潘秀芳，黎 濱，卓 芬

（海南省農(nóng)墾三亞醫(yī)院 干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室，海南 三亞572000）

臨床上一般采用生理鹽水法對(duì)陰道分泌物進(jìn)行涂片檢驗(yàn)，但這種方法檢出率低，因此，有學(xué)者主張用檢出率較高且同樣具有便捷、簡(jiǎn)單的革蘭染色法代替生理鹽水法進(jìn)行涂片染色。本文針對(duì)革蘭染色法和生理鹽水法用于陰道分泌物涂片檢驗(yàn)的效果進(jìn)行了觀察和分析。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2012年6月至2013年12月我院婦科門(mén)診患者的陰道分泌物1000例作為研究資料，患者的年齡為19－61歲，平均年齡為（35.2±13.6）歲。

1.2 檢測(cè)方法

將采集的陰道分泌物標(biāo)本分為兩份后直接涂在玻片上，其中，一份滴入2滴濃度為0.9%生理鹽水，與分泌物混合均勻后在高倍鏡下檢查，另外一份待干后進(jìn)行革蘭染色，染液主要成份為結(jié)晶紫、碘液、脫色液、沙黃。在顯微鏡下先用低倍鏡觀察是否存在滴蟲(chóng)，然后用油鏡觀察滴蟲(chóng)的鞭毛及胞體特征，同時(shí)對(duì)分泌物中的霉菌、腎型相對(duì)雙球菌、纖毛菌、加德納球桿菌等致病菌進(jìn)行檢查。鏡檢由兩位專業(yè)臨床檢驗(yàn)醫(yī)師分別進(jìn)行，結(jié)果不一致時(shí)，請(qǐng)另一位高年資檢驗(yàn)醫(yī)師最終確定結(jié)果。

1.3 數(shù)據(jù)處理方法

本組所有數(shù)據(jù)均應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件包建立數(shù)據(jù)庫(kù)并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩種方法對(duì)病原微生物檢出率的比較應(yīng)用卡方檢驗(yàn)進(jìn)行處理，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種涂片檢驗(yàn)方法對(duì)各類病原微生物檢出率的比較

應(yīng)用革蘭染色法進(jìn)行涂片檢驗(yàn)，共有392例標(biāo)本檢出病原微生物，總檢出率為39.2%，其中混合感染標(biāo)本為294例，檢出率為29.4%；應(yīng)用生理鹽水法進(jìn)行涂片檢驗(yàn)，共有138例標(biāo)本檢出病原微生物，總檢出率為13.8%，共中混合感染標(biāo)本為106例，檢出率為10.6%。應(yīng)用革蘭染色法進(jìn)行涂片檢驗(yàn)的總檢出率、混合感染檢出率及各類主要病原體的檢出率均高于應(yīng)用生理鹽水法，兩者之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝14.904－294.894，P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩種涂片檢驗(yàn)方法對(duì)各類病原微生物檢出率的比較（n，%）

2.2 兩種涂片檢驗(yàn)方法對(duì)不同清潔度陰道分泌物中病原微生物檢出率的比較

在清潔度為Ⅰ－Ⅱ度的陰道分泌物中，應(yīng)用革蘭染色法和生理鹽水法進(jìn)行涂片檢驗(yàn)的檢出率分別為21.5%（100/466）和10.7%（50/466），在清潔度為Ⅲ－Ⅳ度的陰道分泌物中，應(yīng)用革蘭染色法和生理鹽水法進(jìn)行涂片檢驗(yàn)的檢出率分別為54.7%（292/534）和16.5%（88/534），兩種涂片檢驗(yàn)方法的檢出率的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝19.864、180.079，P＜0.05），見(jiàn)表2。在應(yīng)用革蘭染色法進(jìn)行涂片檢驗(yàn)檢出病原微生物的陰道分泌物標(biāo)本中，清潔度為Ⅲ－Ⅳ度的標(biāo)本占74.5%（292/392），清潔度為Ⅰ－Ⅱ度的標(biāo)本占25.5%（100/392），在應(yīng)用生理鹽水法進(jìn)行涂片檢驗(yàn)檢出病原微生物的陰道分泌物標(biāo)本中，清潔度為Ⅲ－Ⅳ度的標(biāo)本占63.8%（88/138），清潔度為Ⅰ－Ⅱ度的標(biāo)本占36.2%（50/138），兩者構(gòu)成比的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝5.782，P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 兩種涂片檢驗(yàn)方法對(duì)不同清潔度陰道分泌物中病原微生物檢出率的比較

