陳 晨， 徐艷明， 王 雪， 耿 放， 劉國(guó)良， 雷雙媛， 張 寧

（1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江哈爾濱150040；2.哈爾濱師范大學(xué)，黑龍江哈爾濱150025）

黃芩素對(duì)A375細(xì)胞黑素合成的抑制作用及相關(guān)細(xì)胞信號(hào)通路調(diào)控的初步研究

陳 晨， 徐艷明， 王 雪， 耿 放*， 劉國(guó)良， 雷雙媛， 張 寧*

（1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江哈爾濱150040；2.哈爾濱師范大學(xué)，黑龍江哈爾濱150025）

目的 研究黃芩素對(duì)體外培養(yǎng)的A375細(xì)胞黑素合成的影響及絲裂原活化蛋白激酶 （MAPK）信號(hào)通路與該作用的相關(guān)性。方法 用黃芩素處理A375細(xì)胞，采用四甲基噻唑藍(lán) （MTT）法測(cè)定A375細(xì)胞的活性，NaOH法測(cè)定黑素量，多巴氧化法測(cè)定酪氨酸酶（TYR）活性，RT-PCR法測(cè)定TYR、酪氨酸酶相關(guān)蛋白-1（TRP-1）和TRP-2以及MAPK信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白激酶ERK1、ERK2、JNK2的mRNA表達(dá)。結(jié)果 0.1～0.001μmol/L的黃芩素可明顯抑制A375細(xì)胞黑素合成及TYR活性，0.1μmol/L黃芩素明顯下調(diào)A375細(xì)胞TYR、TRP-1、TRP-2 mRNA表達(dá)，以及ERK1、ERK2、JNK2 mRNA表達(dá)。結(jié)論 黃芩素具有抑制A375細(xì)胞的黑素合成的作用，其機(jī)制可能與抑制TYR活性和/或下調(diào)TYR、TRP-1及TRP-2 mRNA表達(dá)，以及抑制ERK1、ERK2、JNK2的表達(dá)有關(guān)。

黃芩素；A375細(xì)胞；黑素；MAPK信號(hào)通路

黑素代謝障礙是黃褐斑產(chǎn)生的主要病機(jī)。黑素在黑素細(xì)胞內(nèi)由酪氨酸經(jīng)酪氨酸酶氧化而合成，酪氨酸酶 （TYR）過(guò)表達(dá)導(dǎo)致黑素合成亢進(jìn)。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，MAPK信號(hào)通路參與了黑素細(xì)胞中黑素生成的調(diào)控，在調(diào)節(jié)黑素細(xì)胞生理活動(dòng)及功能方面發(fā)揮重要作用［1］。Jang Ji Yeon［2］等體外培養(yǎng)鼠B16 F10黑素瘤細(xì)胞發(fā)現(xiàn)，甘松提取物能夠誘導(dǎo)MEK/ERK磷酸化和PI3K/Akt信號(hào)激活，抑制環(huán)磷酸腺苷（cAMP）表達(dá)水平來(lái)下調(diào)小眼畸形轉(zhuǎn)錄因子（MITF）和TRP蛋白表達(dá)，從而抑制TYR活性，抑制黑素的合成。杜仲是青娥方中君藥，能夠使未成熟小鼠子宮質(zhì)量增加，陰道細(xì)胞角化提前進(jìn)入動(dòng)情周期，促使未成熟小鼠靶器官發(fā)育，發(fā)揮雌激素樣作用［3］。黃芩素是杜仲的有效成分，屬雌激素類化合物。李曉紅等［4］通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)黃芩素能夠誘導(dǎo)雌激素反應(yīng)元件 （ERE）的激活來(lái)下調(diào)MITF蛋白表達(dá)，對(duì)TYR活性有抑制作用，從而降低黑素合成起到脫色素作用。雌激素受體 （ER）的生理作用與MAPK信號(hào)通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)密切相關(guān)，MAPK家族主要包括三個(gè)亞家族—細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（ERK1/2）、c-JunN末端蛋白激酶（JNK1/ 2）和p38蛋白激酶 （p38 MAPK）［5］。因此，本研究探討黃芩素對(duì)黑素細(xì)胞黑素分泌的調(diào)節(jié)作用以及與MAPK信號(hào)通路的相關(guān)性，初步確定黃芩素對(duì)黃褐斑的潛在治療作用及作用機(jī)制。

