張彥，陸偉

Ki67在HBV相關肝細胞癌病理組織中的表達及其臨床意義

張彥1，陸偉2△

目的探討細胞核增殖抗原Ki67在乙型肝炎病毒（HBV）相關肝細胞癌（HCC）病理組織中的表達及其與臨床病理指標的關聯(lián)性。方法134例HBV相關HCC患者按Ki67陽性細胞所占百分數(shù)（Ki67指數(shù)）分為Ki67指數(shù)＜10%（陰性）組30例和≥10%（陽性）組104例。采用免疫組化法檢測Ki67在正常及不同分化程度肝組織中的表達情況。分別計算2組Ki67指數(shù)與年齡、性別、磷脂酰肌醇蛋白3（GPC3）、組織學分級、BCLC分期、門脈轉移、甲胎蛋白（AFP）、肝功能Child-pugh分級資料的相關性。依Ki67指數(shù)區(qū)間設定評分以評估Ki67評分與BCLC分級的關系。結果（1）SP染色結果顯示，Ki67在正常肝組織、高分化、中分化及低分化組織中的表達強度呈增加趨勢。（2）陽性組Ki67指數(shù)與BCLC分期、門脈轉移、組織學分級、GPC3、AFP及Child-pugh分級呈正相關（P＜0.05）；陰性組Ki67指數(shù)與各臨床指標均無相關性（P＞0.05）。（3）Ki67評分隨著BCLC分級的進展呈增加趨勢。結論陽性組Ki67指數(shù)聯(lián)合患者的GPC3、組織學分級、BCLC分期、門脈轉移、AFP、肝功能Child-pugh分級可評估患者HCC的嚴重程度，其表達水平有望成為HBV相關HCC早期診斷、晚期預后評估的重要指標。

肝腫瘤；肝炎，乙型，慢性；診斷；預后；早期診斷；Ki67

研究認為，乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染是原發(fā)性肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）發(fā)生的重要危險因素，而細胞核增殖抗原Ki67是一種與細胞增生相關的標志物，在細胞周期的G1、S和G2期達到高峰，而在G0期缺失，在許多腫瘤中高表達［1］。Ki67標志物的變化能可靠地反映正常和病變組織的增殖活性，對腫瘤的復發(fā)和轉移有預測作用［2］。本研究旨在通過對HBV相關HCC患者癌組織的臨床病理資料進行分析，探討Ki67與其他臨床病理指標的關聯(lián)性和臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2011年6月—2013年6月于天津市第二人民醫(yī)院明確診斷為HBV相關HCC的患者134例。所有診斷均符合中華人民共和國2010年慢性乙型肝炎防治指南及2011年版原發(fā)性肝癌診療規(guī)范的診斷標準。排除肝膽管細胞癌、術前行經(jīng)導管動脈化學栓塞（TACE）手術、病歷或檢查資料不全、因腫瘤位置問題無法留肝臟病理者。

1.2 免疫組織化學檢測所有肝組織穿刺標本均經(jīng)4%甲醛固定＞6 h，經(jīng)脫水、石蠟包埋，常規(guī)切片，片厚4μm。采用免疫組化SP法染色，DAB顯色。鼠抗人Ki67單克隆抗體，采用ABC法、DAB顯色，蘇木精復染。常規(guī)光鏡檢測Ki67的表達情況。以細胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，隨機讀取10個高倍鏡視野，共計數(shù)1 000個細胞，以Ki67陽性細胞所占百分數(shù)計作Ki67指數(shù)，以評估Ki67的表達水平。陽性細胞數(shù)＜10%設定為陰性組，≥10%為陽性組。2組年齡、性別、巴塞羅那（BCLC）分期、門脈轉移、組織學分級、磷脂酰肌醇蛋白3（GPC3）、甲胎蛋白（AFP）及肝功能Child-pugh分級差異均無統(tǒng)計學意義（均P＞0.05），見表1。

Tab.1Comparison of basic information between patient in both groups表1 2組患者基本資料比較

1.3 研究指標（1）Ki67在正常肝組織及不同組織學分級的HBV相關HCC組織中的形態(tài)學表達情況。（2）研究2組與年齡、性別、BCLC分期、門脈轉移、組織學分級、GPC3、AFP、肝功能Child-pugh分級的相關性。（3）將Ki67指數(shù)＜10%為1分、10%～25%為2分、26%～50%為3分、＞50%為4分。評估Ki67在HBV相關HCC中隨BCLC分級的變化情況。