3 討論

細(xì)菌、霉菌、滴蟲(chóng)等所致陰道炎的陰道分泌物性狀和臨床表現(xiàn)基本相同，因此，在進(jìn)行病原體診斷時(shí)必須要進(jìn)行陰道分泌物的涂片檢查，這樣可直接反映宮頸及陰道的感染程度及病原微生物的種類，從而達(dá)到減少抗生素濫用、正確指導(dǎo)用藥、提高臨床診斷效率的目的［1］。生理鹽水法是臨床上常規(guī)的陰道分泌物涂片方法，具有操作簡(jiǎn)單的優(yōu)點(diǎn)，而在實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中，陰道分泌物標(biāo)本中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)陰道上皮細(xì)胞核及細(xì)胞膜卷曲、有形成分重疊掩蓋、涂片背景不潔等現(xiàn)象，這使得生理鹽水法對(duì)念珠菌的檢出率偏低，在纖毛菌、淋球菌、加特納球桿菌和其它條件致病菌的檢驗(yàn)中具有更大的局限性［2］。而且雖然生理鹽水法可觀察到陰道分泌物中是否存在滴蟲(chóng)和霉菌，但滴蟲(chóng)一般只在25－42℃的環(huán)境下活動(dòng)，而霉菌則一般依附于上皮細(xì)胞之上，因此，送檢溫度、送檢時(shí)間、標(biāo)本成份等因素均可影響生理鹽水法對(duì)霉菌和滴蟲(chóng)的檢出率［3］。革蘭染色法則可在一份標(biāo)本中同時(shí)進(jìn)行多項(xiàng)目檢查，在一張涂片中可同時(shí)作滴蟲(chóng)、霉菌、白細(xì)胞，陰道清潔度等多項(xiàng)檢查，特別是對(duì)淋球菌，加德納菌和其他條件致病菌的檢測(cè)效率要高于生理鹽水法［4］，而且同樣具有成本低、操作簡(jiǎn)易、時(shí)間快速的特點(diǎn)。革蘭染色法對(duì)于滴蟲(chóng)的檢查不受環(huán)境溫度的限制，而霉菌經(jīng)革蘭氏染色后的形態(tài)也十分清楚，不僅避免了標(biāo)本污染而且對(duì)于有價(jià)值的標(biāo)本還可以進(jìn)行保存和學(xué)術(shù)交流，這也克服了生理鹽水法無(wú)法保存標(biāo)本、需要重復(fù)取樣的劣勢(shì)［5］，因此，在婦科陰道分泌物的涂片檢驗(yàn)中，革蘭染色法的顯著作用已被廣大臨床工作者所認(rèn)可和重視。值得指出的是，生理鹽水法同樣具有操作簡(jiǎn)便、檢出結(jié)果迅速的優(yōu)點(diǎn)，因而在臨床上還具有一定的應(yīng)用價(jià)值，近年來(lái)，檢驗(yàn)醫(yī)師開(kāi)始嘗試應(yīng)用多功能染色液快速染色等新型方法來(lái)提高檢驗(yàn)效率，而且也有研究證實(shí)了應(yīng)用這種快速染色方法檢查陰道分泌物的常規(guī)檢測(cè)準(zhǔn)確率高且檢測(cè)項(xiàng)目多，有望取代生理鹽水法［6］，但其可靠性仍然有待于進(jìn)一步的研究予以證實(shí)。此外，10%KOH法對(duì)于檢驗(yàn)假絲酵母菌病等陰道真菌感染也有較高的應(yīng)用價(jià)值，一般來(lái)說(shuō)，其檢驗(yàn)效率要高于革蘭染色和生理鹽水法，但是也有的研究證實(shí)，真菌培養(yǎng)法、革蘭染色法、10%KOH法在檢驗(yàn)陰道真菌感染學(xué)方面的差異較?。?］，這一結(jié)果也需要大量的臨床研究予以討論和證實(shí)。總之，臨床檢驗(yàn)醫(yī)師應(yīng)根據(jù)檢驗(yàn)需求合理選用檢驗(yàn)方法，以求達(dá)到提高檢驗(yàn)效率、及時(shí)辨明致病病原體的目的。

