薛 萊，吳 陽，黃 波，李 榮，蔣青松

(1.重慶醫(yī)科大學(xué)藥理學(xué)教研室，重慶市生物化學(xué)與分子藥理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶 400016；2.遵義醫(yī)學(xué)院藥理教研室，基礎(chǔ)藥理省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 遵義 563000；3.重慶科瑞制藥(集團(tuán))有限公司，重慶 400060)

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GW0742對(duì)高糖損傷大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮的保護(hù)作用

薛 萊1，吳 陽1，黃 波2，李 榮3，蔣青松1

(1.重慶醫(yī)科大學(xué)藥理學(xué)教研室，重慶市生物化學(xué)與分子藥理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶 400016；2.遵義醫(yī)學(xué)院藥理教研室，基礎(chǔ)藥理省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 遵義 563000；3.重慶科瑞制藥(集團(tuán))有限公司，重慶 400060)

目的 探討GW0742對(duì)高糖損傷大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮的作用及可能機(jī)制。方法 葡萄糖55 mmol ·L-1(high glucose，HG)孵育大鼠胸主動(dòng)脈，以乙酰膽堿(acetylcholine，ACh)誘導(dǎo)的內(nèi)皮依賴性舒張作用為內(nèi)皮功能完整性指標(biāo)，HE染色觀察血管形態(tài)結(jié)構(gòu)變化，硝酸還原法測(cè)量血管內(nèi)一氧化氮(nitric oxide，NO)含量，利用qRT-PCR和Western blot方法檢測(cè)血管中過氧化物酶增殖物激活受體β(peroxisome proliferator-activated receptor β, PPAR β)、核轉(zhuǎn)錄因子κB(nuclear transcription factor-κB，NF-κB)及內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)mRNA和蛋白表達(dá)。結(jié)果 HG條件下，ACh的內(nèi)皮依賴性舒張作用明顯減弱(P<0.01)，內(nèi)皮功能受損；血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整性也被破壞；同時(shí)，PPAR β mRNA和蛋白表達(dá)明顯降低(P<0.01)，而NF-κB p65的表達(dá)則升高(P<0.01)，eNOS 的表達(dá)下降(P<0.01)，血管內(nèi)NO含量亦減少(P<0.01)；GW0742(0.01、0.1、1 μmol·L-1)能劑量依賴性地改善高糖損傷的ACh內(nèi)皮依賴性舒張作用(P<0.01)，減輕內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞的損傷，上調(diào)PPAR β表達(dá)，減少NF-κB p65的表達(dá)，增加eNOS表達(dá)和NO的濃度(P<0.01)。結(jié)論 GW0742對(duì)高糖損傷的大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮有保護(hù)作用，該作用可能與其激活PPAR β，下調(diào)NF-κB，改善eNOS-NO系統(tǒng)有關(guān)。

GW0742；高糖；內(nèi)皮損傷；PPAR β；NF-κB；eNOS；NO

血管病變是糖尿病的主要并發(fā)癥之一。糖尿病導(dǎo)致的微血管病變與糖尿病視網(wǎng)膜病、糖尿病腎病、糖尿病心肌病以及糖尿病神經(jīng)病變等的發(fā)生關(guān)系密切[1]；大血管病變則可引起高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化及外周動(dòng)脈疾病[2]。糖尿病血管病變的發(fā)生受多種因素影響，持續(xù)高血糖水平所致的血管內(nèi)皮損傷和功能紊亂是其發(fā)生的最主要病理生理基礎(chǔ)[3]。內(nèi)皮損傷的初始表現(xiàn)之一為乙酰膽堿(acetylcholine，ACh)誘導(dǎo)的內(nèi)皮依賴性舒張作用改變，該作用主要由內(nèi)皮依賴性松弛因子(EDRF)，即一氧化氮(nitric oxide, NO)介導(dǎo)。NO對(duì)維持正常內(nèi)皮結(jié)構(gòu)和功能具有重要意義。另有研究發(fā)現(xiàn)，過氧化物酶增殖物激活受體β(peroxisome proliferator-activated receptor β, PPAR β)特異性激動(dòng)劑GW0742能夠抑制血管緊張素II誘導(dǎo)的動(dòng)脈粥樣硬化[4]，改善自發(fā)性高血壓大鼠內(nèi)皮功能[5]；在糖尿病及其并發(fā)癥中，GW0742對(duì)糖尿病腎病具有保護(hù)作用[6]，可促進(jìn)糖尿病大鼠缺血后肢的骨骼肌血管生成[7]，但對(duì)于GW0742在高糖損傷內(nèi)皮的作用及可能機(jī)制目前國(guó)內(nèi)外研究較少。本研究擬采用高糖孵育大鼠胸主動(dòng)脈建立糖尿病血管內(nèi)皮損傷模型[8]，對(duì)GW0742的相關(guān)作用及可能機(jī)制進(jìn)行初步探索。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)♂ SD大鼠，體質(zhì)量240～260 g，由重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供[許可證號(hào)：SYXK(渝)2010-0001]。

