楊仁黨 李龍 楊飛

(華南理工大學(xué) 制漿造紙工程國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州510640)

生物質(zhì)基燃料乙醇、平臺(tái)化合物已成為當(dāng)前可再生資源領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)［1-2］. 自上世紀(jì)中后期起，包括巴西、美國(guó)在內(nèi)的一些國(guó)家開(kāi)始大規(guī)模選用玉米和木薯作為原料進(jìn)行能源乙醇的生產(chǎn)和應(yīng)用，但由此帶來(lái)的與人類(lèi)爭(zhēng)糧的困惑使人們將目光轉(zhuǎn)向儲(chǔ)量豐富的木本生物質(zhì)原料. 天然木質(zhì)纖維原料結(jié)構(gòu)的致密性較高，藥液滲透性困難.傳統(tǒng)造紙的酸堿法蒸煮污染較大，而蒸汽爆破等機(jī)械法耗能和設(shè)備投入大［3-4］.離子液體是一種低蒸氣壓、高穩(wěn)定性的功能性溶劑，多種烷基取代類(lèi)的咪唑離子液體(如［Bmim］Cl)可溶解提純后的微晶纖維素［5-6］. 在木本生物質(zhì)的預(yù)處理中，由于纖維素被半纖維素和木素包裹，預(yù)處理的目的并不在于大量破壞和降解纖維素，而在于適當(dāng)破壞纖維素氫鍵網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)和結(jié)晶結(jié)構(gòu)，改善木材疏松性和藥液可及度，為提高后續(xù)酶解效率奠定基礎(chǔ)［7］.

離子液體的黏度相對(duì)傳統(tǒng)有機(jī)溶劑通常會(huì)高出1 ～3個(gè)數(shù)量級(jí)，嚴(yán)重限制其直接作為反應(yīng)溶劑的應(yīng)用，較低的流動(dòng)性也會(huì)限制它對(duì)木本生物質(zhì)的滲透效果［8-9］.微乳液是由水相、油相、表面活性劑構(gòu)成的具有超小粒徑、高流動(dòng)性、高增溶性的優(yōu)秀載體［10］.同傳統(tǒng)微乳液一樣，當(dāng)表面活性劑濃度超過(guò)臨界膠束濃度(CMC)后，原本不互溶的親水/親油離子液體可以以吸附或包裹的方式形成膠束，實(shí)現(xiàn)對(duì)彼此的增溶作用，使渾濁的體系變得均一透明［11］.在此過(guò)程中，助表面活性劑可降低界面張力和體系黏度，改變油相的極性及調(diào)節(jié)界面膜的親水疏水平衡值(HLB)，與表面活性劑共同構(gòu)筑微乳液的界面膜［12］.因此用離子液體取代微乳液中的油水相，可結(jié)合微乳液的增溶性和離子液體的功能性，獲得具有超強(qiáng)滲透能力和超低界面張力的離子液體微乳體系. 該體系在藥物傳輸領(lǐng)域研究較多，如周剛［13］研究了離子液體微乳液反應(yīng)體系中淀粉微球載藥的方式和應(yīng)用，為淀粉納米微球在藥物傳輸系統(tǒng)中的應(yīng)用提供了理論指導(dǎo)，但在生物質(zhì)預(yù)處理領(lǐng)域的應(yīng)用較為鮮見(jiàn)，離子液體微乳液可以推動(dòng)離子液體滲透到生物質(zhì)結(jié)構(gòu)內(nèi)核中，甚至破壞纖維素結(jié)晶區(qū)結(jié)構(gòu)，有利于后續(xù)的酶解反應(yīng)以及化學(xué)處理，文中也擬為此提供一種新的方法和思路［14］.在實(shí)驗(yàn)室條件下調(diào)制出雙離子液體微乳體系(DILMS)［8，15］，進(jìn)一步結(jié)合乙二胺的堿性預(yù)浸漬作用，通過(guò)復(fù)合浸漬處理的方式考察它對(duì)木本生物質(zhì)——桉樹(shù)闊葉材酶解效率的影響，有助于提高生物質(zhì)的綜合應(yīng)用效率，降低生產(chǎn)成本.