1 材料與儀器

1.1 材料 人黑素瘤細(xì)胞A375（中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞中心提供）；DMEM培養(yǎng)液（美國(guó)Gibco生物公司）；二甲基亞砜DMSO（美國(guó)Sigma公司）；四甲基噻唑藍(lán)MTT（美國(guó)Sigma公司）；Trizol細(xì)胞裂解液 （美國(guó) Gibco生物公司）；焦碳酸二乙酯（DEPC） （美國(guó)Gibco生物公司）；PCR試劑盒（上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司）。

1.2 儀器 TGL-16G-C型高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠），PCR擴(kuò)增儀 （德國(guó)Biometra公司），酶標(biāo)儀 （上海熱電儀器有限公司），Olympus倒置顯微鏡（日本Olympus株式會(huì)社），Heλiosγ可見(jiàn)紫外分光光度計(jì) （美國(guó)熱電公司），DYYOC型電泳儀 （北京市六一儀器廠），Cham1Ge15000凝膠成像系統(tǒng) （北京賽智創(chuàng)業(yè)科技有限公司）。

1.3 藥品 黃芩素購(gòu)于南京澤朗科技有限公司，純度98%，批號(hào)為491678120525；雌二醇購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院，純度98%，批號(hào)為150-28-21。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 藥液配制 精密稱取雌二醇5.5 mg，用4 mL無(wú)水乙醇溶解，配制成20μmol/L的原液，實(shí)驗(yàn)前再用DMEM完全培養(yǎng)液稀釋至0.001μmol/L，待用。精密稱取黃芩素5.4 mg，用DMEM完全培養(yǎng)液溶解，配制成200μmol/L的原液，實(shí)驗(yàn)前再梯度稀釋成0.001～100μmol/L的6種藥液，待用。

2.2 細(xì)胞分組與處理 選取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A375細(xì)胞常規(guī)消化，計(jì)數(shù)，以3×103個(gè)/孔接種細(xì)胞于96孔培養(yǎng)板上，每孔200μL，24 h后，分別設(shè)空白對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組（0.001μmol/L的雌二醇）、黃芩素組 （設(shè)定濃度的黃芩素），各組設(shè)6個(gè)復(fù)孔。將另一部分細(xì)胞以9×104個(gè)/孔接種細(xì)胞于6孔培養(yǎng)板中，每孔2 mL，分組處理同前，每組設(shè)4個(gè)復(fù)孔。培養(yǎng)48 h后，分別進(jìn)行MTT實(shí)驗(yàn)、黑素含量實(shí)驗(yàn)、TYR活性實(shí)驗(yàn)、RT-PCR實(shí)驗(yàn)。

2.3 指標(biāo)檢測(cè)

2.3.1 細(xì)胞活性 向96孔板各孔加20μL MTT（5 mg/mL），繼續(xù)培養(yǎng)4 h，棄上清，每孔加入150μL DMSO振蕩10 min，選擇490 nm在酶標(biāo)儀上測(cè)定各孔吸光度值。細(xì)胞增值率用D490表示。

細(xì)胞增值抑制率=D490給藥/D490空白×100%

2.3.2 黑素含量 棄掉6孔板培養(yǎng)液，PBS洗2次，每孔加入1 mL 0.25%胰酶消化10 min后，再加入1 mL DMEM培養(yǎng)液終止消化，收集各組細(xì)胞懸液至15 mL離心管中，1 500 r/min離心3 min，棄上清，加入1 mol/L的NaOH溶液100μL，混勻，37℃水浴1 h，加入400μL雙蒸水，混勻，從每支離心管中取出100μL溶液加至96孔板中，選擇490 nm在酶標(biāo)儀上測(cè)定各孔吸光度值。黑素合成用D490表示。