1.1.2 儀器及試劑 GW0742購(gòu)自Cayman公司，用0.1% DMSO溶解后，雙蒸水稀釋至所需濃度；苯腎上腺素(phenylephrine, PE)購(gòu)自上海禾豐制藥有限公司；ACh、 DMSO、 BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒和RIPA裂解液均購(gòu)自江蘇碧云天生物技術(shù)公司；NO含量測(cè)定試劑盒購(gòu)自南京建成生物技術(shù)公司；TRIzol、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和SYBR Green Supermix購(gòu)自TaKaRa生物試劑公司；兔抗PPAR β多克隆抗體購(gòu)自Santa Cruz；兔抗Phospho-NF-κB p65抗體購(gòu)自Cell Signaling；內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)多克隆抗體購(gòu)自Abcam公司。其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

BL-420S生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)、HW-400恒溫平滑肌槽(成都泰盟科技有限公司)；肌張力換能器(5 g)(中國(guó)北京航天醫(yī)學(xué)工程研究所)；CFX ConnectTN定量PCR檢測(cè)系統(tǒng)和凝膠成像圖像分析系統(tǒng)(Bio-Rad公司)。

1.2 方法

1.2.1 血管條制備 將SD大鼠脫頸椎處死，取出胸主動(dòng)脈，剝離周圍結(jié)締組織，制成長(zhǎng)3～5 mm的血管環(huán)，置于含Krebs液[成分(mmol ·L-1)：NaCl 119，KH2PO41.2，CaCl22.5，KCl 4.7，MgSO41.2，NaHCO325.0，Glucose 11，pH 7.4] 20 mL 的水浴槽中，恒溫(37.0±0.5)℃，持續(xù)通以0.95 O2+0.05 CO2混合氣體。

1.2.2 內(nèi)皮依賴性舒張功能測(cè)定 血管張力經(jīng)張力換能器連接于BL-420S生物信息采集處理系統(tǒng)，前負(fù)荷1 g，平衡1 h(每隔15 min更換 Krebs液一次)后，給予PE 10 μmol·L-1預(yù)收縮血管，達(dá)到坪值并穩(wěn)定后，加入ACh 10 μmol·L-1驗(yàn)證內(nèi)皮完整性(舒張率達(dá)到60%～90%認(rèn)定內(nèi)皮功能完整)[9]。本實(shí)驗(yàn)中ACh舒張率為79.4%±5.4%。Krebs液反復(fù)沖洗移去藥物，平衡30 min后，再次用PE預(yù)收縮血管。換液，然后將血管條分別置于含不同藥物的Krebs液中孵育6 h，再次給予PE收縮血管，達(dá)到孵育前相似的收縮坪值并穩(wěn)定后，以累積濃度法給予ACh(按0.5對(duì)數(shù)單位遞增，0.001～30 μmol·L-1)，觀察血管的舒張反應(yīng)，計(jì)算血管最大舒張作用與PE收縮力的百分比(血管的最大舒張效應(yīng)，即Emax)和ACh產(chǎn)生50%最大舒張效應(yīng)濃度的負(fù)對(duì)數(shù)(-log IC50)。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)分組 分為5組：① 正常對(duì)照組(NG)：正常Krebs液(含葡萄糖11 mmol·L-1)+甘露醇44 mmol·L-1；② 高糖模型組(HG)：Krebs液中含葡萄糖55 mmol·L-1；③、④、⑤不同濃度GW0742(0.01、0.1、1 μmol·L-1)給藥組：HG條件下加入不同濃度GW0742。每組重復(fù)6次。