1 實(shí)驗(yàn)材料和方法

1.1 主要原料及設(shè)備

桉木:產(chǎn)自廣西，樹(shù)齡5年;學(xué)名為桉樹(shù)，屬小葉桉;取自東莞某木片場(chǎng)，選取木質(zhì)部均一、無(wú)腐木片，粉碎、篩選后進(jìn)行密封存放.離子液體［BMIM］Cl和［BMIM］PF6，純度≥99%;正丁醇、十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)、無(wú)水乙二胺，均為分析純;乙二胺溶液(乙二胺/去離子水體積比為1∶5);纖維素酶:Sigma C-1184，濾紙酶活6 047 U/g;檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液(pH=4.8)，實(shí)驗(yàn)室自制.

主要設(shè)備:DF-101S 型集熱式恒溫加熱磁力攪拌器(鄭州宏朗儀器設(shè)備有限公司);SHA-B 型恒溫水浴震蕩器(上海上天精密儀器有限公司);DL-6000B 型高速離心機(jī)(新芝生物科技有限公司);S-3700N型掃描電子顯微鏡(日本日立公司);Dionex ICS3000 型離子色譜儀(美國(guó)戴安公司);高壓反應(yīng)釜(上海巖征儀器公司的YZPR 系列微型反應(yīng)釜:容積10 ～500 mL;最大壓力10 MPa;最高溫度300 ℃).

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 DILMS 的調(diào)制

將［BMIM］Cl(親水相)、［BMIM］PF6(親油相)、CTAB(表面活性劑)、正丁醇(助表面活性劑)按適當(dāng)比例混合于封口燒瓶中，在50 ℃條件下恒溫水浴攪拌直至體系呈無(wú)色透明狀，隨后在10000 r/min 條件下高速離心15min，體系不分層則表明DILMS 調(diào)制成功.

1.2.2 預(yù)浸漬處理

桉木材預(yù)浸漬處理流程見(jiàn)圖1. 預(yù)浸漬處理結(jié)束后，通過(guò)高速離心法分離浸漬液和殘?jiān)? 移取2 mL 上層預(yù)浸漬液于錐形瓶中，加入20 mL 4%的H2SO4，密閉后置于高壓反應(yīng)釜中并在121 ℃溫度下反應(yīng)1 h［16］.

圖1 預(yù)浸漬處理流程示意圖Fig.1 Schematic diagram of preimpregnation process

水洗滌方法:取浸漬后經(jīng)離心分離(3000 r/min，5 min)的底部物料，加蒸餾水20 mL，用玻璃棒快速攪拌約30 s，而后再次離心分離;然后將上述過(guò)程重復(fù)3 次，完成水洗滌過(guò)程.

1.2.3 酶解及酸解處理

分別對(duì)預(yù)浸漬前后的桉木粉進(jìn)行酶解和酸解處理.酶解條件為:纖維素酶用量200 U/g;固液比1∶30;酶解溫度(50 ±1)℃;反應(yīng)時(shí)間24 h;搖振頻率120 次/min. 酸解方法參照美國(guó)NREL 實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)方法［17］.

1.2.4 葡萄糖的離子色譜測(cè)定

上述處理過(guò)程(1.2.2 和1.2.3 節(jié))結(jié)束后，將產(chǎn)物在10000r/min 條件下離心分離15 min，稀釋后用0.22 μm 濾膜過(guò)濾并進(jìn)行離子色譜分析.離子色譜法葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算方法參照式(1):

式中:Y 為峰面積;x 為葡萄糖質(zhì)量濃度.

2 結(jié)果與討論

2.1 DILMS 配比對(duì)酶解效率的影響

微乳體系的穩(wěn)定性主要受兩個(gè)因素的影響:一是是否有適量的親水性物質(zhì)對(duì)親油性物質(zhì)進(jìn)行有效包裹;二是是否有適量的乳化劑構(gòu)成混合界面膜，保證親水親油組分的有序分布.故在此提出兩個(gè)參數(shù):親水親油比K 和乳化比M.

