張加余，蔡 偉，李 云，劉榮榮，王子健，劉 穎，盧建秋，喬延江（.北京中醫(yī)藥大學(xué)科研實(shí)驗(yàn)中心，北京 0009；.北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京 000）

HPLC／LTQ-OrbitrapMSn結(jié)合MDF數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)快速鑒定藏白蒿綠原酸類似物

張加余1，蔡 偉2，李 云2，劉榮榮2，王子健1，劉 穎1，盧建秋1，喬延江2
（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)科研實(shí)驗(yàn)中心，北京 100029；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京 100102）

本研究采用HPLC／LTQ-Orbitrap MSn方法獲取藏白蒿提取物的全掃描質(zhì)譜數(shù)據(jù)，結(jié)合質(zhì)量虧損過濾（MDF）數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)，確定藏白蒿中綠原酸類似物（CGAs）的MDF模板分子和過濾窗口，以挖掘高分辨數(shù)據(jù)所蘊(yùn)含的成分信息。結(jié)果表明：根據(jù)CGAs質(zhì)譜裂解規(guī)律及診斷離子，從藏白蒿中鑒定出20 個(gè)CGAs。其中，單酯類CGAs類似物9個(gè)，包括3-CQA、5-CQA、1-CQA和4-CQA，1-pCoQA和5-pCoQA，1-FQA、5-FQA和4-FQA；雙酯類CGAs類似物11個(gè)，包括1-CQA-glycoside和5-CQA-glycoside，3，4-DiCQA、4，5-DiCQA和3，5-DiCQA，CFQA-1、CFQA-2、CFQA-3、CFQA-4、CFQA-5和CFQA-6。該方法可快速、靈敏地檢測(cè)中藥復(fù)雜體系中的CGAs，且可推廣應(yīng)用于中藥化學(xué)成分類似物的快速鑒定。

質(zhì)量虧損過濾；藏白蒿；綠原酸類似物；表征

菊科蒿屬植物，如青蒿、奇蒿（南劉寄奴）、茵陳蒿以及艾葉等均為常用中藥，并被中國(guó)藥典所收載［1］。該屬植物含有綠原酸（CGAs）、黃酮、揮發(fā)油、萜類、香豆素等多種有效成分［2］，具有清熱解毒、抗菌消炎、祛風(fēng)除濕、通經(jīng)活絡(luò)、活血、止血等功效，其中，CGAs具有抗菌、消炎等諸多藥理作用［3-4］。藏白蒿（Artemisia younghusbandii J.R.Drumm.ex Pamp）是蒿屬植物的一種，主要生長(zhǎng)于西藏海拔4 000～4 650m的地區(qū)，是我國(guó)的特有植物［5-6］，但其所含的CGAs成分尚未見報(bào)道。

LC／MS技術(shù)結(jié)合了色譜的分離能力和質(zhì)譜的高靈敏度、高專屬性的檢測(cè)能力，已成為中藥化學(xué)成分結(jié)構(gòu)鑒定的手段之一［7-9］。其中，LTQ-Orbitrap MS兼有高分辨率、高質(zhì)量精度等諸多優(yōu)點(diǎn)，可用于復(fù)雜物質(zhì)體系中化學(xué)成分的快速分析。然而，由此產(chǎn)生的海量復(fù)雜的高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)，人工解析難度極大，制約了該技術(shù)的應(yīng)用與推廣，這使得高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生。例如，質(zhì)量虧損過濾（MDF）技術(shù)以能夠快速挖掘復(fù)雜生物基質(zhì)中藥物代謝產(chǎn)物信息而得到廣泛關(guān)注和應(yīng)用［10］。它通過選定MDF模板分子和設(shè)定MDF過濾窗口，可以剔除大量無(wú)關(guān)化學(xué)成分的質(zhì)譜信號(hào)，保留相關(guān)代謝物的數(shù)據(jù)集，從而達(dá)到凈化譜圖信息和篩選鑒定目標(biāo)成分的目的。