本研究結(jié)果顯示，應(yīng)用革蘭染色法進(jìn)行涂片檢驗(yàn)的總檢出率、混合感染檢出率及各類主要病原微生物的檢出率均顯著高于應(yīng)用生理鹽水法進(jìn)行涂片檢驗(yàn)（χ2＝14.904－294.894，P＜0.05），這說(shuō)明應(yīng)用革蘭染色法進(jìn)行涂片檢驗(yàn)在陰道分泌物各類病原微生物檢測(cè)中的效率顯著高于應(yīng)用生理鹽水法，值得注意的是兩種方法均檢出了一定數(shù)量的混合感染標(biāo)本，其中雙重感染的標(biāo)本數(shù)量較多，此外還有一部分標(biāo)本為三重感染、四重感染，這提示了在進(jìn)行臨床檢查時(shí)要對(duì)標(biāo)本中的病原微生物進(jìn)行認(rèn)真核，以減少漏報(bào)現(xiàn)象，確保檢查結(jié)果的準(zhǔn)確性對(duì)于指導(dǎo)臨床醫(yī)生用藥、提高抗感染藥物使用效率具有十分重要的意義；在不同清潔度陰道分泌物中，應(yīng)用革蘭染色法進(jìn)行涂片檢驗(yàn)的檢出率均顯著高于應(yīng)用生理鹽水法（χ2＝19.864、180.079，P＜0.05），而且在應(yīng)用革蘭染色法進(jìn)行涂片檢驗(yàn)檢出病原微生物的陰道分泌物標(biāo)本中，清潔度為Ⅲ－Ⅳ度的標(biāo)本比例較高（χ2＝5.782，P＜0.05），說(shuō)明應(yīng)用革蘭染色法進(jìn)行涂片檢驗(yàn)在不同清潔度的陰道分泌物中的檢測(cè)效率均較高，特別是在清潔度較差的標(biāo)本中病原微生物的檢出比例較高。在臨床上，不僅要注重針對(duì)清潔度為Ⅲ－Ⅳ度的不正常陰道分泌物的檢測(cè)，而且也要提高對(duì)清潔度為Ⅰ度的正常陰道分泌物中病原體的檢出率，避免漏檢的出現(xiàn)，值得提出的是，在本研究的樣本中，有242例清潔度為Ⅲ－Ⅳ度的陰道分泌物標(biāo)本中未檢出病原微生物，這部分患者可能為非特異性陰道炎，對(duì)于此類患者，臨床醫(yī)生應(yīng)給予高度的重視，應(yīng)考慮從糖尿病、糞瘺、尿瘺等長(zhǎng)期刺激方面查找病因，并繼續(xù)進(jìn)行針對(duì)支原體、衣原體、人乳頭瘤病毒等特殊病原微生物的檢測(cè)，以提高治療的效率，并加強(qiáng)對(duì)該類患者的相關(guān)婦科衛(wèi)生教育。

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