工程首選的修復(fù)骨傷疾病的種子細(xì)胞。骨鈣素是成骨細(xì)胞分化主要指標(biāo)之一，對(duì)BMSCS向成骨細(xì)胞分化有促進(jìn)作用[16]。徐世紅等[17]研究桃紅四物湯含藥血清對(duì)體外培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及成骨分化的影響，實(shí)驗(yàn)采用5倍等效劑量桃紅四物湯灌服大鼠，制備含藥血清，以灌服等體積氯化鈉溶液制得對(duì)照血清，采用貼壁篩選法培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，同時(shí)進(jìn)行細(xì)胞表型鑒定，并以含藥血清干預(yù)第3代BMSCs，結(jié)果顯示在桃紅四物湯含藥血清能夠促進(jìn)BMSCs增殖，說明該方具有促進(jìn)骨化作用。

3.6 對(duì)TGF-(轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子)的影響 TGF-能調(diào)控間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和定向分化為成骨細(xì)胞，是修復(fù)骨缺損的首選因子[18]。易浪等[19]觀察桃紅四物湯含藥血清對(duì)體外模擬骨壞死環(huán)境下的TGF-的影響，發(fā)現(xiàn)低劑量和高劑量含藥血清均能提高TGF-的轉(zhuǎn)錄水平，促進(jìn)壞死骨的修復(fù)。

4 討論

傳統(tǒng)中醫(yī)理論重視活血化瘀法在骨折愈合治療中的運(yùn)用，《瘍醫(yī)大全》曰：“有跌傷骨折，宜活血化瘀為先，血不活則瘀不去，瘀不去則骨不能接也”。桃紅四物湯由桃仁、紅花、當(dāng)歸、白芍、熟地黃、川芎六味藥組成，具有補(bǔ)血而不滯血、和血而不傷血的特點(diǎn)，為治療血證的常用方。本方中熟地、白芍是血中之血藥，當(dāng)歸、川芎是血中之氣藥，陰陽(yáng)動(dòng)靜相配，故既能補(bǔ)血，又能和血，加入破血之品桃仁、紅花為主藥，突出了活血化瘀的作用。由于桃仁、紅花的活血作用比較緩和，再配合四物湯養(yǎng)血扶正，故本方是一首比較平和有效的活血祛瘀方劑。全方配伍得當(dāng)，使瘀血祛、新血生、氣機(jī)暢，化瘀生新是該方的顯著特點(diǎn)[20]。

綜上所述，桃紅四物湯通過改善血流變、促進(jìn)骨折區(qū)血管新生，改善骨折局部的血液循環(huán)；促進(jìn)成骨細(xì)胞與破骨細(xì)胞的修復(fù)功能；在細(xì)胞分子生物學(xué)方面，通過增加生長(zhǎng)因子VEGF、增加促血管新生因子eNOS和NO、促進(jìn)促缺氧誘導(dǎo)因子(HIF-1)分泌等作用，促進(jìn)骨折的愈合?？梢娞壹t四物湯是通過多路徑、多方面共同發(fā)揮作用，促進(jìn)骨折愈合的。目前的研究成果仍不能很詳盡地解釋桃紅四物湯治療促進(jìn)骨折愈合的所有途徑及各自的交互反應(yīng)機(jī)理，尤其是從微觀角度進(jìn)行分子水平的研究，桃紅四物湯對(duì)一些促進(jìn)骨折愈合的重要因子的影響還沒有闡明，這些還需要進(jìn)一步研究。

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李秀秀(1974-)，女，主管中藥師，研究方向：方劑的臨床應(yīng)用研究。

△通信作者：金中義，E-mqil：248857925@qq.com

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