K=m(［BMIM］Cl)/m(［BMIM］PF6)，代表親水相物質(zhì)和親油相物質(zhì)的質(zhì)量比，可以表現(xiàn)連續(xù)相對(duì)分散相的包覆比例和難易程度，在此取1.5 和3.0 進(jìn)行對(duì)比.M =m(CTAB +正丁醇)/ m(［BMIM］Cl +［BMIM］PF6)，為乳化劑和非乳化劑的質(zhì)量比，可以體現(xiàn)出混合界面膜的比例和構(gòu)成情況，在此取0.6和1.0 進(jìn)行對(duì)比.

如表1 所示，實(shí)驗(yàn)組1、4 的得率明顯高于實(shí)驗(yàn)組2、3，這是因?yàn)楹笳哌^(guò)多的乳化劑會(huì)使混合界面膜過(guò)厚甚至剩余，因微乳體系是個(gè)動(dòng)態(tài)平衡體系，各相在不停的流動(dòng)交換過(guò)程中實(shí)現(xiàn)平衡與穩(wěn)定，而過(guò)厚甚至過(guò)剩的界面膜會(huì)減弱這種流動(dòng)平衡性和自由性，不利于微乳體系的動(dòng)態(tài)穩(wěn)定，故預(yù)浸漬效果不佳.然而在乳化劑含量較高的情況下，親水親油值較低可形成雙連續(xù)體系，此體系對(duì)乳化劑的需求量較高，較少造成混合界面膜的剩余，故相對(duì)于親水親油型的體系更加穩(wěn)定，預(yù)浸漬效果相對(duì)更好，也正如實(shí)驗(yàn)組2 和3 的結(jié)果所示.

表1 離子液體微乳液體系配比對(duì)葡萄糖酶解得率的影響1)Table 1 Effect of components ratio of DILMS on yield of enzymatic hydrolysis of glucose

對(duì)于M=0.6 的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組(1 和4)，K =3.0實(shí)驗(yàn)組的預(yù)浸漬效果明顯高于K =1.5 的實(shí)驗(yàn)組.其原因是在乳化劑含量較低的條件下，須有足夠的親水性［BMIM］Cl 對(duì)親油性［BMIM］PF6進(jìn)行球形包覆，否則兩者將呈現(xiàn)管狀的相互包覆形態(tài)，微乳液類(lèi)型也就由親水包親油型微乳液轉(zhuǎn)化為雙連續(xù)型微乳液.從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看來(lái)，雙連續(xù)型微乳液對(duì)生物質(zhì)的預(yù)浸漬效果并不如前者，為保證良好的預(yù)浸漬效果，應(yīng)保證親水性［BMIM］Cl 相對(duì)于親油性［BMIM］PF6在質(zhì)量方面的絕對(duì)優(yōu)勢(shì).同時(shí)，進(jìn)一步提高乳化劑比例后(實(shí)驗(yàn)組5、6)，葡萄糖酶解得率在M =1.0 的基礎(chǔ)上明顯降低，表明過(guò)高含量的乳化劑會(huì)進(jìn)一步增加界面膜厚度，阻礙有效成分的自由流動(dòng)和反應(yīng)，并不利于酶解效率的提升.同時(shí)，若乳化劑含量過(guò)低(實(shí)驗(yàn)組7、8)，則界面膜形成不完整，一來(lái)體系穩(wěn)定性降低，二來(lái)不利于酶解效率的提升.所以在保證界面膜有效形成的基礎(chǔ)上，乳化劑應(yīng)處于合適的低含量狀態(tài).經(jīng)過(guò)綜合比較，在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中采用K =3.0，M=0.6的離子液體微乳體系.

結(jié)合前期實(shí)驗(yàn)得到的結(jié)論:CTAB/正丁醇質(zhì)量比為1∶18 可以使DILMS 獲得良好的電導(dǎo)率水平，對(duì)改善［BMIM］Cl 中Cl-的自由流動(dòng)和氫鍵結(jié)合能力有利［7］. 綜上所述，DILMS 各組分的理想質(zhì)量比確定為m(CTAB)∶m(正丁醇)∶m(［BMIM］Cl)∶m(［BMIM］PF6)=1∶18∶24∶8，既滿足m(CTAB)∶m(正丁醇)=1∶18，又滿足K=3.0，M=0.6，后續(xù)實(shí)驗(yàn)的DILMS 均以此配比調(diào)制.