中藥材所蘊(yùn)含的化學(xué)成分大多是經(jīng)特定的生源途徑合成的類似物，具備相似的母核骨架或者亞結(jié)構(gòu)，這為MDF技術(shù)在中藥化學(xué)成分篩選中的應(yīng)用提供了前提。然而，由于中藥物質(zhì)體系的復(fù)雜性和特殊性，該技術(shù)在中藥化學(xué)成分鑒定領(lǐng)域中的應(yīng)用較為少見［11-12］。本研究以藏白蒿中的CGAs為研究對(duì)象，應(yīng)用HPLC／LTQ-Orbitrap MSn采集高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)，輔以MDF數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)，并結(jié)合質(zhì)譜裂解規(guī)律進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析，以期為中藥化學(xué)成分類似物的結(jié)構(gòu)鑒定提供方法參考。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與裝置

Accela 600pump高效液相色譜-LTQOrbitrap XL質(zhì)譜聯(lián)用儀：美國(guó)Thermo Scientific公司產(chǎn)品，配有電噴霧離子源（ESI）、在線脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣器、高壓二元梯度泵和Thermo Xcalibur 2.1、Metworks 2.0數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)；KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司產(chǎn)品；R200D型電子分析天平：德國(guó)Sartorius公司產(chǎn)品；0.22μm微孔濾膜：北京華志色譜科技有限公司產(chǎn)品。

1.2 主要材料與試劑

藏白蒿：采自西藏拉薩，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥現(xiàn)代研究中心李軍副研究員鑒定為菊科蒿屬植物藏白蒿Artemisia younghusbandii；綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品（3-CQA、4-CQA、5-CQA、3，4-DiCQA、3，5-DiCQA、4，5-DiCQA）：成都普瑞法科技開發(fā)有限公司產(chǎn)品，經(jīng)HPLC面積歸一化法測(cè)定其純度均大于98%。

乙腈和甲醇（色譜純）：美國(guó)Fisher公司產(chǎn)品；甲酸（色譜純）：美國(guó)Tedia公司產(chǎn)品；分析用水為Millipore超純水；其他試劑均為分析純。

1.3 實(shí)驗(yàn)條件

1.3.1 色譜條件 色譜柱：Agilent Zorbax SB C18柱（250mm×4.6mm×5μm）；HPLC流動(dòng)相：A為0.1%（體積分?jǐn)?shù)）甲酸水溶液，B為乙腈-甲醇溶液（3∶1，V／V）；線性梯度洗脫程序：0～5min、2%～8%B，5～10min、8%～12%B，10～25min、12%～15%B，25～30min、15%～24%B，30～47min、24%～24%B，47～61min、24%～36%B，61～75min、36%～100%B；流速1.0mL／min；柱溫25℃；進(jìn)樣量10μL。

1.3.2 質(zhì)譜條件 電噴霧離子源（ESI）負(fù)離子檢測(cè)，全離子掃描模式，質(zhì)量掃描范圍m／z 100～800。流動(dòng)相采用柱后分流法，分流比為4∶1，噴霧電壓3.0kV，毛細(xì)管溫度300℃，鞘氣流速27L／h，輔助氣流速180L／h。分析時(shí)，首先采用高分辨傅里葉（FT）全掃描采集一級(jí)質(zhì)譜，掃描分辨率為60 000；然后采用二維線性離子阱（LTQ）采集二級(jí)和三級(jí)質(zhì)譜，動(dòng)態(tài)數(shù)據(jù)依賴掃描，自動(dòng)選取上一級(jí)最強(qiáng)離子峰進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)解離（CID）裂解，碰撞能量為30%。

1.4 溶液的配制

1.4.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制 分別稱取適量的上述6種標(biāo)準(zhǔn)品，精密稱定，加入甲醇配制成100mg／L對(duì)照品儲(chǔ)備液，于4℃冰箱中儲(chǔ)存。進(jìn)樣前，精密吸取適量的上述儲(chǔ)備液，用甲醇定容至5mL，即得標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

1.4.2 樣品溶液的配制 稱取1g藏白蒿干燥粉末（40目），置于50mL錐形瓶中，加25mL 50%乙腈超聲提取30min，過濾；取5mL濾液，加0.4mL二氯甲烷后，振搖，靜置分層；取下層溶液過0.22μm微孔濾膜，精密吸取10μL續(xù)濾液，注入HPLC／LTQ-Orbitrap MS進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 HPLC／LTQ-Orbitrap MSn檢測(cè)條件的優(yōu)化

