任曉蘭

[摘要] 目的 對(duì)小兒輪狀病毒感染的免疫應(yīng)答進(jìn)行研究。方法 以該院2014年1月—2015年3月收治的62例輪狀病毒感染患兒作為觀察組，以同期在該院進(jìn)行健康體檢的60例小兒作為對(duì)照組，對(duì)比兩組研究對(duì)象的抗原及糞便標(biāo)本與血漿中的特異性抗體，并檢測(cè)輪狀病毒基因類型。結(jié)果 觀察組62例患兒的糞標(biāo)本中的輪狀病毒分型P型中Ps型所占比例最高，為82.26%，G分型中以G3所占比例最高，為79.03%，P<0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。觀察組患兒的CD19+細(xì)胞比例明顯高于對(duì)照組，CD4+比例明顯低于對(duì)照組，P<0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同對(duì)照組相比，觀察組患兒的外周血單個(gè)核細(xì)胞IFN-γ mRNA表達(dá)水平在發(fā)病3 d內(nèi)出現(xiàn)明顯升高，P<0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。IL-12p40 mRNA在疾病構(gòu)成中均明顯高于對(duì)照組，P<0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論 輪狀病毒感染患兒的免疫應(yīng)答中以特異性體液免疫為主，特別是黏膜免疫顯著性增強(qiáng)。

[關(guān)鍵詞] 輪狀病毒感染；免疫應(yīng)答；兒童

[中圖分類號(hào)] R725.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2015）08（c）-0103-03

Study of Immune Response to Rotavirus Infections in Children

REN Xiao-lan

Department of Pediatrics， Qingdao Third Peoples Hospital， Qingdao， Shandong Province， 266000 China

[Abstract] Objective To study the immune response to rotavirus infections in Children. Methods 62 children with rotavirus infections admitted to our hospital and 60 other children who taken physical examination here between January 2014 and March 2015 were assigned to observation group and control group respectively to compare the antigen and the specific antibodies in feces and plasma between the two groups and determine the gene types of rotavirus. Results In the observation group， in P and G type rotavirus from feces specimens， P8-type and G3-type were most prominent， accounting for 82.26% and 79.03%， respectively， and the differences were statistically significant， P<0.05. The proportion of CD19+ Cells were higher and that of CD4+ lower in the observation group than in the control group， and the differences were statistically significant， P<0.05. Compared with the control group， IFN-γ， and mRNA expression in peripheral blood mononuclear cells in the observation group increased significantly within 3 days after onset， and the difference was statistically significant，P<0.05. IL-12p40 and mRNA in the diseases constitution were higher in the observation group than in the control group with statistical differences， P<0.05. Conclusion Immune response to rotavirus infections in children is mainly specific humoral immune response， especially that of mucosal immune.

[Key words] Rotavirus； Immune response； Children

輪狀病毒為導(dǎo)致兒童嚴(yán)重脫水腹瀉的重要病原體，全世界每年有100萬(wàn)左右的患兒死于該病[1]。因?yàn)檩啝畈《緯?huì)首先損害腸道黏膜上皮細(xì)胞，免疫反應(yīng)主要表現(xiàn)為典型黏膜免疫反應(yīng)特點(diǎn)[2-3]。為了對(duì)小兒輪狀病毒感染的免疫應(yīng)答特點(diǎn)進(jìn)行分析探討，筆者對(duì)該院62例患兒的臨床資料進(jìn)行回顧性分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2014年1月—2015年3月期間，該院共收治62例輪狀病毒感染患兒，其中男38例，女24例；年齡為4～30個(gè)月，平均年齡為（16.4±2.8）個(gè)月；每日排便次數(shù)為1～24次，平均（8.4±1.7）次。以同期在該院進(jìn)行健康體檢的60例小兒作為對(duì)照組，其中男32例，女28例，年齡為6～38個(gè)月，平均（18.6±4.7）個(gè)月。兩組研究對(duì)象的性別、年齡等基本資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P>0.05，有可比性。

1.2 檢驗(yàn)方法

①外周單個(gè)核細(xì)胞分離：在采集肝素抗凝血之后，加入等量的Ficoll分離液，離心20 min，取上層血漿存入-70℃冰箱中保存。將中間層細(xì)胞吸出，以氯化鈉溶液（0.9%）進(jìn)行沖洗，離心10分鐘，留細(xì)胞沉淀。

②淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)：采集50 μL肝素抗凝血，加入熒光標(biāo)記體，然后混合均勻，于室溫下避光30 min，加入450 μL溶血?jiǎng)?，混合均勻之后，靜止20 min，進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

