林　茜，高營營，韓曉華，張　露，黃天琨，林貴美

（1.廣西植物組培苗有限公司，廣西 南寧 530007；2.廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院 生物技術(shù)研究所，廣西 南寧 530007）

四數(shù)九里香組織培養(yǎng)（簡報）

林茜1，2，高營營1，韓曉華1，張露1，黃天琨1，林貴美1

（1.廣西植物組培苗有限公司，廣西 南寧 530007；2.廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院 生物技術(shù)研究所，廣西 南寧 530007）

以四數(shù)九里香新生帶腋芽莖段為外植體，研究取材時期、6-BA濃度及生長素種類對外植體生長的影響，探討不同濃度活性炭對外植體褐化的影響。結(jié)果表明，四數(shù)九里香組織培養(yǎng)適宜的取材時期為4月；外植體腋芽誘導(dǎo)率在6-BA濃度為2.5 mg·L-1時表現(xiàn)較高；IBA是較適宜外植體生長的生長素；活性炭濃度為1.5 g·L-1可有效減輕外植體褐化；組織培養(yǎng)適宜的啟動培養(yǎng)基為MS + 6-BA 2.5 mg·L-1+ IBA 0.1 mg·L-1+ GA30.3 mg·L-1+ 活性炭1.5 g·L-1。

四數(shù)九里香；組織培養(yǎng)；生長素；活性炭；褐化

1　材料

四數(shù)九里香Murraya tetramera新生帶腋芽莖段。

2　方法

2.1取材時期分別于2013年3、4、5、8、11月中旬進(jìn)行取材試驗。

2.2外植體消毒于連續(xù)晴朗的午后，取生長健壯植株的新生莖段，分割成約2 cm大小片段，以75%酒精表面消毒5 s后轉(zhuǎn)入10%次氯酸鈉溶液消毒2 min，無菌水沖洗3次，最后置于0.1%氯化汞中消毒6 min，無菌水沖洗4次，在無菌濾紙上將莖段表面的水分吸干，將莖段切成1 cm左右以備接種。

2.3腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)外植體初代接種于MS + 6-BA 0.5 mg·L-1（單位下同） + IBA 0.1+活性炭0.5 g·L-1+ 蔗糖30 g·L-1培養(yǎng)基。本實驗所有培養(yǎng)基均含蔗糖30 g·L-1，光照時間14 h·d-1，培養(yǎng)15 d左右。

2.46-BA濃度梯度試驗將誘導(dǎo)良好、長勢一致的帶腋芽莖段分別轉(zhuǎn)入附加不同濃度6-BA （0.5、1.5、2.5、3.5）的MS + IBA 0.1 + GA30.3 + 活性炭0.5 g·L-1培養(yǎng)基中。每濃度試驗20瓶，培養(yǎng)30 d。

2.5生長素種類試驗挑選長勢較好材料分別轉(zhuǎn)入下面培養(yǎng)基：MS + 6-BA 2.5 + GA30.3 + NAA 0.1 +活性炭0.5 g·L-1；MS + 6-BA 2.5 + GA30.3 + IBA 0.1 + 活性炭0.5 g·L-1。每試驗20瓶，培養(yǎng)30 d。

2.6不同濃度活性炭試驗以MS + 6-BA 2.5 + IBA 0.1為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度活性炭（0.5、1.0、1.5 g·L-1）進(jìn)行抑制褐化試驗，每濃度試驗20瓶，培養(yǎng)15 d，觀察不同濃度活性炭對外植體褐化的影響。

3　結(jié)果與分析

3.1不同取材時期對外植體生長的影響不同月份取材在相同的處理方法及培養(yǎng)條件下培養(yǎng)7 d左右，大部分嫩莖段的腋芽誘導(dǎo)效果良好，誘導(dǎo)率達(dá)90%以上，但之后生長速度出現(xiàn)較明顯差異（表1）。4月處理的外植體腋芽誘導(dǎo)后生長速度較快，培養(yǎng)30 d外植體新生部分長達(dá)2.5 cm，生長較好。其他月份取材的外植體生長較差，30 d時新生長度僅為1.0 cm左右。說明4月天氣回暖后，室外植株生理狀態(tài)最好，取材處理后，在培養(yǎng)基上恢復(fù)生長速度快，長勢好。因此，四數(shù)九里香組織培養(yǎng)較適宜的取材時間為4月。

表1　不同取材時期對外植體生長的影響Table 1　Effects of different sampling time on the explants growth

3.2不同 6-BA濃度對外植體生長的影響由表 2可知，外植體在含不同濃度 6-BA的培養(yǎng)基上腋芽均表現(xiàn)伸長生長趨勢，30 d時含2.5 mg·L-16-BA培養(yǎng)基上外植體的新生嫩莖段伸長最明顯，新生部分最長達(dá)4.0 cm，增殖系數(shù)約為2.5，6-BA濃度低于或高于該濃度，伸長長度均劣之。

表2　不同6-BA濃度對外植體生長的影響Table 2　Effects of different 6-BA concentration on the explants growth

3.3不同生長素種類對外植體生長的影響試驗表明，外植體在兩類培養(yǎng)基上的生長速度有差別，在含有生長素IBA培養(yǎng)基上的出芽數(shù)與芽生長長度均優(yōu)于含生長素 NAA的培養(yǎng)基（表3）。說明IBA是四數(shù)九里香組織培養(yǎng)較適宜的生長素。