1.4 統(tǒng)計學方法采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計學分析。符合正態(tài)分布的計量資料以表示。計數(shù)資料組間比較采用卡方（χ2）檢驗。相關性采用Spearman等級相關分析，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 Ki67在正常肝組織及不同組織學分級癌組織中的表達隨著患者組織學分級的進展，患者的Ki67表達強度呈增加趨勢，見圖1。

2.2 Ki67指數(shù)與臨床病理特征的關系陽性組Ki67指數(shù)與BCLC分期、門脈轉移、組織學分級、GPC3、AFP及Child-pugh分級呈正相關（P＜0.05）；陰性組Ki67指數(shù)與各臨床指標均無相關性（P＞0.05），見表2。

Tab.2Relationship between Ki67 index and clinicopathological factors in HBV related HCC表2 Ki67指數(shù)與臨床病理參數(shù)的關系

Tab.2Relationship between Ki67 index and clinicopathological factors in HBV related HCC表2 Ki67指數(shù)與臨床病理參數(shù)的關系

＊P＜0.05

陽性組臨床指標年齡（歲）≤60＞60性別陰性組n1Ki67指數(shù)（%）rsn2Ki67指數(shù)（%）rs48 56 35.89±23.18 35.90±26.66-0.02924 6 6.43±2.14 6.13±2.900.749男女84 20 36.13±25.23 34.92±23.070.01824 6 5.92±2.65 7.67±1.370.132 BCLC分期A B 20 48 40 16 30.94±23.70 39.39±23.72 44.70±28.53 0.418＊0.150 C+D門脈轉移6.20±2.59 7.67±1.37 4.50±2.89無有90 14 33.73±23.83 51.88±26.390.576＊6 4 2 6.21±2.62 7.00±0.000.679組織學分級高中低14 76 14 29.08±26.74 36.35±23.23 42.67±29.59 8 2 1 0 0.529＊16 4 6.40±1.43 5.62±3.05 8.50±0.58 0.123 GPC3陽性陰性AFP陽性陰性Child-pugh分級A非A 74 30 38.23±26.08 30.40±20.500.383＊20 10 6.00±2.83 6.80±1.810.424 72 32 39.46±26.64 25.41±13.360.370＊16 14 6.10±2.92 6.60±1.580.619 80 24 36.82±25.29 32.94±23.060.289＊22 8 6.64±2.06 5.25±3.500.189

2.3 Ki67評分與BCLC分期的關系134例患者的BCLC A、B、C+D的Ki67評分分別為（2.50±1.00）、（7.64±1.12）及（44.44±21.2）分，隨著BCLC分級的進展，其Ki67評分也呈增加趨勢。

3 討論

Ki67是一種存在于增殖細胞核基質內(nèi)、與細胞增殖相關的核蛋白，能反映腫瘤細胞的增殖活性，是判斷腫瘤侵襲力和腫瘤預后的有效指標［3］。Ki67的檢測已被廣泛用于反映腫瘤細胞增殖速度和預測腫瘤預后［4］。Ki67指數(shù)高往往反映腫瘤的侵襲性更強、無瘤生存率低、復發(fā)率高［5］。

本研究結果顯示，Ki67的染色強度隨著患者組織學分級的進展呈增加趨勢，證實了Ki67的嗜腫瘤性，提示隨著Ki67指數(shù)表達程度的增強，疾病的惡性程度增高，腫瘤進展速度增快，預后變差。

本研究顯示，Ki67指數(shù)與肝癌的組織分級呈正相關，Ki67在高分化肝癌組織中的表達強度低于低分化肝癌組織，表明肝癌組織的分化程度越低則其增殖活性越強，惡性程度越高，疾病的預后情況越差。孫宇等［6］對胰腺癌的研究中亦認為，Ki67的表達強度與胰腺癌TNM分期、淋巴結轉移及腫瘤分化程度相關。王寶娜等［7］研究顯示，乳腺癌的組織學分級與Ki67指數(shù)呈正相關性，提示Ki67指數(shù)可作為判斷組織學分級的指標。

