陳嬌婷詹怡飛

1.贛南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，江西 贛州 341000；2.杭州民生藥物研究院有限公司，浙江 杭州 311121

HPLC法枸櫞酸托法替布的含量

陳嬌婷1詹怡飛2

1.贛南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，江西 贛州 341000；2.杭州民生藥物研究院有限公司，浙江 杭州 311121

目的：采用高效液相色譜法測(cè)定片劑中枸櫞酸托法替布的含量。方法：以十八烷基硅烷鍵和硅膠為填充劑；以乙腈－0.05 mol／L磷酸二氫鈉（80∶20）為流動(dòng)相A，以乙腈－0.05 mol／L磷酸二氫鈉（20∶80）為流動(dòng)相B，梯度洗脫；柱溫為35℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為286 nm。結(jié)果：線性范圍為20.02～100.23mg／ml（R＝0.9998）；樣品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定；平均回收率為99.91%，RSD＜1.0%（n＝9）。結(jié)論：采用高效液相色譜法測(cè)定枸櫞酸托法替布的含量，方法靈敏度高，專屬性強(qiáng)，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

HPLC；枸櫞酸托法替布片；含量測(cè)定

枸櫞酸托法替布（tofacitinib citrate）為美國(guó)輝瑞公司（Pfizer）研發(fā)的的一種JAK3激酶抑制劑［1］，臨床主要用于對(duì)甲氨蝶呤治療反應(yīng)不足或不耐受的中度至重度活動(dòng)性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 （RA）的治療。目前，多數(shù)RA藥物通過(guò)對(duì)細(xì)胞外靶點(diǎn)進(jìn)行調(diào)控來(lái)治療RA，而托法替布以細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路為靶點(diǎn)，直接作用于細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的核心部分［2］。托法替布（tofacitinib）對(duì)JAK3的抑制強(qiáng)度是JAK1、JAK2的5～100倍［3］，是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療的首創(chuàng)藥物（first－in－class drug）。2012年美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局 （FDA）批準(zhǔn)該物質(zhì)為藥品上市。筆者對(duì)片劑中枸櫞酸托法替布的含量檢測(cè)方法進(jìn)行探索，為枸櫞酸托法替布片劑的質(zhì)量控制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器和材料

1.1 儀器 Agilent 1200高效液相色譜儀（包括四元泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、VWD檢測(cè)器，美國(guó)Agilent公司）；AB265－S電子天平 （瑞士梅特勒－托利多有限公司）。

1.2 材料 枸櫞酸托法替布片（杭州民生藥業(yè)有限公司）；枸櫞酸托法替布對(duì)照品（批號(hào)：120109－178146，中國(guó)生物制品檢定所）；甲醇為色譜純；磷酸二氫鉀為分析純；水為超純水；其它試劑為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1 溶液的配制

2.1.1 供試品溶液 取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量細(xì)粉（相當(dāng)于15mg枸櫞酸托法替布），置25m l量瓶中，加流動(dòng)相超聲溶解并稀釋至刻度；精密量取1.0ml置10ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.1.2 對(duì)照品溶液 精密稱取枸櫞酸托法替布對(duì)照品10mg，置50ml量瓶中，加流動(dòng)相超聲溶解并稀釋至刻度；精密量取3.0ml置10ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為對(duì)照品溶液。

2.1.3 空白輔料溶液 取本品的空白輔料混合物0.2g，置50m l量瓶中，加流動(dòng)相超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為空白輔料溶液。

2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵和硅膠為填充劑；以乙腈－0.05mol／L磷酸二氫鈉（80∶20）為流動(dòng)相A，以乙腈－0.05mol／磷酸二氫鈉（20∶80）為流動(dòng)相B，按表1進(jìn)行梯度洗脫。流速：1.0ml／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：286nm。理論板數(shù)按托法替布峰計(jì)算不低于3500。

2.3 空白輔料干擾試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液，對(duì)照品溶液和空白輔料溶液各10μl，注入色譜儀中，記錄色譜圖。在托法替布相應(yīng)的保留時(shí)間處，空白輔料溶液無(wú)相關(guān)吸收峰，對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。