2.3.3 TYR活性 棄掉96孔板培養(yǎng)液，PBS洗2次，每孔加入1%Triton X-100溶液100μL，迅速將其置于-80℃冰箱中30 min，取出室溫融化。每孔加入50μL預(yù)熱的0.2%左旋多巴（L-dopa）溶液，37℃下反應(yīng)3 h，選擇490 nm在酶標(biāo)儀上測(cè)定各孔吸光度值。TYR活性用D490表示。

2.3.4 RT-PCR法檢測(cè)細(xì)胞TYR、TRP-1、TRP-2、ERK1、ERK2、JNK2 mRNA表達(dá) 收集6孔板中各組細(xì)胞，按照Trizol說(shuō)明書(shū)提取總RNA，各組以RNA 3μg進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。反應(yīng)條件：25℃反應(yīng)10 min，42℃反應(yīng)60 min，70℃反應(yīng)10 min終止反應(yīng)，得到cDNA。引物序列由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司設(shè)計(jì)與合成，以β-actin為內(nèi)參照，引物序列信息見(jiàn)表1。

表1 RT-PCR引物序列Tab.1 Primer sequences of RT-PCR

擴(kuò)增條件：94℃預(yù)變性時(shí)間2 min；94℃變性30 s、退火40 s（TYR 54℃、TRP-1 57℃、TRP-2 55℃、ERK1 57℃、ERK2 54℃、JNK2 54℃、βactin 54℃）、72℃延伸40 s，35個(gè)循環(huán)；72℃終止延伸10 min。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物5μL與6×DNA loading buffer 1μL混勻，加入1.5%瓊脂糖凝膠中，80 V恒壓電泳30 min后，凝膠成像系統(tǒng)觀察電泳結(jié)果，應(yīng)用gel-pro凝膠分析軟件對(duì)電泳譜帶進(jìn)行分析，用校正值（TYR/β-actin、TRP-1/β-actin、TRP-2/β-actin、ERK1/β-actin、ERK2/β-actin、JNK2/β-actin）表示mRNA水平。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 19.0軟件進(jìn)行單因素方差分析（ANOVA），用LSD法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行兩兩比較。P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)細(xì)胞活性的影響 結(jié)果見(jiàn)表2，與空白對(duì)照組相比，100、10、1μmol/L的黃芩素對(duì)細(xì)胞的增殖有顯著抑制作用 （P＜0.05或P＜0.01），說(shuō)明上述劑量的藥物對(duì)細(xì)胞有毒性作用，不適合進(jìn)行下一步的藥效學(xué)研究；0.1、0.01、0.001μmol/L的黃芩素不影響細(xì)胞活性。

3.2 對(duì)黑素合成的影響 結(jié)果見(jiàn)表3，與空白對(duì)照組相比，黃芩素組給藥劑量為 0.1、0.01、0.001μmol/L時(shí)，對(duì)黑素合成有顯著的抑制作用（P＜0.05或P＜0.01）；陽(yáng)性對(duì)照組對(duì)黑素合成有極顯著的促進(jìn)作用 （P＜0.01）。

3.3 對(duì)TYR活性的影響 結(jié)果見(jiàn)表4，與空白對(duì)照組相比，黃芩素組給藥劑量為 0.1、0.01、0.001μmol/L時(shí)，對(duì)TYR活性有極顯著的抑制作用（P＜0.01）；陽(yáng)性對(duì)照組對(duì)TYR活性有極顯著的促進(jìn)作用 （P＜0.01）。

3.4 對(duì)細(xì)胞TYR、TRP-1、TRP-2 mRNA表達(dá)的影響

表2 黃芩素對(duì)A375細(xì)胞活性的影響 （，n=6）Tab.2 Effects of bicalein on the activity of A375 cells（，n=6）

表2 黃芩素對(duì)A375細(xì)胞活性的影響 （，n=6）Tab.2 Effects of bicalein on the activity of A375 cells（，n=6）