采用0.1%甲酸作為流動(dòng)相改性劑，可獲得良好的CGAs色譜峰形和質(zhì)譜信號(hào)響應(yīng)值。同時(shí)，對(duì)比了不同種類流動(dòng)相（甲醇-0.1%甲酸溶液、乙腈-0.1%甲酸溶液和乙腈-甲醇-0.1%甲酸溶液）對(duì)CGAs色譜分離效果的影響，最終選擇乙腈-甲醇（3∶1，V／V）混合有機(jī)溶劑為有機(jī)相，0.1%甲酸水溶液為水相，流速為1.0mL／min進(jìn)行色譜分離。

2.2 樣品前處理

實(shí)驗(yàn)分別考察了提取溶劑、溶劑倍量和提取時(shí)間對(duì)CGAs提取率的影響，最終確定以25mL 50%乙腈超聲提取30 min制備供試樣品。

相變萃?。╬hase transformation extraction，PTE）具有萃取效率高、操作簡(jiǎn)便、無(wú)乳化以及富集目標(biāo)成分等諸多優(yōu)點(diǎn)［12-14］，其操作流程為向乙腈-水均相溶液中加入適量誘導(dǎo)劑（如低極性有機(jī)溶劑或無(wú)機(jī)鹽等）或降低溫度，可使均相溶液快速分層（上層是以乙腈為主的有機(jī)相，下層是以水為主的水相）。本實(shí)驗(yàn)采用0.4mL二氯甲烷作為50%乙腈溶液的萃取分層誘導(dǎo)劑，達(dá)到了良好的分層效果。經(jīng)初步檢測(cè)，CGAs在水相中得到了較好的富集，而有機(jī)相則特異性地剔除了大量低極性成分，避免了它們對(duì)CGAs質(zhì)譜信號(hào)的掩蔽，提高了檢測(cè)靈敏度。PTE處理后的水相和有機(jī)相的總離子流圖示于圖1。 2.3 MDF數(shù)據(jù)挖掘方法的建立與應(yīng)用

圖1 藏白蒿提取物相變萃取后，有機(jī)相（a）和水相（b）的總離子流圖Fig.1 Total ion chromatograms of organic phase（a）and aqueous phase（b）for the extract of Artemisia younghusbandii with PTE

依據(jù)MDF概念，由CGAs亞結(jié)構(gòu)確定MDF模板分子。一般來說，CGAs是指一個(gè)或多個(gè)咖啡酸、香豆酸、阿魏酸、芥子酸等肉桂酸與奎尼酸或其衍生物莽草酸、奎尼酸甲酯、奎尼酸丁酯等縮合而形成的特殊酯類。其中以單取代或雙取代的酯類化合物最為常見，但兩者的MDF過濾窗口（質(zhì)量過濾窗口和質(zhì)量虧損過濾窗口）差異較大。因此，本實(shí)驗(yàn)采用MDF分別對(duì)兩類成分進(jìn)行篩選。

通過分析常見的CGAs分子結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)，阿魏酰、咖啡酰及芥子酰奎尼酸等均可視為香豆?？崴岬牧u基或甲氧基取代的產(chǎn)物。因此，對(duì)于單取代奎尼酸酯來說，可選擇香豆酰奎尼酸作為MDF模板分子。在質(zhì)量過濾窗口選擇上，香豆酰作為取代基時(shí)，得到的化合物相對(duì)分子質(zhì)量最低（314u）；芥子酰作為取代基時(shí)，得到的化合物相對(duì)分子質(zhì)量最高（398u）。由于本實(shí)驗(yàn)采用電噴霧負(fù)離子檢測(cè)模式，因此設(shè)定單取代奎尼酸的MDF質(zhì)量范圍為313～398u。在質(zhì)量過濾虧損窗口選擇上，鑒于香豆酰奎尼酸的質(zhì)量虧損值最?。ǎ?5mu），芥子?？崴岬馁|(zhì)量虧損值最大（＋112.5mu），設(shè)定質(zhì)量虧損范圍為55～113mu。采用上述MDF方法過濾后得到的總離子流圖示于圖2。同樣地，對(duì)于雙取代奎尼酸酯來說，可選用雙香豆?？崴嶙鳛镸DF模板分子，MDF質(zhì)量過濾窗口為435～604u，質(zhì)量虧損過濾窗口為55～171mu，過濾后的離子流圖示于圖3。與過濾前的總離子流圖相比，處理后的譜圖更加純凈，目標(biāo)成分得到了較大程度的暴露，為下一步的結(jié)構(gòu)鑒定提供了便利。