1.2.4 組織病理學(xué)檢測(cè) 血管條孵育6 h后，用4%的多聚甲醛浸泡固定，石蠟包埋，作4 μm冠狀切片，HE染色，于高倍鏡下觀察血管形態(tài)學(xué)變化。

1.2.5 qRT-PCR法檢測(cè)血管PPAR β、NF-κB p65、eNOS的mRNA表達(dá) 參照GenBank中大鼠的基因序列合成引物(由TaKaRa生物技術(shù)公司合成)(引物序列見Tab 1)。用TRIzol提取組織總RNA，測(cè)定RNA濃度，按照1 g/20 L反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，利用SYBR Green熒光技術(shù)，在定量PCR儀器上按如下條件進(jìn)行擴(kuò)增：95℃ 30 s；95℃ 5 s；60℃ 30 s，40個(gè)循環(huán)。以β-actin作為內(nèi)參，對(duì)Ct值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，根據(jù)相對(duì)定量計(jì)算公式分析結(jié)果。每組重復(fù)3次。

Tab 1 Sequences of primers

1.2.6 Western blot法檢測(cè)PPAR β、Phospho-NF-κB p65、eNOS蛋白表達(dá) 血管組織液氮冷凍后勻漿提取總蛋白，用BCA蛋白濃度檢測(cè)試劑盒檢測(cè)蛋白濃度。取30 μg蛋白進(jìn)行SDS-聚丙烯酰胺電泳分離，轉(zhuǎn)移至PDVF膜上，5% BSA封閉2 h，加入一抗(β-actin按1 ∶1 000稀釋，其余均按1 ∶500稀釋)，4℃搖床過夜，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗(1 ∶3 000稀釋)。用發(fā)光液(Advanstor 公司)顯色，凝膠成像儀成像后用Image Lab軟件(Bio-Rad)分析結(jié)果。每組重復(fù)3次。

1.2.7 NO含量測(cè)定 按試劑盒說明書操作，于550 nm波長(zhǎng)下，用硝酸還原法測(cè)定血管組織勻漿上清液NO含量。NO含量計(jì)算：NO含量(μmol·g-1Pro)=(測(cè)定OD值-空白OD值)/(標(biāo)準(zhǔn)OD值-空白OD值)× 20(μmol·L-1)/待測(cè)樣本蛋白濃度(g Pro·L-1)。

2 結(jié)果

2.1 GW0742對(duì)高糖損傷胸主動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒張作用的影響大鼠胸主動(dòng)脈在高糖環(huán)境下孵育6 h后，PE的收縮力為(0.66±0.12)g，與NG組(0.63±0.10)g比較差異無顯著性(P>0.05)，提示本實(shí)驗(yàn)條件下，高糖對(duì)PE誘導(dǎo)的血管收縮可能沒有影響；高糖環(huán)境使ACh誘導(dǎo)的內(nèi)皮依賴性舒張作用明顯減弱(P<0.01)，Emax和-lg IC50分別降低了78.3%和214.5%；低濃度GW0742(0.01 μmol·L-1)對(duì)高糖損傷的ACh舒張作用改善無顯著性(P>0.05)；但0.1和1 μmol·L-1的GW0742使ACh的Emax分別增加了98.2%、347.6%(P<0.01)，-lg IC50分別增加了106.2%、191.8%(P<0.05)，1 μmol·L-1的GW0742甚至使ACh的作用基本恢復(fù)到正常對(duì)照組水平(Fig 1，Tab 2)。

Fig 1 Effects of GW0742 on endothelium-dependent relaxation of acetylcholine under HG(±s, n=6)

A: the typical traces of the dose-response relationship for acetylcholine (ACh) on rat aorta; B: the dose-response curve of ACh on aortic rings. PE: phenylephrine; NG: glucose at 11 mmol· L-1+mannitol 44 mmol·L-1; HG: glucose at 55 mmol·L-1.*P<0.05，**P<0.01vsNG；#P<0.05，##P<0.01vsHG.