③細(xì)胞因子基因表達(dá)檢測(cè)：將TRIzol1mL加入外周血單個(gè)細(xì)胞沉淀，于室溫條件下保存5 min，加入氯仿200 μL，劇烈搖晃20 s，靜止5 min。取上層置入Eppendorf管，再加入異丙醇500 μL，混合均勻，于室溫條件下靜止10 min，離心10 min。取上清液，以乙醇（70%）洗一次，離心5 min，在沉淀晾干后，加入3 μLDEPC水，檢測(cè)260 nm與280 nmA值。

1.3 觀察指標(biāo)

以SPSS 22.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析，對(duì)計(jì)數(shù)資料以χ2檢驗(yàn)，以例數(shù)百分比的形式表示，對(duì)計(jì)量資料以t檢驗(yàn)，以（x±s）的形式表示，當(dāng)P<0.05時(shí)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 輪狀病毒基因型檢測(cè)結(jié)果

觀察組62例患兒的糞標(biāo)本中的輪狀病毒分型P型中P8型所占比例最高，為82.26%（51/62）（χ2=7.742，8.105，P<0.05），G分型中以G3所占比例最高，為79.03%（49/62），（χ2=7.085，11.383，P<0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

表1 觀察組患兒糞便的輪狀病毒基因分型（n=62）

2.2 兩組研究對(duì)象的淋巴細(xì)胞亞群測(cè)定結(jié)果

觀察組患兒的CD19+細(xì)胞比例明顯高于對(duì)照組，CD4+比例明顯低于對(duì)照組，P<0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2。

2.3 外周血單個(gè)細(xì)胞因子mRNA表達(dá)變化

同對(duì)照組相比，觀察組患兒的外周血單個(gè)核細(xì)胞IFN-γ mRNA表達(dá)水平在發(fā)病3 d內(nèi)明顯升高（χ2=10.994，P<0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩組研究對(duì)象的IL-2、IL-4及IL-10水平無(wú)顯著性變化（t=0.014，0.106，0.004，P>0.05），見表3。

3 討論

觀察組患兒的輪狀病毒的主要結(jié)構(gòu)蛋白為VP4與VP7，其中VP7為外殼糖蛋白，是主要中和抗原[4]。按照VP7差異可將輪狀病毒分為14個(gè)不同G型，臨床常見性嬰幼兒輪狀病毒有G1、G2、G3及G4[5]。該研究中，觀察組患兒的G分型主要有G3，比例約占79.03%。VP4為另一種糖蛋白，可誘導(dǎo)中和抗體，常見類型主要有P4、P6及P8型[6]。該研究中，P分型主要以P8為主，比例約為82.26%。

該研究中，觀察組患兒在感染輪狀病毒之后，外周血的主要淋巴細(xì)胞比例出現(xiàn)明顯變化，主要表現(xiàn)為CD19+細(xì)胞比例為（30.6±7.5）%，符合相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[9]，且明顯高于對(duì)照組的（23.3±7.4）（P<0.05）。原因?yàn)?，患兒在感染輪狀病毒之后，免疫系統(tǒng)會(huì)經(jīng)識(shí)別病原體來(lái)激活免疫反應(yīng)，如產(chǎn)生特異抗體、激活T細(xì)胞等[7]。因?yàn)檩啝畈《緯?huì)首先對(duì)腸道黏膜的上皮細(xì)胞造成侵犯，產(chǎn)生IgG、IgA及IgM三類抗體。這三類抗體抑制用作輪狀病毒免疫應(yīng)答的主要評(píng)價(jià)指標(biāo)，其中產(chǎn)生IgA抗體是重要特點(diǎn)[8]。

血漿與糞便標(biāo)本中的輪狀病毒特異性IgA抗體水平同患兒病情程度有密切關(guān)系。每天排便次數(shù)5次以上、腹瀉時(shí)間超過(guò)6 d的患兒的糞便標(biāo)本中的IgA抗體的滴度更高。臨床上關(guān)于輪狀病毒感染患兒的臨床特點(diǎn)及特異性抗體的報(bào)道比較少，且因人種、地區(qū)、血樣采集時(shí)間等不同，結(jié)論不同。研究指出[10]，腹瀉嚴(yán)重患兒的腸道上皮細(xì)胞內(nèi)可能會(huì)有更多的輪狀病毒增殖及感染，并且會(huì)對(duì)局部淋巴細(xì)胞造成刺激，引發(fā)免疫反應(yīng)，進(jìn)而引發(fā)更多IgA抗體。小兒的幼齡階段會(huì)感染多次輪狀病毒，前次嚴(yán)重腹瀉者，可有效降低下一次病情程度。

綜上所述，小兒輪狀病毒感染病情嚴(yán)重者的IgA水平更高，能夠?qū)純涸俅胃腥据啝畈《具M(jìn)行有效抵抗。

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（收稿日期：2015-05-15）