圖2 MDF處理后的奎尼酸單酯總離子流圖Fig.2 Total ion chromatogram of quinic acid monoesters after MDF processing

圖3 MDF處理后的奎尼酸雙酯總離子流圖Fig.3 Total ion chromatogram of quinic acid diesters after MDF processing

2.4 CGAs類似物的快速結(jié)構(gòu)鑒定

從MDF過濾后得到的總離子流圖中進(jìn)一步篩選CGAs類似物候選成分是下一步研究的主要目標(biāo)。根據(jù)前述的CGAs定義和分子結(jié)構(gòu)分析，設(shè)定高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)處理參數(shù)為：最大分子質(zhì)量誤差為3×10-6，H-C比例小于5，不飽和度（Ω）范圍為8～20，C、H、O原子數(shù)目范圍分別為13～30、13～30、8～14。

中藥化學(xué)成分多具有相似的母核骨架或亞結(jié)構(gòu)，在質(zhì)譜裂解過程中一般會(huì)發(fā)生類似的裂解反應(yīng)，并產(chǎn)生一系列可以代表該類成分的診斷離子（diagnostic product ions，DPIs）［15］，可用于化學(xué)成分類似物的快速篩選和結(jié)構(gòu)鑒定。例如，單咖啡?？崴幔–QA）的診斷離子可歸納為m／z353、191、179、173等。根據(jù)MDF處理結(jié)果以及診斷離子分析，從藏白蒿提取物中鑒定出20種CGAs類似物，各化學(xué)成分的保留時(shí)間、質(zhì)荷比的理論值和高分辨質(zhì)譜的實(shí)測(cè)值、誤差以及多級(jí)質(zhì)譜的碎裂信息等列于表1。

2.4.1 單酯類CGAs類似物的結(jié)構(gòu)鑒定 在電噴霧負(fù)離子檢測(cè)模式下，化合物3、4、5、6均產(chǎn)生m／z353［M-H］-的準(zhǔn)分子離子峰，結(jié)合精確相對(duì)分子質(zhì)量可推測(cè)它們的分子式為C16H17O9（單咖啡?？崴幔珻QA）。通過對(duì)比分析多級(jí)質(zhì)譜碎片離子種類和相對(duì)離子強(qiáng)度，可進(jìn)一步確定咖啡?；诳崴崮负松系孽；恢?。化合物3、4、5的準(zhǔn)分子離子峰在ESIMS2中均中性丟失一分子咖啡酰（162u）而產(chǎn)

生m／z191［M-H-Caffeoyl］-的基峰離子，可知咖啡酰取代基的位置分別為1-、3-或5-位。通過分析化合物4和5的其他碎片離子及與對(duì)照品比對(duì)，可以將它們鑒定為3-CQA和5-CQA。由于1-取代的CQA也能產(chǎn)生m／z 191離子，且m／z179離子的相對(duì)豐度較低，因此將化合物3鑒定為1-CQA［16］。化合物6的準(zhǔn)分子離子峰m／z 353在ESI-MS2裂解過程中丟失一分子咖啡酰（162u）產(chǎn)生m／z191［M-HCaffeoyl］-離子，接著又丟失一分子水（18u）產(chǎn)生m／z173［M-H-Caffeoyl-H2O］-的基峰離子，由此推測(cè)其為4-CQA，通過與對(duì)照品比對(duì)，發(fā)現(xiàn)二者得到的結(jié)果一致。

表1 藏白蒿中綠原酸類成分的HPLC/LTQ-Oritrap MS 鑒定結(jié)果Table1 Identification results of CGAs in Artemisia younghusdandii by HPLC/LTO-Orbitrap MS

化合物7和9均產(chǎn)生m／z 337［M-H］-的準(zhǔn)分子離子峰，由精確相對(duì)分子質(zhì)量推測(cè)兩者的分子式為C16H17O8（單肉桂?？崴幔琾-CoQA）。化合物7和9的［M-H］-離子在ESI-MS2裂解過程中均先丟失一分子肉桂酰（146u）產(chǎn)生m／z191［M-H-p-Coumaroyl］-的基峰離子和m／z 163［p-Coumaroyl-H］-離子，由此推測(cè)兩者的肉桂酰取代基位置為1-或5-位［17］，同時(shí)根據(jù)保留時(shí)間，推斷其為1-pCoQA和5-pCoQA。

