鄧茂林 柯貴寶 胡小麗 駱?lè)届o 向 謙 蒲 紅

慢性乙型肝炎是全世界主要的公共衛(wèi)生問(wèn)題之一，目前全世界約有3.5 億人感染慢性乙型肝炎病毒，感染乙型肝炎病毒(HBV)的人群中有10%～20%將發(fā)展成肝硬化。在亞洲國(guó)家，慢性乙型肝炎是肝硬化的主要病因，發(fā)生肝硬化后患者5 年生存率約為55% ～84%［1］。研究顯示，宿主免疫應(yīng)答對(duì)乙型肝炎肝硬化患者的疾病進(jìn)展具有重要作用［2，3］，IL-23/IL-17軸參與了多種自身免疫性疾病和慢性炎癥的發(fā)病過(guò)程［4，5］。故本研究對(duì)乙型肝炎肝硬化患者血清中IL-17、IL-23 及Th17 細(xì)胞的變化和作用進(jìn)行闡述，以了解這些細(xì)胞、細(xì)胞因子在乙型肝炎肝硬化過(guò)程中可能的作用，以期對(duì)防治乙型肝炎肝硬化的進(jìn)展提供新認(rèn)識(shí)。

1 資料與方法

1.1 一般資料收集2012 年1 月至2013 年12 月本院消化內(nèi)科118 例肝病患者，其中慢性乙型肝炎40例，其中男性24 例，女性16 例，平均年齡(44.26±4.35)歲;乙型肝炎肝硬化代償期38 例，男性25 例，女性13 例，平均年齡(47.14±4.78)歲;乙型肝炎肝硬化失代償期40 例，男性27 例，女性13 例，平均年齡(52.39±5.64)歲。所有入選患者簽署知情同意書(shū)，診斷標(biāo)準(zhǔn)符合2010 年慢性乙型肝炎防治指南［6］。正常對(duì)照組10 例，系本院健康體檢者。所有入選對(duì)象均排除有已知代謝性或遺傳肝病、肥胖或自身免疫性肝炎、膽汁淤積性肝病，并排除甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、人體免疫缺陷病毒等病毒重疊感染，以及近3 個(gè)月內(nèi)均未經(jīng)免疫調(diào)節(jié)劑及抗病毒治療、未接受長(zhǎng)時(shí)間保肝治療。

1.2 研究方法

1.2.1 標(biāo)本采集和主要試劑 抽取受試者清晨空腹時(shí)靜脈血4 mL，離心后取上清液，置－80℃冰箱保存待測(cè)。ELISA 試劑盒購(gòu)自美國(guó)RD 公司。

1.2.2 血清IL-17 和IL-23 檢測(cè) 應(yīng)用IL-17 和IL-23 ELISA 試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，操作嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，酶標(biāo)儀(MK3，美國(guó)Thermo 公司)測(cè)定450 nm 處的OD 值。1.2.3 CRP 的檢測(cè) 采用免疫比濁法，用OLYMPUS2700 全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清標(biāo)本CRP 水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 17.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)用±s 表示，多樣本均值比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK 檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Pearson 相關(guān)分析，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組患者IL-17、IL-23 和CRP 表達(dá)水平比較

①慢性乙型肝炎組、代償期肝硬化組和失代償期肝硬化組血清IL－17、IL-23 和CRP 表達(dá)水平明顯高于正常對(duì)照組(P ＜0.05);②慢性乙型肝炎組、代償期肝硬化組和失代償期肝硬化組之間血清IL-17、IL-23和CRP 表達(dá)水平具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)。詳見(jiàn)表1。

表1 正常對(duì)照組及3 組患者IL-17、IL-23 和CRP 表達(dá)水平比較±s)

表1 正常對(duì)照組及3 組患者IL-17、IL-23 和CRP 表達(dá)水平比較±s)

注:與正常對(duì)照組比較，*P ＜0.05;與慢性乙型肝炎組比較，#P ＜0.05;與代償期肝硬化組比較，＆P ＜0.05

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2.2 相關(guān)性分析入選患者血清IL-17 與IL-23、CRP呈正相關(guān)(P ＜0.05)，詳見(jiàn)表2。

