陳若平 徐 將 林海燕 鮑溪荷 荊春艷 葉山東

243000安徽省馬鞍山市婦幼保健院內科(林海燕)

糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病(diabetes mellitus，DM)最主要的慢性微血管并發(fā)癥之一，其發(fā)病機制復雜，尚缺乏十分有效的防治措施。隨著近些年氧化應激被證實參與了DN的發(fā)生發(fā)展，抗氧化劑防治DN作用日益受到重視［1］。α-硫辛酸(alpha-lipoic acid，ALA)屬于維生素B類化合物，一些研究提示其對DM腎損害具有一定保護作用［2］。但其確切的機制尚不十分明確。本研究通過比較ALA口服治療6個月前后2型糖尿病(type 2diabetes mellitus，T2DM)患者尿液中尿清蛋白(albumin，Alb)及尿轉化生長因子-β1(transforming growth factor beta-1，TGF-β1)排泄變化，初步探討ALA對T2DM患者腎臟保護作用及部分機制。

1 資料與方法

1.1 一般資料 34例T2DM患者診斷符合1999年WHO公布的T2DM診斷標準，其中男性21例，女性13例，平均年齡(51.50±10.40)歲。所有患者均排除繼發(fā)性DM、其他腎臟疾病、肝膽疾病、尿路感染、惡性腫瘤及酮癥酸中毒等。入組患者近2周均未服用過血管緊張素轉化酶抑制劑、血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑、醛固酮拮抗劑及胰島素增敏劑等。以我院體檢中心健康體檢者為健康對照組，共30例，男性16例，女性14例，平均年齡(51.36±9.69)歲，體檢無 DM，無高血壓病、感染、腫瘤及免疫性疾病，肝腎功能正常。

1.2 研究方法

1.2.1 標本采集和檢測指標 詢問和體檢記錄研究對象的性別、年齡、病程、身高、體質量、收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)，計算體質量指數(shù)(BMI)。所有受試者均隔夜空腹8h以上，次晨靜脈抽血測定空腹血糖(FPG)、糖化血紅蛋白(HbA1C)、血肌酐(Cr)，留取新鮮中段晨尿4mL儲存于－40℃ 冰箱中待測其測尿清蛋白(Alb)、尿TGF-β1和尿Cr;當日另經靜脈抽血測定餐后2h血糖(PPG)。T2DM患者在糖尿病飲食的基礎上，予以口服降糖藥物或胰島素控制血糖，每日監(jiān)測空腹、餐后以及睡前血糖，根據血糖變化調整降糖藥物劑量，將空腹及睡前FPG控制在4.4～9.0mmol/L，PPG＜10mmol/L，并每日口服硫辛酸600mg(煙臺只楚藥業(yè)有限公司)治療6個月后再次采血、留尿標本復查 FPG、PPG、HbA1c、血肌酐、尿 Alb、尿 TGF-β1及尿Cr水平。

1.2.2 檢測方法 尿TGF-β1檢測采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，試劑盒購自美國R＆D公司，按試劑盒說明操作;尿Alb測定采用放射免疫法;血糖檢測用葡萄糖氧化酶法;HbA1c測定采用離子交換層析法;全自動生化分析儀測定血Cr和尿Cr。尿Alb排泄以其與尿Cr比值用Alb/Cr表示，尿 TGF-β1排泄以其與尿Cr比值用TGF-β1/Cr表示，以消除尿液稀釋或濃縮等對結果的影響。

1.3 統(tǒng)計學方法 使用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據處理，試驗數(shù)據以±s表示，T2DM患者組和健康對照組人群之間數(shù)據分析應用獨立樣本t檢驗，ALA治療前后組內差異分析采用配對t檢驗，數(shù)據的相關分析應用直線相關分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 一般資料 在T2DM組(治療前)和健康對照組中，性別、年齡、BMI、血壓、血Cr差異均無統(tǒng)計學意義(P ＞0.05)，T2DM 組 FPG、PPG、HbA1c、尿 Alb/Cr和尿TGF-β1/Cr均明顯高于健康對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。詳見表1。

2.2 ALA 治療前后血糖、尿 Alb/Cr和尿 TGF-β1/Cr比較 T2DM組加用ALA治療6個月后，F(xiàn)PG、PPG和HbA1c較治療前無顯著變化(P＞0.05)，但尿Alb/Cr和尿TGF-β1/Cr均有降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。詳見表2。

2.3 尿 TGF-β1/Cr變化與有關指標的相關性 尿TGF-β1/Cr變化與尿 Alb/Cr 變化(r=0.387，P ＜0.05)呈正相關，與 FPG 變化(r=0.210，P ＞ 0.05)、PPG 變化(r=0.333，P ＞0.05)、HbA1c變化(r=0.058，P ＞0.05)無相關性。