注：與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別 劑量/（μmol·L-1） 吸光度值 細(xì)胞增殖率/% 0.336±0.025 100陽(yáng)性對(duì)照組 0.001 0.339±0.036 101黃芩素組 100 0.124±0.012** 37**黃芩素組 10 0.279±0.024** 83**黃芩素組 1 0.300±0.047* 89*黃芩素組 0.1 0.329±0.023 98黃芩素組 0.01 0.319±0.033 95黃芩素組空白對(duì)照組-0.001 0.326±0.041 97

表3 黃芩素對(duì)A375細(xì)胞黑素合成的影響 （，n=4）Tab.3 Effects of baicalein on the synthesis of melanocytes of A375（，n=4）

表3 黃芩素對(duì)A375細(xì)胞黑素合成的影響 （，n=4）Tab.3 Effects of baicalein on the synthesis of melanocytes of A375（，n=4）

組別 劑量/（μmol·L-1） 吸光度值 與空白組D比值/% - 0.074±0.003 100陽(yáng)性對(duì)照組 0.001 0.093±0.006** 125**黃芩素組 0.1 0.060±0.006** 81**黃芩素組 0.01 0.063±0.004** 85**黃芩素組 0.001 0.065±0.002* 88空白對(duì)照組*

注：與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01表4 黃芩素對(duì)A375細(xì)胞TYR活性的影響（，n=6）Tab.4 Effect of baicalein on TYR activity of A375 cells（，n=6）

注：與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01表4 黃芩素對(duì)A375細(xì)胞TYR活性的影響（，n=6）Tab.4 Effect of baicalein on TYR activity of A375 cells（，n=6）

注：與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別 劑量/（μmol·L-1） 吸光度值 與空白組D比值%空白對(duì)照組- 0.079±0.002 100陽(yáng)性對(duì)照組 0.001 0.096±0.003** 121**黃芩素組 0.1 0.068±0.004** 86**黃芩素組 0.01 0.069±0.002** 87**黃芩素組 0.001 0.070±0.002** 88**

結(jié)果見(jiàn)表5和圖1，與空白對(duì)照組相比，黃芩素組（0.1μmol/L）TYR、TRP-1、TRP-2的mRNA的表達(dá)均明顯降低（P＜0.05或P＜0.01），陽(yáng)性對(duì)照組TYR、TRP-1、TRP-2的mRNA表達(dá)均明顯增強(qiáng)（P＜0.01）。

表5 TYR、TRP-1、TRP-2 m RNA的RT-PCR產(chǎn)物凝膠電泳定量分析結(jié)果（，n=4）Tab.5 Quantitative analysis of gel electrophoresis results on the RT-PCR products of TYR、TRP-1、TRP-2 mRNA（，n=4）

表5 TYR、TRP-1、TRP-2 m RNA的RT-PCR產(chǎn)物凝膠電泳定量分析結(jié)果（，n=4）Tab.5 Quantitative analysis of gel electrophoresis results on the RT-PCR products of TYR、TRP-1、TRP-2 mRNA（，n=4）

注：與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

-actin空白對(duì)照組組別 劑量/（μmol·L-1） TYR/β-actin TRP-1/β-actin TRP-2/β 0.602±0.013 0.534±0.032 0.574±0.089陽(yáng)性對(duì)照組 0.001 0.859±0.062** 0.698±0.065** 0.845±0.046**黃芩素組 0.1 0.499±0.025* 0.235±0.040** 0.437±0.035 -*

注：a.陽(yáng)性對(duì)照組；b.黃芩素組（0.1μmol/L）；c.空白對(duì)照組；A.β-actin與TYR的PCR結(jié)果；B.β-actin與TRP-1的PCR結(jié)果；C.β-actin與TRP-2的PCR結(jié)果

3.5 對(duì)細(xì)胞ERK1、ERK2、JNK2 mRNA表達(dá)的影響 結(jié)果見(jiàn)表6和圖2，與空白對(duì)照組相比，黃芩素組（0.1μmol/L）ERK1、ERK2、JNK2的mRNA表達(dá)均明顯降低 （P＜0.05），陽(yáng)性對(duì)照組ERK1、ERK2、JNK2的mRNA表達(dá)均明顯增強(qiáng)（P＜0.01）。