表2 慢性乙型肝炎組、乙型肝炎肝硬化組IL-17與IL-23、CRP 水平的相關(guān)性

3 討論

IL-17 是一種促炎癥細(xì)胞因子，由特殊的輔助型CD4+T 細(xì)胞產(chǎn)生，定義為T(mén)h17 細(xì)胞。血清中的IL-17從一定程度上反映了Th17 細(xì)胞的數(shù)量與功能情況［7－9］。Sun 等［10］研究表明，乙型肝炎肝硬化患者肝內(nèi)Th17 細(xì)胞增加，可促進(jìn)肝星狀細(xì)胞的活化而導(dǎo)致疾病進(jìn)展。慢性乙型肝炎患者肝內(nèi)浸潤(rùn)的Th17 細(xì)胞一方面通過(guò)分泌IL-17 招募炎性細(xì)胞到達(dá)肝臟，另一方面直接激活肝內(nèi)天然免疫細(xì)胞，造成持續(xù)的慢性炎癥［11］。Ye 等［12］研究發(fā)現(xiàn)，IL-17 表達(dá)隨著肝纖維化分級(jí)上升而增多，可能與TGF-β1 在肝纖維化的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起到重要作用有關(guān)。本研究通過(guò)對(duì)慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化患者IL-17 水平的檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn):每一位患者血清中的IL-17 水平遠(yuǎn)高于正常人(P＜0.05)，且與公認(rèn)的反應(yīng)炎癥狀態(tài)的指標(biāo)以及與肝組織的炎性反應(yīng)、壞死程度成正比的CRP 之間有正相關(guān)關(guān)系，提示IL-17 可能參與了乙型肝炎肝硬化的慢性炎癥及肝纖維化過(guò)程。

IL-23 在機(jī)體控制感染和自身免疫反應(yīng)中起重要作用。有文獻(xiàn)報(bào)告，IL-23 可促進(jìn)Th17 細(xì)胞擴(kuò)增和存活，并分泌具有強(qiáng)大的募集和激活嗜中性粒細(xì)胞功能的IL-17，從而發(fā)揮其免疫學(xué)效應(yīng)，在自身免疫性疾病和變態(tài)反應(yīng)性疾病發(fā)病中發(fā)揮作用［13］。IL-23 缺乏不影響Th17 的正常產(chǎn)生，但卻使其不能擴(kuò)展和存活。故IL-23 在Th17 細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)增與維持以及之后參與免疫應(yīng)答的過(guò)程中是必須的。本研究結(jié)果中，慢性乙型肝炎、代償期肝硬化、失代償期肝硬化患者血清IL-23 和IL-17 的水平均呈逐漸升高趨勢(shì)，失代償期肝硬化患者高于代償期肝硬化患者，代償期肝硬化患者高于慢性乙型肝炎患者，3 組間比較存在差異(P ＜0.05)，說(shuō)明IL-23 和IL-17 的表達(dá)水平與乙型肝炎肝硬化疾病進(jìn)展密切相關(guān)，且IL-23 和IL-17 的表達(dá)水平呈正相關(guān)，推測(cè)IL-23 可能作用于分化成熟的Th17 細(xì)胞，促進(jìn)IL-17 表達(dá)水平增高，并可能通過(guò)IL-17 發(fā)揮其功能。

綜上所述，本研究結(jié)果提示IL-17 可能參與了乙型肝炎肝硬化的慢性炎癥和肝纖維化，與肝臟的損傷程度密切相關(guān)。IL-23 可能作用于分化成熟的Th17 細(xì)胞，促進(jìn)IL-17 表達(dá)水平增高，并可能通過(guò)IL-17 發(fā)揮其功能，進(jìn)一步深入研究IL-23 誘導(dǎo)乙型肝炎肝硬化患者產(chǎn)生IL-17 的機(jī)制將有助于為肝臟纖維化和肝硬化后的疾病進(jìn)展提供新的治療靶標(biāo)。

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