Tab 2 Effects of GW0742 on endothelium-dependent relaxation of acetylcholine under HG conditions(±s,n=6)

Emax: the maximal relaxation effect of acetylcholine; -log IC50: the negative log molar concentration of acetylcholine for inducing 50% of Emax; NG: glucose at 11 mmol· L-1+mannitol 44 mmol·L-1; HG: glucose at 55 mmol·L-1.**P<0.01vsNG；#P<0.05，##P<0.01vsHG

2.2 GW0742對(duì)高糖損傷胸主動(dòng)脈組織形態(tài)學(xué)的作用正常血管內(nèi)皮細(xì)胞完整平坦，內(nèi)外彈力層連接緊密，血管平滑肌細(xì)胞排列整齊，血管結(jié)構(gòu)清晰完整(Fig 2A)；高糖孵育后的血管內(nèi)皮細(xì)胞受損，內(nèi)彈性膜斷裂，內(nèi)層平滑肌細(xì)胞排列疏松紊亂(Fig 2B)；給予GW0742后，血管形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)較HG組明顯改善，內(nèi)皮細(xì)胞損傷改善，內(nèi)彈性膜斷裂減少，平滑肌排列較整齊，高劑量GW0742(1 μmol·L-1)干預(yù)后血管形態(tài)與正常血管基本相似(Fig 2C,D,E)。

Fig 2 Effects of GW0742 on morphological changes of aortic rings under HG(HE, 400×)

A: NG (glucose at 11 mmol·L-1+mannitol 44 mmol·L-1); B: HG (glucose at 55 mmol·L-1); C: HG+GW0742 (0.01 μmol·L-1); D: HG+GW0742 (0.1 μmol·L-1); E: HG+GW0742 (1 μmol·L-1)

2.3 GW0742對(duì)高糖條件下胸主動(dòng)脈PPAR β、NF-κB p65、eNOS mRNA及蛋白表達(dá)變化的影響與正常組相比，高糖組PPAR β mRNA和蛋白表達(dá)明顯降低(P<0.01)，NF-κB p65 的表達(dá)則明顯升高(P<0.01)，同時(shí)eNOS的表達(dá)減少(P<0.01)。GW0742明顯上調(diào)高糖減少的PPAR β表達(dá)(P<0.05)，降低NF-κB p65的表達(dá)(P<0.05)，增加eNOS表達(dá)(Fig 3，F(xiàn)ig 4)。

2.4 GW0742對(duì)高糖條件下胸主動(dòng)脈NO含量變化的作用與正常組相比，高糖孵育后血管NO濃度降低了63.7%(P<0.01)，GW0742 0.1和1 μmol·L-1分別使NO含量增加了52.5%(P<0.05)和150.5%(P<0.01)。1 μmol·L-1的GW0742使NO的含量基本恢復(fù)至正常組水平(Fig 5)。

Fig 3 Effects of GW0742 on mRNA expression of PPAR β, NF-κB p65, eNOS under HG condition(±s,n=3)

1:NG;2:HG;3:HG+GW0742 (0.01 μmol·L-1); 4:HG+GW0742 (0.1 μmol·L-1); 5:HG+GW0742 (1 μmol·L-1); NG: glucose at 11 mmol·L-1+mannitol 44 mmol·L-1; HG: glucose at 55 mmol·L-1.**P<0.01vsNG；#P<0.05，##P<0.01vsHG.