圖2 黃芩素對(duì)A375 ERK1、ERK2、JNK2 m RNA表達(dá)水平的影響Fig.2 Effects of baicalein on themRNA expression levels of ERK1，ERK2，JNK2 in A375 cells

表6 ERK1、ERK2、JNK2 m RNA的RT-PCR產(chǎn)物凝膠電泳定量分析結(jié)果（，n=4）Tab.6 Quantitative analysis of gel electrophoresis results on the RT-PCR products of ERK1，ERK2，JNK2 mRNA（，n=4）

表6 ERK1、ERK2、JNK2 m RNA的RT-PCR產(chǎn)物凝膠電泳定量分析結(jié)果（，n=4）Tab.6 Quantitative analysis of gel electrophoresis results on the RT-PCR products of ERK1，ERK2，JNK2 mRNA（，n=4）

注：與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

-actin空白對(duì)照組組別 劑量/（μmol·L-1） ERK1/β-actin ERK2/β-actin JNK2/β 0.326±0.035 0.517±0.018 0.321±0.013陽(yáng)性對(duì)照組 0.001 0.485±0.006** 0.853±0.087** 0.483±0.036**黃芩素組 0.1 0.272±0.014* 0.410±0.012* 0.271±0.013 -*

4 討論

黃褐斑是一種常見(jiàn)的獲得性色素沉著性皮膚病，黑素在皮膚內(nèi)的增多是導(dǎo)致黃褐斑產(chǎn)生的主要原因［6］。黑素生成及代謝的任何一個(gè)環(huán)節(jié)發(fā)生改變，都可引起色素障礙性皮膚病。人體內(nèi)黑素在黑素細(xì)胞黑素體中合成，其合成受酪氨酸酶（TYR）、酪氨酸酶相關(guān)蛋白-1（TRP-1）和TRP-2調(diào)控，TYR在黑素合成過(guò)程中起到關(guān)鍵限速酶的作用，而TRP-1和TRP-2在黑素生物合成途徑下游起作用［7-9］。人黑素細(xì)胞合成黑素的量取決于酪氨酸酶的活性水平，降低酪氨酸酶活性可阻止皮膚黑素生成，能夠抑制酪氨酸酶活性并減少黑素生成

的藥物可以提高黃褐斑的治療效果［10］。在黑素瘤A375細(xì)胞中存在著雌激素受體 （ER），雌激素作為一種細(xì)胞外信號(hào)，其發(fā)揮作用的途徑一般是與ER結(jié)合，MAPK信號(hào)通路是細(xì)胞外信號(hào)引起細(xì)胞生理反應(yīng)的共同途徑。雌激素通過(guò)皮膚細(xì)胞ER對(duì)黃褐斑的產(chǎn)生有調(diào)節(jié)作用，而植物雌激素有類雌激素作用。黃芩素作為一種植物雌激素能夠抑制MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞增殖并且誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡［11］。因此，選擇具有雌激素樣作用成分黃芩素來(lái)進(jìn)行治療黃褐斑的研究。

實(shí)驗(yàn)表明，黃芩素安全劑量作用于A375細(xì)胞后，能顯著抑制細(xì)胞黑素合成及TYR活性且呈正相關(guān)，抑制A375細(xì)胞中TYR、TRP-1、TRP-2的mRNA表達(dá)，提示黃芩素可能通過(guò)抑制TYR活性和/或抑制TYR、TRP-1、TRP-2 mRNA表達(dá)抑制黑素合成，并且黃芩素能顯著抑制MAPK信號(hào)通路蛋白激酶ERK1、ERK2、JNK2的mRNA表達(dá)，推測(cè)MAPK信號(hào)通路可能參與了黑素細(xì)胞中黑素生成的調(diào)控。