Ki67指數(shù)陽性組的表達情況與患者的BCLC分期、組織學分級均相關，表明患者行手術或消融治療前的臨床情況與患者術中病理結果對患者疾病的進展及預后的評估具有一致性，這與羅旻等［8］的研究結果不盡相同，考慮原因為本研究選取的研究對象均為HBV相關HCC患者，而羅旻等研究的48例中HBV相關HCC患者為34例。何澤寶等［9］研究顯示，HCC患者AFP升高與HBV感染關系密切。常家聰?shù)龋?0］研究顯示，HCC患者AFP的產(chǎn)生與HBV感染直接相關。本研究亦顯示，陽性組AFP水平與患者Ki67指數(shù)呈正相關，而陰性組AFP水平與Ki67指數(shù)無相關性，結合上述文獻，筆者認為10%作為分界點對HBV相關HCC患者的惡性程度評估和預后評判具有一定臨床參考價值。

BCLC分期是對腫瘤狀態(tài)及肝功能狀態(tài)的綜合評價，相較于之前的TNM分期其優(yōu)勢在于：BCLC分期的同時即確定了臨床治療方案，并且涵蓋了早中晚期，彌補了TNM分期系統(tǒng)只適用于晚期HCC的不足。故本研究把所有HBV相關HCC患者按BCLC分期標準分為A、B、C+D 3組，把Ki67指數(shù)劃分為4個評分，可以看出隨BCLC分期進展，其Ki67評分明顯增加，且Ki67指數(shù)隨HCC組織學分級亦呈增加趨勢，均提示著疾病預后不良。此與肝癌的組織學分級及門脈轉移情況結論一致。

綜上所述，綜合評價HBV相關HCC患者的肝功能Child-pugh分級、BCLC分期、門脈轉移情況、AFP水平，結合其治療時取的肝癌病理組織中GPC3水平、組織學分級及Ki67指數(shù)，可評價其目前腫瘤的惡性程度并預測其腫瘤的發(fā)展速度及預后，對于Ki67指數(shù)明顯增高的患者應進行更為密切的監(jiān)測和更為積極的治療，以期延長患者的生存時間。

（圖1見插頁）

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（2014-12-02收稿2015-01-06修回）

（本文編輯陸榮展）

Expression of Ki67 and its clinic significance in HBV related hepatocellular carcinoma

ZHANG Yan1，LU Wei2△
1 Tianjin Medical University，Tianjin 300070，China；2 The Second People′s Hospital△

ObjectiveTo investigate the expression of proliferating cell nuclear antigen（Ki67）in hepatitis B virus（HBV）related hepatocellular carcinoma（HCC）tissue and its correlation with clinicopathological parameters of HBV related HCC.MethodsHBV-related HCC patients（n=134）were divided according to Ki67 index（the percentage of Ki67-posi?tive cells）into Ki67 index＜10%group（negative group，n=30）and Ki67 index≥10%group（positive group，n=104）.The cor?relation of Ki67 index with age，gender，glypican 3（GPC3），histological grade，BCLC（Barcelona Clinic liver cancer）staging，portal involvement，AFP（AFP），liver function related child-pugh classification data were calculated in both groups.Ki67 in?dex is set according to the interval score to assess the relationship between Ki67 score and BCLC classification.Results（1）SP staining showed，Ki67 present a trend of increase from normal liver tissue to well-differentiated to medium differentiat?ed tissue to poorly differentiated tissues intensity.（2）In positive group，Ki67 index was correlated with BCLC staging，portal metastasis，histological grade，GPC3 and AFP（P＜0.05）；By contrast，in negative group，Ki67 index was not correlated with any clinical parameter（P＞0.05）.（3）Ki67 score increases with the progress of BCLC classification.ConclusionIn Ki67 positive group，Ki67 index combined with GPC3，histological grade，BCLC staging，portal involvement，AFP and liver func?tion child-pugh classification can assess the severity of the patients with HCC，which is expected to become an important in?dicator for the HBV-related HCC early diagnosis.

liver neoplasms；hepatitis B，chronic；diagnosis；prognosis；early diagnosis；Ki67

R735.7

A

10.11958/j.issn.0253-9896.2015.08.027

1天津醫(yī)科大學研究生院（郵編300070）；2天津市第二人民醫(yī)院

張彥（1983），女，住院醫(yī)師，學士學位，主要從事肝炎后肝硬化、肝癌診斷及治療的研究

△通訊作者E-mail：luwei1966@126.com