2.2 預(yù)浸漬方法對(duì)酶解效率的影響

如表2 所示，不同預(yù)浸漬方法對(duì)酶解效率的影響相差較大.未經(jīng)任何預(yù)浸漬的木粉葡萄糖酶解得率僅為35.8%，單純乙二胺處理的木粉葡萄糖酶解得率相對(duì)空白組提升46%，改善作用有限，單純［BMIM］Cl的預(yù)浸漬組木粉葡萄糖酶解得率相對(duì)空白組提升78%，而采用DILMS 可將葡萄糖酶解得率提高至69.3%，相對(duì)于［BMIM］Cl 實(shí)驗(yàn)組還高出6%，而且相同固液比條件下DILMS 中［BMIM］Cl 的用量比單純使用［BMIM］Cl 節(jié)省了51%，這也正是選用DILMS 替代單純離子液體進(jìn)行預(yù)浸漬的原因所在.

表2 預(yù)浸漬方案對(duì)酶解過(guò)程中葡萄糖酶解得率的影響1)Table 2 Effect of preimpregnation methods on yield of enzymatic hydrolysis of glucose

通過(guò)對(duì)一步法和兩步法的實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行對(duì)比發(fā)現(xiàn)，兩步法具有更好的預(yù)浸漬效果.這是由于在一步法中，雖然將乙二胺直接混入DILMS 后體系仍呈現(xiàn)透明狀態(tài)，但是過(guò)于復(fù)雜的成分會(huì)降低油水相之間混合界面膜的穩(wěn)定性，尤其是加熱條件下的均一穩(wěn)定性會(huì)受到影響，致使預(yù)浸漬對(duì)酶解效率的提升作用不如兩步法.

2.3 DILMS 預(yù)浸漬溫度對(duì)后續(xù)酶解效率的影響

溫度過(guò)高或過(guò)低都會(huì)明顯影響預(yù)浸漬的效果.如圖2 所示，未經(jīng)任何預(yù)浸漬(空白組)的木粉葡萄糖酶解得率僅為35.8%，而經(jīng)過(guò)預(yù)浸漬的木粉葡萄糖酶解得率均升至65%以上，最高得率(83.2%)出現(xiàn)在預(yù)浸漬溫度100 ℃的實(shí)驗(yàn)組，相比未處理原料組上升至其2.32 倍. 從葡萄糖酸解得率的角度分析，未處理木粉的葡萄糖酸解得率為44.7%，而酶解殘?jiān)械钠咸烟撬峤獾寐首疃嗫山抵?5.7%，此結(jié)果亦從側(cè)面反映出預(yù)浸漬過(guò)程對(duì)底物酶解效率的大幅提升作用.

圖2 預(yù)浸漬溫度對(duì)酶解過(guò)程中葡萄糖得率的影響Fig.2 Effect of preimpregnation temperature on yield of glucose

從70 ℃到100 ℃，不斷上升的葡萄糖酶解得率表明預(yù)浸漬效果逐步攀升. 這是由于隨著溫度的升高，離子液體的黏度和流動(dòng)性得到有效改善，可以更加完美地融入微乳液體系，［BMIM］Cl 作為連續(xù)相通過(guò)乳化劑構(gòu)成的混合界面膜可以更有效對(duì)［BMIM］PF6實(shí)現(xiàn)包覆;同時(shí)，高溫下較低的黏度有利于［BMIM］Cl 游離出的Cl-自由移動(dòng)并與纖維素上氫鍵的H+進(jìn)行結(jié)合，破壞原始?xì)滏I網(wǎng)絡(luò)，使生物質(zhì)原料結(jié)構(gòu)疏松. 但由于助表面活性劑正丁醇的沸點(diǎn)為108 ℃，所以當(dāng)溫度接近甚至超過(guò)此臨界值時(shí)，正丁醇變得不穩(wěn)定，從而影響微乳體系中混合膜的構(gòu)成，微乳體系穩(wěn)定性下降并開(kāi)始失效，預(yù)浸漬效果隨之降低.尤其在120 ℃時(shí)，作用效果僅和70 ℃時(shí)相當(dāng).