現(xiàn)在醫(yī)學(xué)中常用的脫色劑等雖對(duì)黃褐斑有一定的療效，但長(zhǎng)期應(yīng)用容易產(chǎn)生毒副作用。中藥因其毒副作用小，療效較好，受到越來(lái)越多的關(guān)注。陳龍等［12］通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)養(yǎng)顏青娥丸對(duì)黑素細(xì)胞的增殖以及酪氨酸酶的活性有抑制作用，對(duì)黑素合成的量也有降低作用，認(rèn)為養(yǎng)顏青娥丸具有治療黃褐斑的作用。養(yǎng)顏青娥丸處方中的君藥杜仲對(duì)黑素細(xì)胞增殖及酪氨酸酶活性有抑制作用且對(duì)黑素合成有降低作用，對(duì)黃褐斑有一定的治療作用［12］。李洪武［13］等用中波紫外線 （UVB）誘導(dǎo)豚鼠背部膚色素沉著后用白術(shù)、茯苓、山茱萸等乙醇提取物治療，可顯著抑制TYR活性，茯苓、白術(shù)乙醇提取物能在基因轉(zhuǎn)錄水平下調(diào)豚鼠皮膚酪氨酸酶mRNA表達(dá)抑制酶蛋白生物合成。我們通過(guò)從ER信號(hào)通路角度，探索植物雌激素成分黃芩素對(duì)相關(guān)細(xì)胞信號(hào)通路的調(diào)控作用，推測(cè)中藥植物雌激素治療黃褐斑的分子機(jī)制，探討黃芩素對(duì)黃色斑等色素性皮膚病可能具有的治療作用，為合理利用中藥植物雌激素防治黃褐斑等皮膚色素沉著疾病提供理論基礎(chǔ)，更好的指導(dǎo)臨床用藥。

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Inhibitory effect of melanogenesis in A375 cells and related cell signaling pathways regulating m echanism of baicalein

CHEN Chen， XU Yan-ming， WANG Xue， GEN Fang*， LIU Guo-liang， LEI Shuang-yuan，ZHANG Ning*

（1.Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 15OO4O，China；2.Harbin Normal University，Harbin 15OO25，China）

AIM To study the effects of baicalein on melanogenesis and investigate the relationship between MAPK signal pathway and the role in A375 cell lines.METHODS The A375 cell lineswere treated with baicalein.Effects of baicalein on cell viability，tyrosinase（TRY）activity and melanogenesis in cultured A375 cells were measured by MTTmethod，NaOH method and L-dopa oxidation method，respectively.RT-PCR wasapplied to measuring themRNA expression levels of（TYR）and tyrosinase related proteins and themRNA expression levels of ERK1，ERK2 and JNK2.RESULTS 0.1～0.001μmol/L baicalein can significantly inhibitmelanin synthesis and TYR activities in A375 cell lines.Baicalein（0.1μmol/L）can significantly inhibit TYR，TRP-1，TRP-2 mRNA and ERK1，ERK2，JNK2 mRNA expression levels.CONCLUSION It is assumed that baicalein can significantly suppressmelanogenesis of A375 cells.The possiblemolecularmechanism of baicalein inhibitingmelanin synthesismay be by cutting TYR，TRP-1 and TRP-2 mRNA expression quantity and associating with the inhibi-

baicalein；A375 cells；melanin；MAPK signal pathway

R966

A

1001-1528（2015）12-2600-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.12.006

2014-07-15

國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目 （81274035）；黑龍江省自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目 （D201234）；黑龍江省博士后科研啟動(dòng)金（LBH-Q13162）；黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)優(yōu)秀創(chuàng)新人才支持計(jì)劃資助 （2012）

陳 晨（1991—），女，碩士生，主要從事中藥理學(xué)研究。Tel：（0454）6050350，E-mail：chenchen1208@yeah.net

*通信作者：張 寧 （1974—），男，博士，副教授，主要從事中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及體內(nèi)代謝研究。Tel：（0454）6050350，E-mail：zhangning0454@163.com耿 放 （1981—），女，博士，副教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事天然藥物活性成分研究。Tel：（0451）82475863，Email：gengfang1980@163.com

日期：2014-10-17

網(wǎng)絡(luò)出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/31.1368.R.20141017.1200.001.html

tion of the expression of ERK1、ERK2 and JNK2.