林建群，陳錫彬，章銳鴻

(汕頭市第二人民醫(yī)院泌尿外科，廣東汕頭 515000)

·臨床研究·

Periostin在腎細(xì)胞癌中的表達(dá)情況及其臨床意義

林建群，陳錫彬，章銳鴻

(汕頭市第二人民醫(yī)院泌尿外科，廣東汕頭 515000)

目的 檢測(cè)腎細(xì)胞癌患者癌組織中Periostin基因表達(dá)的改變，探討其相關(guān)的臨床意義。方法 收集我院2012年12月至2014年3月泌尿外科收治的腎細(xì)胞癌患者64例，每例另取癌旁3 cm非癌腎組織作為對(duì)照。熒光定量PCR檢測(cè)Periostin基因表達(dá)量。結(jié)果 Periostin基因在腎癌組織和癌旁正常腎組織中的表達(dá)量分別為0.318±0.076和0.142±0.043，癌旁組織中的表達(dá)量顯著低于腎癌組織(t=5.36，P<0.01)。Periostin 基因的表達(dá)量在不同的年齡、性別和病理類型之間無(wú)顯著性差異(P>0.05)，高分化患者Periostin 基因表達(dá)量為0.242±0.051顯著低于中、低分化的0.358±0.086(t=2.62，P<0.05)，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者Periostin 基因表達(dá)量為0.257±0.057，顯著低于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的0.361±0.082(t=2.51，P<0.05)，臨床Ⅰ、Ⅱ期患者Periostin 基因表達(dá)量為0.273±0.053，顯著低于臨床Ⅲ、Ⅳ期的0.354±0.079(t=2.33，P<0.05)。結(jié)論 Periostin基因的異常高表達(dá)參與了腎細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，有可能成為腎細(xì)胞癌分級(jí)以及預(yù)后評(píng)估的分子標(biāo)記物。

腎細(xì)胞癌；Periostin基因；熒光定量PCR

腎細(xì)胞癌是泌尿道常見(jiàn)的惡性腫瘤，早期腎細(xì)胞癌往往局限于腎組織局部，腎臟病變部位比較隱蔽，早期診斷困難，患者就診時(shí)多已經(jīng)發(fā)展到中、晚期，錯(cuò)過(guò)了最佳治療時(shí)間，因此腎細(xì)胞癌的早期診斷和病情的判斷是臨床急需解決的問(wèn)題[1]。Periostin又稱為成骨細(xì)胞特異性因子2 (osteoblast-specific factor-2，OSF-2)，是一種胞外基質(zhì)分泌性蛋白，近年來(lái)的研究顯示Periostin蛋白具有抗凋亡以及促進(jìn)惡性腫瘤新生血管形成的作用，在多種人類惡性腫瘤的細(xì)胞系以及實(shí)體腫瘤中高表達(dá)[2]。本研究檢測(cè)了腎細(xì)胞癌患者腫瘤組織中Periostin基因表達(dá)的改變，以探討其與腎細(xì)胞癌的關(guān)系及相關(guān)的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集我院2012年12月至2014年3月泌尿外科收治的腎細(xì)胞癌需行根治性腎切除術(shù)的患者64例，所有病例均經(jīng)病理證實(shí)為腎細(xì)胞癌，其中男36例，女28例；年齡41～78歲，平均(61.3±12.2)歲；腎透明細(xì)胞癌40例，乳頭狀腎細(xì)胞癌24例；美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)(American Joint Committee on Cancer，AJCC)分期：Ⅰ期14例，Ⅱ期22例，Ⅲ期18例，Ⅳ期10例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移48例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移16例；Fuhrman分級(jí)高分化腫瘤26例，中、低分化腫瘤38例。所有病例術(shù)前均未行放化療或其他腫瘤相關(guān)治療。每例另取手術(shù)切除癌旁約3cm非癌腎組織作為對(duì)照，均經(jīng)病理證實(shí)未見(jiàn)癌細(xì)胞。

1.2 主要試劑和儀器 Trizol、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自美國(guó)Invitrogene公司，SYBR Green 熒光定量-PCR試劑盒購(gòu)自大連寶生物科技有限公司，Periostin和內(nèi)參引物由上海賽百盛基因技術(shù)有限公司合成。7100熒光定量PCR儀為美國(guó)ABI公司產(chǎn)品。