圖3 中，葡萄糖酶解得率V酶和葡萄糖酸解得率V酸的計(jì)算公式如下:

2.4 預(yù)浸漬時(shí)間和底物目數(shù)對(duì)后續(xù)酶解效率的影響

如表3 所示，實(shí)驗(yàn)組1 至4 的變量是DILMS 預(yù)浸漬時(shí)間，此因素對(duì)酶解效率的影響較大，說(shuō)明對(duì)纖維素間氫鍵網(wǎng)絡(luò)的有效破壞可以更直接地改善底物的疏松和多孔性，對(duì)葡萄糖酶解得率提升具有最為直接的影響，但將實(shí)驗(yàn)組3 與4 相比，其他預(yù)浸漬條件一致，只是DILMS 處理時(shí)間延長(zhǎng)了1 h，葡萄糖酶解得率僅從83.2%上升到83.5%，表明單純延長(zhǎng)DILMS 處理時(shí)間所能達(dá)到的提升效果飽和，所以DILMS 處理時(shí)間確定為8 h 比較合適;實(shí)驗(yàn)組2、5 探討的因素是木粉的目數(shù)，雖然粒徑減小對(duì)葡萄糖酶解得率的上升具有幫助，但效果有限，得率僅從80.3%上升到80.9%，所以40 目已經(jīng)可以滿足預(yù)浸漬效果的需求.因此，后續(xù)實(shí)驗(yàn)中的預(yù)浸漬條件統(tǒng)一為:乙二胺預(yù)浸漬(3 h，70 ℃)，DILMS 浸漬(8 h，100 ℃)，原料目數(shù)40，固液比1∶30.

表3 100 ℃條件下其他影響因素對(duì)葡萄糖酶解得率的影響1)Table 3 Effect of other factors on yield of enzymatic hydrolysis of glucose at 100 ℃

2.5 掃描電鏡分析

圖3 給出了預(yù)浸漬前后桉木粉微觀結(jié)構(gòu)的電鏡圖.由圖3(a)可以觀察到，木粉表面結(jié)構(gòu)平滑有序，紋理清晰，孔洞封閉且邊緣周長(zhǎng)較小，整體木質(zhì)結(jié)構(gòu)致密;而由圖3(b)可以發(fā)現(xiàn)，平滑的表面結(jié)構(gòu)被破壞，凸起和褶皺明顯增多，孔洞結(jié)構(gòu)被溶穿且周長(zhǎng)增大，比表面積增大且木質(zhì)結(jié)構(gòu)致密性整體降低，預(yù)處理前后結(jié)構(gòu)的改變對(duì)于后續(xù)酶解過(guò)程中酶液滲透性和反應(yīng)性有重要的作用.通過(guò)比較，能更加直觀地看到預(yù)浸漬過(guò)程對(duì)木質(zhì)微觀結(jié)構(gòu)的改善程度，客觀地解釋預(yù)浸漬后酶解效率升高的原因.

圖3 預(yù)浸漬前后桉木粉微觀結(jié)構(gòu)電鏡圖Fig.3 SEM pictures of Eucalyptus microstructure before and after preimpregnation

2.6 預(yù)浸漬前后原料中單糖含量分析

如表4 所示，未經(jīng)預(yù)浸漬的原料酸解后，葡萄糖在總還原糖中的比重為64.3%，其次為木糖，其他單糖含量較低.由于葡萄糖的主要來(lái)源為纖維素，在預(yù)浸漬后，葡萄糖含量百分比上升至96.34%，這表明纖維素結(jié)構(gòu)在預(yù)浸漬過(guò)程中受到了很好的保護(hù).半纖維素的大量去除導(dǎo)致其他單糖含量急劇減少，其中損失程度最大的為木糖，其次為半乳糖. 結(jié)合表4的數(shù)據(jù)，進(jìn)一步觀察和對(duì)比圖4 中葡萄糖含量百分比的增加程度，可以更加直觀地認(rèn)識(shí)到乙二胺/DILMS 處理方法確實(shí)達(dá)到了預(yù)期效果.