化合物8、10、11均產(chǎn)生m／z367［M-H］-的準(zhǔn)分子離子峰，由精確相對(duì)分子質(zhì)量推測(cè)它們的分子式為C17H19O9（單阿魏?？崴幔現(xiàn)QA）。其中，化合物8和11的準(zhǔn)分子離子峰在MS2中均中性丟失一分子阿魏酰（176u）產(chǎn)生m／z191［M-H-Feruloyl］-的基峰離子，由此推測(cè)兩者的阿魏酰取代基位置為1-或5-位，同時(shí)結(jié)合色譜保留時(shí)間，推斷其為1-FQA 和5-FQA［18］?；衔?0的準(zhǔn)分子離子峰在ESI-MS2中失去一分子阿魏酰（176u）和一分子水（18u）產(chǎn)生m／z173［M-H-Feruloyl-H2O］-的基峰離子，由此推測(cè)其分子結(jié)構(gòu)中阿魏酰取代基的位置為4-位，推斷其為4-FQA。

2.4.2 雙酯類CGAs類似物的結(jié)構(gòu)鑒定 在電噴霧負(fù)離子檢測(cè)模式下，化合物1、2、12、13、14均產(chǎn)生m／z515［M-H］-的準(zhǔn)分子離子峰。其中，根據(jù)化合物1和2的精確相對(duì)分子質(zhì)量推測(cè)它們的分子式為C22H27O14（單咖啡?？崴崞咸烟擒?，CQA-glycoside）?；衔?和2的準(zhǔn)分子離子峰在MS2中均產(chǎn)生m／z353的準(zhǔn)分子離子峰和m／z191的主要碎片離子，因此推斷它們?yōu)?-CQA-glycoside和5-CQA-glycoside［15］。根據(jù)化合物12、13、14的精確相對(duì)分子質(zhì)量，推測(cè)它們的分子式均為C25H23O12（雙咖啡?？崴幔珼iCQA）?；衔?2和14的準(zhǔn)分子離子m／z 515在ESI-MS2裂解過程中均先失去兩分子咖啡?；?×162u）以及一分子水（18u）而產(chǎn)生m／z173［M-H-2Caffeoyl-H2O］-的基峰離子，由此推測(cè)其分子結(jié)構(gòu)中咖啡酰基的取代位置之一為4-位，通過與對(duì)照品比對(duì)，可以鑒定化合物12和14分別為3，4-DiCQA和4，5-DiCQA。而化合物13的準(zhǔn)分子離子峰則失去兩分子咖啡?；?×162 u）產(chǎn)生m／z 191［M-H-2Caffeoyl］-的基峰離子，可推測(cè)咖啡?；娜〈恢弥粸?-位，通過與對(duì)照品比對(duì)，鑒定其為3，5-DiCQA。

化合物15、16、17、18、19、20在ESI-MS圖譜中均產(chǎn)生m／z529［M-H］-的準(zhǔn)分子離子峰，由精確相對(duì)分子質(zhì)量推測(cè)分子式為C26H25O12。在二級(jí)質(zhì)譜裂解過程中，它們的m／z529準(zhǔn)分子離子峰均產(chǎn)生m／z353［M-H-Feruloyl］-、m／z 367［M-H-Caffeoyl］-和m／z 191［M-H-2Caffeoyl］-等碎片離子峰，可推測(cè)為咖啡酰阿魏?？崴幔–FQA）［19］。由于缺少必要的對(duì)照品和相關(guān)文獻(xiàn)，難以確定咖啡?；桶⑽乎；诳崴嵘系娜〈恢茫蕦⑺鼈兎謩e推斷為CFQA-1、CFQA-2、CFQA-3、CFQA-4、CFQA-5和CFQA-6。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)采用相變萃取法較好地剔除了低極性成分，且起到富集CGAs類似物的作用；通過設(shè)定合適的模板分子和過濾窗，應(yīng)用MDF技術(shù)可以篩選和鑒定中藥材所含的CGAs類似物。結(jié)果表明，采用HPLC／LTQ-Qrbitrap MSn結(jié)合MDF數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)，可以達(dá)到準(zhǔn)確、快速鑒別中藥化學(xué)成分類似物的目的。

［1］ 戴小軍，劉延慶，梅全喜.蒿屬藥用植物藥理活性研究進(jìn)展［J］.中藥材，2005，28（3）：243-247.