表1 不同洗脫時(shí)間的流動(dòng)相變化

2.4 線性關(guān)系考察 取枸櫞酸托法替布對(duì)照品約5mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加流動(dòng)相超聲溶解并稀釋至刻度；精密量取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml置10ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，制成梯度濃度溶液；精密量取10μl，記錄峰面積，以峰面積A為縱坐標(biāo)，樣品濃度C（以枸櫞酸托法替布計(jì)）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程y＝536x＋3.28，r＝0.9998。試驗(yàn)結(jié)果表明，枸櫞酸托法替布在20.02～100.23mg／ml之間，濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 取線性及范圍項(xiàng)下的0.06mg／m l溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，考察儀器精密度。結(jié)果RSD為0.87%（n＝6），表明儀器的精密度較好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取線性及范圍項(xiàng)下的0.06mg／m l溶液，分別在0、2、4、6、8h進(jìn)樣10μl，計(jì)算其含量。RSD為1.32%（n＝5），表明樣品溶液在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定，可以滿足樣品測(cè)試要求。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品6份，按照供試品溶液配制方法配制溶液，進(jìn)樣10μl，樣品含量平均值為99.53%，RSD為1.47%（n＝6）。表明該方法的重復(fù)性較好。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

2.8 中間精密度試驗(yàn) 由不同試驗(yàn)人員于不同時(shí)間使用不同儀器，照上述方法測(cè)定同一批號(hào)樣品的含量，平行測(cè)定6次。結(jié)果樣品的平均含量98.49%，RSD為1.52%，表明該方法的中間精密度較好。

2.9 回收率試驗(yàn) 采用模擬回收率試驗(yàn)方法，取本品12、15、18mg各三份，分別于25ml容量瓶中，加入空白輔料0.2g，加流動(dòng)相超聲溶解并稀釋至刻度，精密量取1ml至10m l容量瓶，按照上述條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算含量和回收率。結(jié)果平均回收率為99.91%，RSD＜1.0%（n＝9），見(jiàn)表2。2.10 樣品含量測(cè)定 取樣品三批，按照“2.1.1”項(xiàng)下制備方法制備供試品溶液，進(jìn)樣10μl，采用外標(biāo)法，以峰面積計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 三批樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 檢測(cè)方法的篩選 枸櫞酸托法替布含量測(cè)定方法學(xué)考察過(guò)程中，曾試過(guò)不同的流動(dòng)相進(jìn)行試驗(yàn)，試圖通過(guò)等梯度的流動(dòng)相，將枸櫞酸托法替布分離出來(lái)，達(dá)到系統(tǒng)適用性的要求，試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)其效果并不明顯。因此采用不同梯度的流動(dòng)相進(jìn)行洗脫。

3.2 溶液配制方法 枸櫞酸托法替布片規(guī)格為5mg，單片片重比較小，供試品溶液和對(duì)照品的溶液，最終選擇2次配置的方式來(lái)實(shí)現(xiàn)，這有助于檢測(cè)人員操作，減少實(shí)驗(yàn)相對(duì)誤差。

［1］范鳴.抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥Tofacitini［J］.藥學(xué)進(jìn)展，2011，35（10）：480.

［2］Kunihiro Y，Satoshi K，Koshiro S，et al.JAK inhibitor：tofacitinib，a new diseasemodifying anti－rheumatic drug［J］.Inflamm Regener，2011，31（4）：349－353.

［3］Vijayakrishnan L，Venkataramanan R，Gulati P.Treating inflammation with the janus kinase inhibitor CP－690550［J］.Trends Pharm Sci，2011，32（1）：25－34.

Determ ination of Tofacitinib Citrate in Tablets by HPLC

CHEN Jiaoting1ZHAN Yifei2
1.Gannan Medical University，JiangXi Provice，Ganzhou 341000，China；2.Hangzhou minsheng drug research institute co.，LTD，Hangzhou 311121，China.

Objective To establish the HPLCmethod for the determination of contentof tofacitinib citrate tablets.M ethods Octadecyl silane and silica were used as the stationary phase.Themobile phase was consisted of A（acetonitrile：0.05 mol／L sodium dihydrogen phosphate＝80∶20）and B（acetonitrile∶0.05 mol／L sodium dihydrogen phosphate＝20∶80）.The column temperature was 35℃.The detection wavelength was286 nm.Results Themethod was proved to be linear in the range of20.02～100.23mg／ml（R＝0.9998）；Sample solution was stable in 8h，which the average recovery was99.91%，RSD＜1.0%and the repetity was 1.47%. Conclusion Themethod was sensitive，specific，reliable.

HPLC；Tofacitinib citrate tablets；Content determination

R927.2

A

1007－8517（2015）17－0023－02

2015.05.18）