1.3 Periostin基因表達(dá)的熒光定量PCR檢測(cè) 每例標(biāo)本腫瘤和瘤旁對(duì)照組織各50 mg，加入PBS淹沒(méi)組織，超聲組織勻漿，1 500 g×10 min，去上清，沉淀組織加入1 mL Trizol混勻，按照試劑盒要求提取組織細(xì)胞總RNA，50 μL DEPC雙蒸水溶解RNA，每例取2 μg RNA按照試劑盒說(shuō)明書加入逆轉(zhuǎn)錄試劑，反轉(zhuǎn)錄出cDNA第一條鏈，每例取5 μL 加入SYBR Green和引物進(jìn)行PCR反應(yīng)，按照Real-試劑盒說(shuō)明書使用熒光定量PCR儀檢測(cè)Periostin 基因表達(dá)的變化。Periostin引物序列為5′- GGCTAATTGCGGTGCATGGCTGCAAGT-3′(上游)和5′- CCTAATTGCGCCCGGTATAATTGC-3′(下游)，反應(yīng)條件為：94 ℃ 4 min；94 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s 35個(gè)循環(huán)；72 ℃ 5 min?！鰿t值=Ctperiostin值- Ct內(nèi)參值，Periostin表達(dá)量使用2-△Ct評(píng)估。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行分析，兩組樣本均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05為統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性差異。

2 結(jié) 果

2.1 Periostin基因在腎細(xì)胞癌組織中的表達(dá) Periostin基因在癌旁組織中的表達(dá)量為0.142±0.043，顯著低于腎癌組織的0.318±0.076(t=5.36，P<0.01，圖1)。

圖1 Periostin基因的熒光定量PCR檢測(cè)

2.2 腎癌組織中Periostin基因表達(dá)量與臨床各相關(guān)指標(biāo)的關(guān)系 Periostin 基因的表達(dá)量在不同的年齡、性別和病理類型之間無(wú)顯著性差異(P>0.05)，高分化患者Periostin 基因表達(dá)量顯著低于中、低分化(P<0.05)，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者Periostin 基因表達(dá)量顯著低于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P<0.05)，臨床Ⅰ、Ⅱ期患者Periostin 基因表達(dá)量顯著低于臨床Ⅲ、Ⅳ期(P<0.05)。詳見(jiàn)表2。

表2 腎癌患者不同臨床指標(biāo)中Periostin基因表達(dá)量的比較

臨床指標(biāo)例數(shù)Periostin(2-△Ct)t值P值性別 男280．314±0．062 女240．322±0．0750．820．426年齡(歲) ≥60310．316±0．064 <60350．319±0．0710．790．522病理類型 透明細(xì)胞癌400．317±0．068 乳頭狀細(xì)胞癌240．325±0．760．860．604分化程度 高分化180．242±0．051 中、低分化340．358±0．0862．620．024淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 無(wú)210．257±0．057 有310．361±0．0822．510．029臨床分期 Ⅰ、Ⅱ期230．273±0．053 Ⅲ、Ⅳ期290．354±0．0792．330．037

3 討 論

惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，其中涉及到多種基因的激活或者失活[3]。為了便于客觀地明確病變性質(zhì)、評(píng)估病變進(jìn)展程度，一些與腫瘤相關(guān)的分子生物標(biāo)志物也越來(lái)越受到學(xué)者們的重視[4]。Periostin是近幾年來(lái)新確定的一個(gè)間質(zhì)特異基因(mesenchyme specific gene)，位于染色體13q13.3，具有細(xì)胞粘附作用的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白[5]。由“種子”和“土壤”學(xué)說(shuō)衍生的“土壤”-腫瘤微環(huán)境假說(shuō)使學(xué)者們開始關(guān)注間質(zhì)特異基因在腫瘤微環(huán)境中的作用[6]，WU等[7]學(xué)者在非小細(xì)胞肺癌的研究顯示基因沉默Periostin可以顯著減弱腫瘤細(xì)胞的增殖，以及與侵襲相關(guān)的上皮向間皮的轉(zhuǎn)變。KYUTOKU等[8]學(xué)者的研究顯示Periostin基因與乳腺癌的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，沉默Periostin基因可以提高乳腺癌化療的敏感性，并且在乳腺癌干細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)了Periostin基因高表達(dá)。本研究顯示了腎癌組織中Periostin基因表達(dá)量顯著高于癌旁的正常對(duì)照組織，提示了Periostin基因的激活也可能參與了腎癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。

侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤最主要的特征，腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜、多因素參與的過(guò)程，但其具體機(jī)制仍不十分清楚[9]。本研究觀察到腎癌患者組織中Periostin基因表達(dá)量在高分化組顯著低于中、低分化組，說(shuō)明了Periostin基因的上調(diào)與腎癌組織分化程度密切相關(guān)。Periostin基因表達(dá)量在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，說(shuō)明了Periostin基因的高表達(dá)可能參與了腎癌的侵襲和轉(zhuǎn)移，這可能與Periostin可以促進(jìn)血管生成、提供腫瘤局部增殖的微環(huán)境相關(guān)。Periostin基因表達(dá)量在臨床Ⅰ、Ⅱ期組顯著低于Ⅲ、Ⅳ期組，說(shuō)明了Periostin基因表達(dá)量的檢測(cè)可用于患者預(yù)后的評(píng)估。在一項(xiàng)小細(xì)胞肺癌的ELISA分析中也檢測(cè)到了Ⅰ、Ⅱ期患者血清中Periostin蛋白表達(dá)量顯著低于Ⅲ、Ⅳ期患者[10]。另外有研究提示Periostin蛋白可作為腫瘤細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的標(biāo)志，Periostin蛋白在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的作用也日益受到關(guān)注[9]。上述資料提示了Periostin有可能成為腎癌的一個(gè)潛在的治療靶點(diǎn)。