DAI Xiaojun，LIU Yanqing，MEI Quanxi.Advances of medicinal plant Artemisia in pharmacological activity［J］.Journal of Chinese Medicinal Materials，2005，28（3）：243-247（in Chinese）.

［2］ 張婉，唐麗，謝坤，等.蒿屬植物黃酮類化學(xué)成分及藥理活性研究概況［J］.中央民族大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2009，18（1）：73-77.

ZHANG Wan，TANG Li，XIE Kun，et al.The profile of flavonoid chemical constituents and pharmacological activity in Artemisia plant［J］.Journal of the Central University for Nationalities （Natural Sciences Edition），2009，18（1）：73-77 （in Chinese）.

［3］ 吳衛(wèi)華，康楨，歐陽(yáng)冬生，等.綠原酸的藥理學(xué)研究進(jìn)展［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2006，18（4）：691-694.

WU Weihua，KANG Zhen，OUYANG Dongsheng，et al.The progress of chlorogenic acid in pharmacology［J］.Natural Product Research and Development，2006，18（4）：691-694（in Chinese）.

［4］ 鄧良，袁華，喻宗沅.綠原酸的研究進(jìn)展［J］.化學(xué)與生物工程，2005，（7）：4-6.

DENG Liang，YUAN Hua，YU Zongyuan.Research progress of chlorogenic acid［J］.Chemistry ＆Bioengineering，2005，（7）：4-6（in Chinese）.

［5］ 中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編委會(huì).中國(guó)植物志（第76卷）［M］.北京：科學(xué)出版社，1991：28.

［6］ 沈靈犀，扎西次仁，耿宇鵬，等.西藏蒿屬六種植物精油化學(xué)成分分析及抑菌效果［J］.復(fù)旦學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2010，49（1）：73-80.

SHEN Lingxi，ZHAXI Ciren，GENG Yupeng，et al.Chemical composition analysis and antibacterial effects of six kinds of plant essential oils in Tibet Armisia［J］.Journal of Fudan University（Natural Science），2010，49（1）：73-80（in Chinese）.

［7］ 張加余，屠鵬飛.天然產(chǎn)物液相色譜-質(zhì)譜-數(shù)據(jù)庫(kù)（LC-MS-DS）的建立與應(yīng)用［J］.藥學(xué)學(xué)報(bào)，2012，47（9）：1 187-1 192.

ZHANG Jiayu，TU Pengfei.The establishment and application of natural product liquid chromatography-mass spectrometry-database（LC-MSDS）［J］.Acta Pharmaceutica Sinica，2012，47 （9）：1 187-1 192（in Chinese）.

［8］ 張加余，姚志容，張凡，等.枸骨葉中3類三萜皂苷類成分的ESI-MC裂解規(guī)律及其快速識(shí)別［J］.藥物分析雜志，2012，32（9）：1 578-1 582.

ZHANG Jiayu，YAO Zhirong，ZHANG Fan，et al.ESI-MC fragmentation patterns and rapid identification three categories triterpenoid saponins in holly leaves［J］.Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis，2012，32（9）：1 578-1 582（in Chinese）.

［9］ 張加余，喬延江，高曉燕，等.清火梔麥片中化學(xué)成分的SPE-HPLC-ESI-MSn快速識(shí)別與鑒定［J］.中國(guó)中藥雜志，2013，38（2）：186-192.

ZHANG Jiayu，QIAO Yanjiang，GAO Xiaoyan，et al.Rapid identification and characterization chemical composition in Qinghuozhimai Tablets using SPE-HPLC-ESI-MSn［J］.China Journal of Chinese Materia Medica，2013，38（2）：186-192 （in Chinese）.

［10］MA S，ZHU M.Recent advances in applications of liquid chromatography-tandem mass spectrometry to the analysis of reactive drug metabolites［J］.Chemico Biological Interactions，2009，179（1）：25-37.

［11］YAN G，SUN H，SUN W，et al.Rapid and global detection and characterization of aconitum alkaloids in Yin Chen Si Ni Tang，a traditional Chinese medical formula，by ultra performance liquid chromatography-high resolution mass spectrometry and automated data analysis［J］.Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis，2010，53（3）：421-431.