3 討論

Fig 4 Effects of GW0742 on protein expressions of PPAR β, p-NF-κB p65, eNOS under HG condition(±s, n=3)

1:NG;2:HG;3:HG+GW0742 (0.01 μmol·L-1);4:HG+GW0742 (0.1 μmol·L-1); 5:HG+GW0742 (1 μmol·L-1);NG: glucose at 11 mmol·L-1+mannitol 44 mmol·L-1; HG: glucose at 55 mmol·L-1.**P<0.01vsNG；#P<0.05，##P<0.01vsHG.

血管病變?cè)谔悄虿〖捌洳l(fā)癥的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用，但相關(guān)機(jī)制仍未完全闡明。臨床和體外研究表明，由于糖尿病患者糖代謝異常，體內(nèi)血糖水平持續(xù)性升高，導(dǎo)致血管內(nèi)皮損傷，引發(fā)內(nèi)皮功能紊亂[10-12]。本研究中，與相同滲透壓的正常葡萄糖(11 mmol·L-1)對(duì)照組比較，55 mmol·L-1葡萄糖使ACh誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮依賴性舒張作用明顯降低，提示高糖可能導(dǎo)致血管的內(nèi)皮功能受損，且這種損傷作用并不是由于滲透壓的增加引起的。同時(shí)，組織形態(tài)學(xué)檢測(cè)證實(shí)高糖也破壞了血管內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整性。大量研究認(rèn)為，內(nèi)皮功能紊亂和缺失是糖尿病血管病變的主要危險(xiǎn)因素[13]，但遺憾的是，目前對(duì)于高糖損傷的內(nèi)皮功能并沒有特別有效的干預(yù)措施。研究發(fā)現(xiàn)，GW0742對(duì)高糖損傷人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞和I型糖尿病大鼠內(nèi)皮功能障礙有保護(hù)作用[14-15]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果亦表明，GW0742能改善高糖環(huán)境下ACh血管內(nèi)皮依賴性舒張功能，保護(hù)高糖條件下血管內(nèi)皮和平滑肌細(xì)胞的結(jié)構(gòu)。上述結(jié)果提示，GW0742對(duì)高糖損傷的內(nèi)皮具有保護(hù)作用，對(duì)糖尿病血管病變可能有良好的干預(yù)作用。GW0742是選擇性的PPAR β激動(dòng)劑。PPAR β是過氧化物酶增殖物激活受體3個(gè)亞型之一，主要在體內(nèi)代謝活躍的組織表達(dá)，調(diào)控脂肪酸代謝和葡萄糖平衡等相關(guān)基因，在糖、脂代謝、炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。在糖尿病db/db小鼠，長(zhǎng)期激動(dòng)PPAR β可以改善胰島素敏感性和胰島功能，同時(shí)改善脂質(zhì)代謝，提示PPAR β可能是糖尿病治療的一個(gè)重要作用靶點(diǎn)[16]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，高糖孵育后PPAR β在mRNA和蛋白水平表達(dá)均明顯降低，而給予GW0742后，PPAR β表達(dá)明顯升高，提示高糖損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能與PPAR β相關(guān)信號(hào)通路受損有關(guān)，而GW0742對(duì)內(nèi)皮的保護(hù)作用可能是其激動(dòng)PPAR β的結(jié)果。

Fig 5 Effects of GW0742 on NO contents in aortas under HG conditions(±s, n=3)

1:NG;2:HG;3:HG+GW0742 (0.01 μmol·L-1); 4:HG+GW0742 (0.1 μmol·L-1); 5:HG+GW0742 (1 μmol·L-1); NG: glucose at 11 mmol·L-1+mannitol 44 mmol·L-1; HG: glucose at 55 mmol·L-1.**P<0.01vsNG；#P<0.05，##P<0.01vsHG.