3.4不同濃度活性炭（AC）對外植體褐化的影響試驗發(fā)現(xiàn)，在四數(shù)九里香組織培養(yǎng)的各個階段均有褐化現(xiàn)象發(fā)生，嚴(yán)重阻礙外植體正常生長。通過活性炭濃度梯度試驗發(fā)現(xiàn)，當(dāng)活性炭濃度為0.5或1.0 g·L-1時對褐化的發(fā)生幾乎無抑制作用，而當(dāng)AC濃度調(diào)高到1.5 g·L-1時，對褐化抑制作用較明顯（表4）。

表3　不同生長素種類對外植體生長的影響Table 3　Effect of different types of auxins on the explants growth

4　結(jié)語

四數(shù)九里香Murraya tetramera為蕓香科九里香屬植物，落葉小喬木，葉有濃郁香氣。生長于廣西百色、德保和云南東部硯山、富寧、文山、西疇，常見于石灰?guī)r山地山頂陽光充足地帶［1］。以根、葉入藥，辛、微苦、性微溫，可鮮用或陰干備用，具祛風(fēng)解表、行氣止痛、活血散淤、抗炎、鎮(zhèn)痛、解熱之功效，用于治療感冒發(fā)熱、支氣管炎、哮喘、胃痛、風(fēng)濕痹痛、跌打淤腫、皮膚搔癢、毒蛇咬傷、濕疹、瘧疾等癥［2—3］。但多年來廣西石灰?guī)r山地的物種、群體及其棲息環(huán)境遭人為或自然的破壞，導(dǎo)致資源萎縮、物種瀕危，甚至呈滅絕趨勢。通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)對廣西石灰?guī)r特有珍稀藥用植物進(jìn)行組培快繁，不僅可達(dá)到良種保存的目的，且可確保藥源的供應(yīng)量。近年來，對四數(shù)九里香進(jìn)行組織培養(yǎng)的研究鮮見報道。本文根據(jù)木本植物及蕓香科植物組織培養(yǎng)的特點，借鑒相關(guān)成功培養(yǎng)基配方，對四數(shù)九里香組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方進(jìn)行針對性研究［4—8］。結(jié)果表明，4月為四數(shù)九里香外植體最佳取材時期，組織培養(yǎng)適宜培養(yǎng)基為MS + 6-BA 2.5 + IBA 0.1 + GA30.3 + 蔗糖30 g·L-1+ 活性炭1.5 g·L-1。

表4　不同活性炭濃度對外植體褐化的影響Table 4　Effect of different AC concentration on the browning of explants

［1］ Neeraj S， Natarajan S， Rao C N R. A novel open-framework zinc phosphate with intersecting helical channels［J］. Chemical Communications， 1999（2）： 165—166.

［2］ García-Serrano L A， Rey F， Pérez-Pariente J， Sastre E. Thermal analysis of large pore microporous zincophosphates［J］. Thermochimica Acta， 2001，376（2）： 155—162.

［3］ 全國中草藥匯編編寫組. 全國中草藥匯編（上冊）（第2版）［M］. 北京： 人民衛(wèi)生出版社， 1996： 10.

［4］ 王港，李周岐，劉曉敏，侯娜，劉淑明. 花椒組織培養(yǎng)再生體系的建立［J］. 西北林學(xué)院學(xué)報， 2008，23（3）： 117—119.

［5］ 黃靖. 金桔無性快繁體系建立的研究［J］. 江西農(nóng)業(yè)學(xué)報， 2010，22（7）： 60—62.

［6］ 徐涌，孫駿威，陳珍. 不同植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)處理對吳茱萸組織培養(yǎng)的影響［J］. 浙江農(nóng)林大學(xué)學(xué)報， 2011，28（3）： 500—504.

［7］ 唐征，荊贊革，張小玲，羅天寬，劉慶，朱世揚(yáng). 吳茱萸組織培養(yǎng)和快速繁育技術(shù)研究［J］. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2012，40（36）：17475—17477.

［8］ 時群. 兩面針組培技術(shù)試驗［J］. 林業(yè)科技開發(fā)， 2013，27（6）： 117—120.

Tissue Culture of Murraya tetramera

LIN Qian1，2， GAO Ying-ying1， HAN Xiao-hua1， ZHANG Lu1， HUANG Tian-kun1， LIN Gui-mei1
（1.Guangxi Plant Tissue Culture Co. Ltd.， Nanning， 530007， Guangxi China； 2.Biotechnology Institute of Guangxi Academy of Agricultural Sciences， Nanning 530007， Guangxi China）

Stems with newborn axillary bud used as explant， sampling times， concentrations of 6-BA，type of auxins were researched as important factor affecting growth of explants. Also， the effect of activated carbon on browning of explants was studied. Appropriate sampling time for tissue culture of Murraya tetramera was April， appropriate 6-BA concentration for the shoots induction from explants was 2.5 mg·L-1， appropriate auxin was IBA and 1.5 g·L-1activated carbon could reduce the browning of explants. The results showed that the initial media was MS + 6-BA 2.5 mg·L-1+ IBA 0.1 mg·L-1+ GA30.3 mg·L-1+ AC 1.5 g·L-1in tissue culture of M. tetramera.

Murraya tetramera； tissue culture； auxin； activated carbon； browning

10.3969/j.issn.1009-7791.2015.01.014

Q943

B

1009-7791（2015）01-0070-02

2015-01-05

林茜，碩士，研究實習(xí)員，從事植物組織培養(yǎng)研究。E-mail： lgm998@126.com