［12］GU Z M，WANG L Q，WU J.Mass defect filter-A new tool to expedite screening and de-replication of natural products and generate natural product profiles［J］.The Natural Products Journal，2011，1（2）：135-145.

［13］ULLMANN A，LUDMER Z，SHINNAR R.Phase transition extraction using solvent mixtures with critical point of miscibility［J］.AIChE Journal，1995，41（3）：488-500.

［14］CASTRO A J，STROZYK M，BART H J.Ionic modifiers in phase transition extraction［J］.Chemical Engineering ＆Technology，2008，31 （2）：301-306.

［15］ZHANG J Y，ZHANG Q，LI N，et al.Diagnostic fragment-ion-based and extension strategy coupled to DFIs intensity analysis for identification of chlorogenic acids isomers in Flos Lonicerae Japonicae by HPLC-ESI-MS［J］.Talanta，2013，104（30）：1-9.

［16］LAMB J D，PETERSON R T.Coalescence extraction：A novel，rapid means of performing solvent extractions［J］.Separation Science and Technology，1995，30（17）：3 237-3 244.

［17］PARVEEN I，THREADGILL M D，HAUCK B，et al.Isolation，identification and quantitation of hydroxycinnamic acid conjugates，potential platform chemicals，in the leaves and stems of Miscanthus giganteus using LC-ESI-MSn［J］.Phytochemistry，2011，72（18）：2 376-2 384.

［18］CLIFFORD M N，JOHNSTON K L，KNIGHT S，et al.Hierarchical scheme for LC-MSnidentification of chlorogenic acids［J］.Journal of Agricultural and Food Chemistry，2003，51（10）：2 900-2 911.

［19］CLIFFORD M N，MARKS S，KNIGHT S，et al.Characterization by LC-MSnof four new classes of p-coumaric acid-containing diacyl chlorogenic acids in green coffee beans［J］.Journal of Agricultural and Food Chemistry，2006，54（12）：4 095-4 101.

Rapid Characterization of Chlorogenic Acids Analogues in Artemisia younghusbandii Using HPLC／LTQ-Orbitrap MSnCoupled with MDF Data Mining Technology

ZHANG Jia-yu1，CAI Wei2，LI Yun2，LIU Rong-rong2，WANG Zi-jian1，LIU Ying1，LU Jian-qiu1，QIAO Yan-jiang2
（1.Center of Scientific Experiment，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing100029，China；
2.School of Chinese Pharmacy，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing100102，China）

The method of HPLC／LTQ-Orbitrap MSnwas established to achieve the fullscan spectrum of Artemisia younghusbandii extract.Coupling with mass defect filtering （MDF）data mining technique，the template molecules and the filtering windows of chlorogenic acids analogues（CGAs）were determined，which contained rapidly mine the information.The result shows that twenty kinds of CGAs are identified fromArtemisia

younghusbandii by analyzing the fragmentation pathways and diagnostic product ions of CGAs.Among them，nine kinds of components are monoester CGAs，such as 3-CQA，5-CQA，1-CQA，4-CQA，1-pCoQA，5-pCoQA，1-FQA，5-FQA and 4-FQA；eleven kinds of components are diester CGAs，such as 1-CQA glycoside，5-CQA glycoside，3，4-DiCQA，4，5-DiCQA，3，5-DiCQA，CFQA-1，CFQA-2，CFQA-3，CFQA-4，CFQA-5and CFQA-6.The method can be adopted to identify the CGAs contained in the complex system of traditional Chinese medicines（TCMs）.Moreover，it can be further applied to identify the analogues of the chemical constituents from TCMs.

mass defect filtering；Artemisia younghusbandii；chlorogenic acids analogues；characterization

O657.63

A

1004-2997（2015）04-0321-07

10.7538／zpxb.youxian.2015.0017

2014-07-30

；

2014-10-21

張加余（1981—），男（漢族），山東人，助理研究員，從事藥物分析研究。E-mail：zhangjiayu0615＠163.com通信作者：盧建秋（1963—），男（漢族），黑龍江人，研究員，從事藥物分析。E-mail：lujq＠vip.sina.com喬延江（1947—），男（漢族），山東人，教授，從事中藥化學(xué)研究。E-mail：yanjiangqiao＠sina.com

時(shí)間：2015-05-26；

網(wǎng)絡(luò)出版地址：http：∥www.cnki.net／kcms／detail／11.2979.TH.20150526.0856.001.html