脂肪細(xì)胞中，PPAR β激活后可通過調(diào)節(jié)ERK1/2的活化，減少NF-κB激活，從而抑制脂多糖誘導(dǎo)的細(xì)胞因子的產(chǎn)生[17]；在EA. hy926內(nèi)皮細(xì)胞，激活PPAR β可抑制細(xì)胞因子誘導(dǎo)的NF-κB核轉(zhuǎn)錄過程[18]。這些結(jié)果提示，NF-κB可能是PPAR β的下游因子之一。作為重要的核轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，NF-κB幾乎存在于所有細(xì)胞中，參與細(xì)胞凋亡、腫瘤發(fā)生、炎癥和免疫反應(yīng)等多種生物進(jìn)程。NF-κB通路的激活亦參與了糖尿病的發(fā)生發(fā)展。NF-κB抑制劑Celastrol可改善胰島素抵抗，減輕糖尿病腎損傷[19]；干擾NF-κB表達(dá)，阻斷NF-κB的作用對(duì)Ⅱ型糖尿病大鼠的內(nèi)皮細(xì)胞有保護(hù)作用[20]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，高糖孵育胸主動(dòng)脈的NF-κB在mRNA和蛋白水平的表達(dá)均明顯上升，而GW0742則使其表達(dá)下降，提示NF-κB的激活亦參與了高糖對(duì)內(nèi)皮的損傷，GW0742通過激活PPAR β，降低NF-κB的活性產(chǎn)生內(nèi)皮保護(hù)作用。

Liu等[21]發(fā)現(xiàn)，糖尿病引發(fā)的內(nèi)皮功能紊亂與NF-κB信號(hào)通路激活后，eNOS活性被抑制，最終細(xì)胞NO釋放減少有關(guān)。NO是NF-κB信號(hào)通路的重要下游因子，也是內(nèi)皮細(xì)胞釋放的重要血管活性物質(zhì)。在eNOS作用下，內(nèi)皮釋放NO，激活血管壁平滑肌細(xì)胞的鳥苷酸環(huán)化酶，促進(jìn)環(huán)磷酸鳥苷生成，從而產(chǎn)生血管舒張作用，增加血管eNOS的表達(dá)，有助于改善高脂飲食引起的內(nèi)皮損傷[22]。本研究顯示，高糖孵育后，由NO介導(dǎo)的ACh內(nèi)皮依賴性舒張作用降低，大鼠胸主動(dòng)脈eNOS mRNA和蛋白表達(dá)亦減少，NO釋放明顯減少。該結(jié)果再次證實(shí)，eNOS-NO通路受損在高糖對(duì)內(nèi)皮的損傷作用中具有重要意義。GW0742在改善高糖損傷ACh內(nèi)皮依賴性舒張的同時(shí)，上調(diào)血管內(nèi)eNOS mRNA和蛋白表達(dá)，增加NO釋放，提示eNOS-NO系統(tǒng)的激活在GW0742保護(hù)高糖損傷血管內(nèi)皮中亦有重要作用。綜上所述，GW0742對(duì)高糖損傷血管內(nèi)皮功能具有保護(hù)作用，該作用可能是GW0742激活PPAR β表達(dá)，降低NF-κB活性，改善eNOS-NO系統(tǒng)的結(jié)果。但GW0742的上述作用是否還有其余信號(hào)通路或血管活性物質(zhì)參與，需要進(jìn)行更多深入研究。

(致謝:本實(shí)驗(yàn)于重慶醫(yī)科大學(xué)生物化學(xué)與分子藥理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室完成，感謝實(shí)驗(yàn)室各位老師和同學(xué)在實(shí)驗(yàn)過程中給予的幫助)

[1] Triggle C R. The early effects of elevated glucose on endothelial function as a target in the treatment of type 2 diabetes[J].DrugsToday(Barc), 2007, 43(11): 815-26.

[2] Ojima A, Ishibashi Y, Matsui T, et al. Glucagon-like peptide-1 receptor agonist inhibits asymmetric dimethylarginine generation in the kidney of streptozotocin-induced diabetic rats by blocking advanced glycation end product-induced protein arginine methyltranferase-1 expression[J].AmJPathol, 2013, 182(1): 132-41.