表4 預(yù)浸漬前后原料酸解過(guò)程中出峰面積百分比Table 4 Peak area preimpregnation of eucalyptus acidolysis process before and after preimpregnation

2.7 浸漬液中單糖成分分析

由表5 可知，乙二胺和DILMS 預(yù)浸漬過(guò)程中都會(huì)有少量單糖脫落進(jìn)入浸漬液中，由于阿拉伯糖、甘露糖含量過(guò)少，通過(guò)離子色譜儀無(wú)法檢測(cè)出.經(jīng)過(guò)乙二胺預(yù)浸漬中，半纖維素的主要單糖成分木糖脫除量最大，可達(dá)到0.082 g(以1.000 g 絕干原料為基準(zhǔn)，余同);由于纖維素被半纖維素和木素包裹，所以被破壞程度有限，損失的葡萄糖含量?jī)H有0.022 g.DILMS 預(yù)浸漬過(guò)程對(duì)各種單糖的溶出作用有限，在離子液體對(duì)纖維素中氫鍵網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的適當(dāng)破壞作用下，約有0.02 g 的葡萄糖損失量.因此可以說(shuō)，DILMS 處理只是改善了木粉微觀結(jié)構(gòu)的致密性，但對(duì)于纖維素和半纖維素的破壞作用極為有限.

以1.000 g 絕干原料為例進(jìn)行定量計(jì)算，發(fā)現(xiàn):兩步預(yù)浸漬后的浸漬液中葡萄糖共計(jì)0. 041 g(0.022 g+0.019 g)(見(jiàn)表5)，由于預(yù)浸漬前底物的葡萄糖總量為0. 447 g，酶解得率為35. 8% (見(jiàn)圖2)，所以酶解1.000g原料實(shí)際獲得葡萄糖產(chǎn)量為0.160 g;經(jīng)過(guò)預(yù)浸漬，雖然損失了少量葡萄糖而只剩下0.406(0.447 -0.041)g，但酶解效率大幅上升至83.2%(見(jiàn)圖2)，最終獲得葡萄糖0.337 g，所以實(shí)際的葡萄糖產(chǎn)量提高了1.11 倍.

圖4 預(yù)浸漬前后原料酸解過(guò)程中的出峰時(shí)間與面積Fig.4 Appearance time and peak area of eucalyptus acidolysis process before and after preimpregnation

表5 乙二胺預(yù)浸漬+DILMS 處理后預(yù)浸漬液成分分析1)Table 5 Analysis of preimpregnation liquids after quadrol impregnation+ DILMS treatment

3 結(jié)論

文中對(duì)DILMS 配比優(yōu)化實(shí)驗(yàn)、預(yù)浸漬工藝優(yōu)化實(shí)驗(yàn)及底物殘?jiān)?浸漬液)中單糖含量檢測(cè)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了分析，主要結(jié)論如下:

(1)DILMS 配比優(yōu)化實(shí)驗(yàn)表明:高效穩(wěn)定的微乳體系需要有足夠的親水性［BMIM］Cl 對(duì)疏水性［BMIM］PF6進(jìn)行有效包覆，并且由乳化劑構(gòu)成的復(fù)合界面膜厚度要適中，以此維持體系的動(dòng)態(tài)平衡，實(shí)現(xiàn)良好的滲透和預(yù)浸漬效果.

(2)預(yù)浸漬工藝優(yōu)化實(shí)驗(yàn)表明:堿加強(qiáng)的離子液體微乳液對(duì)桉木的浸漬效果明顯優(yōu)于純離子液體［BMIM］Cl，且在(乙二胺預(yù)浸漬(70 ℃，3 h)、DILMS預(yù)浸漬(100 ℃，8 h)、固液比1∶30、目數(shù)40)的條件下可對(duì)闊葉材桉木的酶解效率起到大幅的促進(jìn)效果.預(yù)浸漬前后微觀結(jié)構(gòu)的SEM 圖對(duì)比表明:預(yù)浸漬后褶皺明顯增多，比表面積有效增大.

(3)底物殘?jiān)敖n液中單糖含量分析實(shí)驗(yàn)表明:經(jīng)過(guò)有效的乙二胺/DILMS 預(yù)浸漬，底物中葡萄糖占總還原糖的百分比由64.33%上升至96.34%，表明纖維素結(jié)構(gòu)獲得了有效保護(hù);酶解得率由35.8%上升到83.2%，單位質(zhì)量底物的葡萄糖產(chǎn)量提高了1.11倍，兩步預(yù)浸漬法達(dá)到了良好的預(yù)期效果.

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