表1 健康對照組與2型DM組一般臨床資料的比較(±s)

表1 健康對照組與2型DM組一般臨床資料的比較(±s)

注:與健康對照組比較，*P＜0.05

項目 健康對照組(n=30)T2DM組(n=34)年齡(歲)51.36±9.6951.50±10.40BMI(kg/m2) 24.00±2.5624.21±2.83SBP(mmHg) 133.88±18.75134.70±23.40DBP(mmHg) 81.98±12.3081.53±13.43FPG(mmol/L) 5.02±0.576.92±1.14*PPG(mmol/L) 6.67±0.678.67±0.81*HbA1c(%) 5.65±0.416.92±0.82*血 Cr(μmol/L)71.93±16.4669.85±13.14

表2 健康對照組與DM組ALA治療前后相關指標比較(±s)

表2 健康對照組與DM組ALA治療前后相關指標比較(±s)

注:與健康對照組比較，*P＜0.05;與ALA治療前比較，#P＜0.05

項目 健康對照(n=30) ALA治療前(n=34) ALA治療后(n=34)FPG(mmol/L) 5.02±0.576.92±1.14*6.97±1.50PPG(mmol/L) 6.67±0.678.67±0.81* 8.89±0.62HbA1c(%) 5.65±0.416.92±0.82* 6.90±0.78尿 Alb/Cr(mg·g－1·Cr－1) 8.97±3.9852.65±29.56* 26.77±21.46#TGF-β1/Cr(ng·g－1·Cr－1) 213.55±133.01949.41±517.185386.51±313.40#

3 討論

尿Alb排泄增加是DN的臨床表現(xiàn)和診斷指標，其本身也是腎臟病變進展和惡化的重要因素，降低尿Alb排泄對延緩DN進展有益［3］。本研究臨床觀察顯示T2DM患者組與正常對照組人群相比，在消除性別、年齡、血壓、BMI等差異前提下，證實尿Alb排泄水平明顯高于健康對照組;T2DM患者口服ALA治療6個月后尿Alb排泄水平較前明顯降低，但血糖水平無明顯變化，提示ALA在不影響血糖水平情況下可部分降低T2DM患者尿Alb排泄，對糖尿病腎臟損害有一定的保護作用。

活檢和免疫熒光證實早期DN動物和患者腎小管、腎小球可檢測到TGF-β1異常高表達，并進行性增高伴有 ECM 成分和腎重量增加［4］。TGF-β1可直接刺激腎小球系膜細胞增生并合成分泌纖連蛋白、層黏蛋白及Ⅳ型膠原成分等多種ECM成分;TGF-β1還可抑制腎臟細胞合成基質金屬酶類、纖溶酶原激活因子等，導致腎臟基質金屬蛋白酶類與其組織抑制劑系統(tǒng)(MMPs/TIMPs)失衡從而使ECM 降解減少［5，6］。

本研究顯示，T2DM患者尿TGF-β1排泄增加與尿Alb排泄變化正相關，糖尿病患者在ALA治療6個月后尿 TGF-β1排泄水平顯著降低，F(xiàn)PG、P2hPG及HbA1c水平無顯著變化，提示ALA降低尿TGF-β1排泄作用不依賴于血糖變化，該作用可能與其腎臟保護有關［7］。ALA對DM腎損害的保護作用確切機制不十分明確，可能是多方面的。高糖狀態(tài)下的氧化應激被認為是DM并發(fā)癥的共同損傷基礎，DN患者腎臟局部氧化和抗氧化平衡失衡，表現(xiàn)為腎臟局部活性氧簇(reactive oxygen species，ROS)異常升高。ALA可通過直接清除自由基和活性氧，螯合銅鐵等金屬離子抑制金屬離子介導催化的自由基產生，減輕脂質過氧化等途徑發(fā)揮抗氧化作用［8］。體外實驗也證實ROS可上調細胞TGF-β1mRNA及蛋白高表達，而TGF-β1又可誘導細胞內ROS產生并通過繼發(fā)介導的信號傳導通路促進ECM積聚;且ROS及TGF-β1還啟動并參與介導腎臟足細胞的凋亡，腎小球濾過膜完整性破壞，導致蛋白尿產生［9－11］。

總之，本研究初步結果顯示ALA對2型糖尿病患者腎臟有一定的保護作用，該作用部分可能與其抑制體內或腎臟局部TGF-β1過表達有關，進一步尚需大樣本的臨床研究證實并探討其確切的腎臟保護機制。

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