[3] Hadi H A, Suwaidi J A. Endothelial dysfunction in diabetes mellitus[J].VascHealthRiskManag, 2007, 4(2):853-76.

[4] Takata Y, Liu I, Yin F, et al. PPAR-δ mediated anti-inflammatory mechanisms inhibit angiotensin II accelerated atherosclerosis[J].ProcNatlAcadSciUSA, 2008, 105(110):4277-82.

[5] Zarzuelo M J, Jime/nez R, Galindo P, et al. Antihypertensive effects of peroxisome proliferator-activated receptor-β activation in spontaneously hypertensive rats[J].Hypertension, 2011, 58(4):733-43.

[6] Matsushita Y, Ogawa D, Wada J, et al. Activation of peroxisome proliferator-activated receptor delta inhibits streptozotocin-induced diabetic nephropathy through anti-inflammatory mechanisms in mice[J].Diabetes, 2011, 60(3):960-8.

[7] Khazaei M, Salehi E, Rashidi B, et al. Role of peroxisome proliferator-activated receptor β agonist on angiogenesis in hindlimb ischemic diabetic rats[J].JDiabetesComplicat, 2012,26(2):137-40.

[8] Wu Y, Xue L, Du W, et al. Polydatin restores endothelium-dependent relaxation in rat aorta rings impaired by high glucose: a novel insight into the PPARβ-NO signaling pathway[J].PlosOne, 2015, 10(5): e0126249.

[9] 茹筱晨, 錢令波, 崔 潔.乙醇對(duì)離體大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)的舒張作用及其機(jī)制[J].中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志, 2008, 24(3): 269-73.

[9] Ru X C, Qian L B, Cui J, et al. Vasodilating effect and its mechamism of ethanol on isolated rat thoracic aorta at different resting tension[J].ChinJApplPhysiol, 2008, 24(3): 269-73.

[10]Campos C. Chronic hyperglycemia and glucose toxicity: pathology and clinical sequelae[J].PostgradMed, 2012, 124(6): 90-7.

[11]Kobayashi T, Matsumoto T, Kamata K. Mechanisms underlying the chronic pravastatin treatment-induced improvement in the impaired endothelium-dependent aortic relaxation seen in streptozotocin-induced diabetic rats[J].BrJPharmacol, 2000, 131(2): 231-8.

[12]Caballero A E. Endothelial dysfunction, inflammation, and insulin resistance: a focus on subjects at risk for type 2 diabetes[J].CurrDiabRep, 2004, 4(4):237-46.

[13]Xu J, Zou M H. Molecular insights and therapeutic targets for diabetic endothelial dysfunction[J].Circulation, 2009, 120(13): 1266-86.

[14]Quintela A M, Jiménez R, Piqueras L, et al. PPARβ activation restores the high glucose-induced impairment of insulin signaling in endothelial cells[J].BrJPharmacol, 2014,171(12):3089-102.

[15]Quintela A M, Jiménez R, Gomez-Guzman M, et al. Activation of peroxisome proliferator -activated receptor-β/-δ(PPARβ/δ) prevents endothelial dysfunction in type 1 diabetic rats[J].FreeRadicBiolMed, 2012, 53(4): 730-41.

[16]Winzell M S, Wulff E M, Olsen G S, et al. Improved insulin sensitivity and islet function after PPARdelta activation in diabetic db/db mice[J].EurJPharmacol, 2010, 626(2-3):297-305.

[17]Rodríguez-Calvo R, Serrano L, Coll T, et al. Activation of peroxisome proliferator-activated receptor beta/delta inhibits lipopolysaccharide-induced cytokine production in adipocytes by lowering nuclear factor-kappa B activity via extracellular signal-related kinase 1/2[J].Diabetes, 2008, 57(8): 2149-57.

[18]Rival Y, Benéteau N, Taillandier T, et al. PPARalpha and PPARdelta activators inhibit cytokine-induced nuclear translocation of NF-kappa B and expression of VCAM-1 in EA.hy 926 endothelial cells[J].EurJPharmacol, 2002, 435(2-3):143-51.

