姜鵬玲，尼杰，谷峰，李春艷，張敏，付麗，只向成

(天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院乳腺癌防治教育部重點實驗室，天津300060)

乳腺癌的高度異質(zhì)性，導(dǎo)致腫瘤細胞對化療藥物的敏感性存在差異［1，2］。2008年11月～2013年9月，我們觀察了多西他賽(DOC)、吡柔比星(THP)、表柔比星(EPI)、長春瑞濱(NVB)、順鉑(CDDP)5種常用化療藥物對原發(fā)性乳腺癌細胞原代培養(yǎng)細胞的單藥化療有效率，并分析影響化療有效率的因素。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院收治的女性原發(fā)性乳腺癌患者536例，均經(jīng)石蠟切片病理學(xué)確診，均無其他惡性腫瘤病史;年齡23～81歲，平均52歲;Ⅰ期164例，Ⅱ期282例，Ⅲ期90例。

1.2 藥物敏感性檢測 采用膠滴腫瘤藥敏檢測(CD-DST)技術(shù)。手術(shù)過程中取患者乳腺癌組織，在無菌條件下剪碎，經(jīng)膠原酶消化，獲取單細胞懸液。離心后接種于Ⅰ型膠原凝膠的細胞培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)出原代細胞后，棄去未貼壁的死細胞，獲取單細胞懸液。冰浴條件下將CD-DST試劑盒中的A、B、C液按8∶1∶1制成膠原凝膠液，與細胞沉淀混合打勻;按30 μL/滴、3滴/孔種植到6孔板中，在37℃條件下孵育1 h使其凝膠化后，加入培養(yǎng)液培養(yǎng)。培養(yǎng)24 h后，分別加入需檢測的化療藥物DOC(10 μg/mL)、THP(0.5 μg/mL)、EPI(0.5 μg/mL)、CDDP(15 μg/mL)、NVB(4 μg/mL)，設(shè)立空白對照組。培養(yǎng)24 h后，洗去化療藥物，加入培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)7 d。中性紅染色固定干燥后，采用Scionimage軟件對圖像進行分析，結(jié)果用藥物處理組與空白對照組的腫瘤細胞克隆量光密度比值表示?！?0%為腫瘤細胞對化療藥物敏感，＞50%為不敏感即耐藥。化療藥物有效率 =對化療藥物敏感例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

在原發(fā)性乳腺癌原代培養(yǎng)細胞中，DOC的單藥化療有效率為 46.5%(249/536)、EPI為 42.9%(230/536)、THP 為 42.7%(229/536)、CDDP 為42.5%(228/536)、NVB 為34.0%(182/536)。DOC在年齡＜60歲、ER陰性、p53陽性、非Luminal型乳腺癌細胞中單藥有效率高(P均＜0.05);EPI在ER陰性、Her-2陽性、非Luminal型、非Luminal A型乳腺癌細胞中單藥有效率高(P均＜0.05);THP在組織學(xué)Ⅲ級、Her-2陽性乳腺癌細胞中單藥有效率高(P均＜0.05);CDDP在ER陽性、Luminal型乳腺癌細胞中單藥有效率高(P均＜0.05);NVB在PR陽性、Luminal B型和非Her-2過表達型乳腺癌細胞中單藥有效率高(P均＜0.05);詳見表1。

表1 單藥有效率與乳腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

3 討論

采用CD-DST技術(shù)培養(yǎng)腫瘤細胞所需癌組織量少，且癌組織離體時間短，生物學(xué)性狀尚未發(fā)生大的變化，能較真實地反映整個腫瘤細胞群體的特性及不同供體的個體差異，具有較好的臨床相關(guān)性，標(biāo)本可評價率為 84.3%［3］。

本研究通過CD-DST發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性乳腺癌原代培養(yǎng)細胞對5種常用化療藥物的敏感性不同;而且，通過對乳腺癌患者臨床病理特征進一步分層發(fā)現(xiàn)，同一種化療單藥在不同分層中的敏感性也存在差異。其中，DOC在ER陰性、p53陽性和非Luminal型乳腺癌細胞中較敏感，與Rouzier等［4］和Holmes等［5］提出DOC在ER陰性、p53陽性的乳腺癌細胞中敏感性較高的結(jié)論一致。但是，Durbecq等［6］認為，乳腺癌對DOC的敏感性與p53表達無關(guān)。因此，以上結(jié)論還需更多的臨床數(shù)據(jù)驗證。此外，本研究中DOC對年齡≥60歲乳腺癌患者的化療有效率較低，與老年患者乳腺癌組織學(xué)分級低、ER高表達、p53 低表達、化療敏感性低的特點相符［5，7，8］。THP在組織學(xué)Ⅲ級和Her-2陽性乳腺癌細胞中的敏感性較高;EPI在ER陰性、Her-2陽性和非Luminal型乳腺癌細胞中的敏感性較高;與 Carey等［9］和Pritchard等［10］報道的蒽環(huán)類藥物在Her-2過表達型乳腺癌中的敏感性較高的結(jié)果一致。Petrelli等［11］報道，CDDP用于乳腺癌新輔助化療中，其病理完全緩解率(pCR)可達41.9%;三陰型乳腺癌患者達到pCR的例數(shù)約是非三陰型患者的2倍。本研究結(jié)果顯示，CDDP在ER陽性和Luminal型乳腺癌細胞中化療敏感性較高，在三陰型和非三陰型乳腺癌細胞中其化療敏感性差異無統(tǒng)計學(xué)意義。目前，三陰型乳腺癌能否在含有CDDP的新輔助化療中獲益尚不明確。伴有BRCA突變的三陰型乳腺癌對CDDP最敏感，pCR 可達 83%～100%［12］。然而，BRCAness型乳腺癌在三陰型乳腺癌中更常見，約占2/3，BRCAness型乳腺癌具有散發(fā)性乳腺癌和BRCA突變型乳腺癌的混合特征，與BRCA突變型相比，在含CDDP 的新輔助化療中其 pCR 明顯下降［13，14］。本研究觀察到，CDDP單藥有效率在三陰型乳腺癌和非三陰型乳腺癌中的差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但不能說明CDDP在三陰型乳腺癌中不敏感。由于本研究中未對三陰型乳腺癌進行基因方面的檢測，所以上述推斷尚需進一步驗證。而同樣屬于作用于微管的生物堿類化療藥，NVB與DOC的敏感因素完全不同，也為臨床上兩者聯(lián)合使用不會產(chǎn)生交叉耐藥［15］提供一定的依據(jù)。

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