綜上所述，本研究顯示腎癌組織中存在Periostin基因的異常高表達(dá)，Periostin基因表達(dá)量的檢測(cè)有可能成為腎癌分級(jí)以及預(yù)后評(píng)估的新分子標(biāo)記物。

[1] SRINIVASAN R, RICKETTS CJ, SOURBIER C, et al. New strategies in renal cell carcinoma: targeting the genetic and metabolic basis of disease[J]. Clin Cancer Res, 2015, 21(1):10-17.

[2] 趙曉君, 孫傳玉. Periostin在惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用[J]. 中華臨床醫(yī)師雜志(J/OL)， 2013, 7(13):6083-6086.

[3] GODWIN JL, ZIBELMAN M, PLIMACK ER, et al. Immune checkpoint blockade as a novel immunotherapeutic strategy for renal cell carcinoma: a review of clinical trials[J]. Discov Med, 2014, 18(101):341-350.

[4] 魏銘, 王國(guó)棟, 鄭國(guó)旭, 等. Notch1 及其下游靶分子 Hes1在腎細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[J]. 細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志, 2014, 30(4):417-420.

[5] MORRA L, MOCH H. Periostin expression and epithelial-mesenchymal transition in cancer: a review and an update[J]. Virchows Arch, 2011, 459(5):465-475.

[6] WONG GS, RUSTGI AK. Matricellular proteins: priming the tumour microenvironment for cancer development and metastasis[J]. Br J Cancer, 2013, 108(4):755-761.

[7] WU SQ, LV YE, LIN BH,et al. Silencing of periostin inhibits nicotine-mediated tumor cell growth and epithelial-mesenchymal transition in lung cancer cells[J]. Mol Med Rep, 2013, 7(3):875-880.

[8] KYUTOKU M, TANIYAMA Y, KATSURAGI N, et al. Role of periostin in cancer progression and metastasis: inhibition of breast cancer progression and metastasis by anti-periostin antibody in a murine model[J]. Int J Mol Med, 2011, 28(2):181-186.

[9] 王洋, 朱明華. Periostin與上皮源性惡性腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J]. 第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào), 33(6):659-663.

[10] 邵吉寶, 唐曉燕, 姚根宏, 等. 非小細(xì)胞肺癌患者血清periostin水平及其臨床意義[J]. 腫瘤學(xué)雜志, 2014, 20(5):373-375.

(編輯 何宏靈)

The expression of Periostin in renal cell carcinoma and its clinical significance

LIN Jian-qun, CHEN Xi-bin, ZHANG Rui-hong

(Department of Urology, the Second People’s Hospital of Shantou City, Shantou 515000, China)

Objective To detect the mRNA expression of Periostin in renal cell carcinoma and to explore its clinical significance. Methods A total of 64 patients with renal cell carcinoma treated in our hospital during Dec. 2012 and March 2014 were enrolled in this study. The adjacent healthy tissues of each case served as controls. The mRNA expression of Periostin was detected with Real-time PCR. Results The mRNA expression of Periostin in renal cell carcinoma was 0.318±0.076, which was significantly higher than that in the healthy tissues (0.142±0.043), (t=5.36,P<0.01). There was no difference between patients with different gender, age, and pathological type (P>0.05). The mRNA expression of Periostin in well differentiation group was 0.242±0.051, lower than that in median and low differentiation group (0.358±0.086), (t=2.62,P<0.05). The mRNA expression of Periostin in non-lymph node metastasis group was 0.257±0.057, lower than that in lymph node metastasis group (0.361±0.082), (t=2.33,P<0.05). The mRNA expression of Periostin in stage I and II group was 0.273±0.053, lower than that in stage Ⅲ and Ⅳ group (0.354±0.078), (t=2.33,P<0.05). Conclusion The upregulation of Periostin is involved in the occurrence and development of renal cell carcinoma, which can be used as a biomarker to estimate the differentiation and prognosis of renal cell carcinoma.

renal cell carcinoma; Periostin；Real-time PCR

2015-01-12

2015-03-06

林建群(1974-)，男(漢族)，副主任醫(yī)師，研究方向?yàn)槊谀蛲饪?E-mail：linlin1978@163.com

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A DOI：10.3969/j.issn.1009-8291.2015.05.011