[19]Kim J E, Lee M H, Nam D H, et al. Celastrol, an NF-κB inhibitor, improves insulin resistance and attenuates renal injury in db /db mice[J].PlosOne, 2013, 8(4): 62-8.

[20]Zheng X, Zhu S, Chang S, et al. Protective effects of chronic resveratrol treatment on vascular inflammatory injury in streptozotocin-induced type 2 diabetic rats: role of NF-kappa B signaling[J].EurJPharmacol, 2013, 720(13):147-57.

[21]Liu C, Sun J, Xue F, et al. Effect of 3, 4-dihydroxyacetophenone on endothelial dysfunction in streptozotocin-induced rats with type 2 diabetes[J].JCardiovascPharmacol, 2015, 65(1): 22-7.

[22]程靜靜, 陳 莉, 李朝飛, 等.白藜蘆醇通過減緩內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及增加eNOS的表達(dá)改善高熱量高膽固醇飲食引起的內(nèi)皮損傷[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào), 2014,30(12):1756-62

[22]Cheng J J, Chen L, Li C F, et al. Resveratrol improves vascular endothelial injury induced by high-calorie and high-cholestrol diet through reduced ERS and increased eNOS expression[J].ChinPharmacolBull, 2014, 30(12):1756-62.

Effect of GW0742 on endothelial dysfunction induced by high glucose in isolated rat thoracic aorta

XUE Lai1, WU Yang1, HUANG Bo2, LI Rong3, JIANG Qing-song1

(1.DeptofPharmacology,ChongqingKeyLaboratoryofBiochemistryandMolecularPharmacology,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016,China; 2.DeptofPharmacologyandtheKeyLaboratoryforBasicPharmacologyofMinistryofEducation,ZunyiMedicalCollege,ZunyiGuizhou563000,China;3.ChongqingKeruiPharmaceutical(Group)Co.Ltd.,Chongqing400060,China)

Aim To investigate the effect of GW0742 on the endothelial dysfunction induced by high glucose (glucose at 55 mmol·L-1) in isolated rat thoracic aorta and its related mechanisms.Methods The end othelium-dependent relaxation of acetylcholine was performed in the absence or presence of GW0742 at different concentrations under high glucose condition. The structure of aorta was observed by HE staining. Moreover, the content of NO was also measured by nitrate reduction method. The mRNA and protein expression were detected by quantitative real-time PCR and Western blot, respectively.Results Compared with the control group, acetylcholine-induced vasodilatation was impaired by high glucose. Meanwhile, the structures of endothelial cells and smooth muscle cells were also interrupted. Furthermore, the expressions of PPARβ mRNA and protein reduced while the NF-κB p65 expression increased significantly which occurred in parallel with decreasing eNOS expression and NO concentration (P<0.01). GW0742 (0.01, 0.1, 1 μmol·L-1) restored the relaxation of acetylcholine in a dose-dependent manner, and reversed the mRNA and protein expression of PPARβ, NF-κB p65 and eNOS, as well as NO content (P<0.01).Conclusion GW0742 attenuates the injury of endothelial dysfunction induced by high glucose, which may be, at least partly, mediated by the up-regulation of PPARβ, then the down-regulation of NF-κB, and the activation of eNOS-NO signal pathway.

GW0742; high glucose; endothelial dysfunction; PPAR β; NF-κB; eNOS; NO

時(shí)間：2015-11-24 11:00 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20151124.1100.020.html

2015-08-14,

2015-09-15

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(NO 81100905)

薛 萊(1992-)，女，碩士，研究方向：心血管藥理學(xué)，E-mail：15086788387@163.com； 蔣青松(1972-)，女，博士，教授，研究方向：心血管藥理學(xué)，通訊作者，Tel：023-68485161；E-mail：cqjiangqs@163.com

10.3969/j.issn.1001-1978.2015.12.010

A

1001-1978(2015)12-1675-07

R-332； R322.121；R329.24；R972.4；R977.6