王 英， 王振玲， 繆小平， 彭勁松△

Meta分析

MicroRNA基因多態(tài)性與肝細(xì)胞癌遺傳易感性的Meta分析＊

王 英1， 王振玲2， 繆小平3， 彭勁松1△

1武漢市疾病預(yù)防控制中心病毒科，武漢 430015
2華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院醫(yī)院感染管理科，武漢 430030
3華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計學(xué)系，武漢 430030

目的 綜合評價microRNA基因多態(tài)性與肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）遺傳易感性的關(guān)系。方法 全面檢索相關(guān)文獻(xiàn)，收集2014年9月前有關(guān)microRNA基因多態(tài)性與HCC易感性的病例對照研究，使用Stata 10.0進(jìn)行Meta分析。結(jié)果 最終納入病例對照研究13項。分析結(jié)果顯示miR-146aG＞C（rs2910164）和miR-196a-2 C＞T（rs11614913）等位基因多態(tài)性與HCC發(fā)生風(fēng)險顯著相關(guān)，其相對危險度（odds ratio，OR）和95%置信區(qū)間（confidence interval，CI）分別為0.92（0.87～0.98）和0.90（0.82～0.98），分層分析結(jié)果提示，miR-146a多態(tài)性和HCC之間的顯著相關(guān)性僅存在于男性和亞洲人群中。結(jié)論 miR-146a和miR-196a-2基因多態(tài)性與HCC的遺傳易感性相關(guān)，其C和T等位基因會降低HCC的發(fā)病風(fēng)險。

MicroRNA； 基因多態(tài)性； 肝細(xì)胞癌； Meta分析

肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是世界范圍內(nèi)惡性程度高、預(yù)后差的常見惡性腫瘤。大量的科學(xué)研究表明HCC的發(fā)生、發(fā)展過程極其復(fù)雜，不僅牽涉到環(huán)境相關(guān)致癌因素，而且涉及多基因遺傳因素，尤其是單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism，SNP）的影響。microRNA是一類由幾個核苷酸構(gòu)成的非編碼調(diào)控RNA家族，其通過與靶基因堿基互補(bǔ)配對，調(diào)節(jié)基因表達(dá)［12］。microRNA表達(dá)譜分析顯示，在正常組織和肝細(xì)胞癌組織之間，以及其他類型的肝癌組織之間均存在特異性的microRNA標(biāo)記［3－4］。研究發(fā)現(xiàn)，microRNA主要通過作用于關(guān)鍵基因，調(diào)控其表達(dá)，從而影響細(xì)胞增殖、逃避凋亡和轉(zhuǎn)移，并最終導(dǎo)致腫瘤形成。目前關(guān)于microRNA多態(tài)性與HCC易感性研究已有很多，主要集中在2個多態(tài)性位點(diǎn):miR-146aG＞C（rs2910164）和miR-196a-2C＞T（rs11614913），然而各研究間的結(jié)論并不一致［5－17］。因此，我們試圖通過Meta分析，將以上多態(tài)性位點(diǎn)與HCC易感性的相關(guān)病例對照研究進(jìn)行整合，以期更加系統(tǒng)、準(zhǔn)確地評價兩者間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 文獻(xiàn)檢索

在PubMed、ISI Web of Science等英文數(shù)據(jù)庫中以“microRNA，polymorphism，liver neoplasms，hepatocellular carcinoma”為檢索詞，在CNKI、維普、萬方等中文數(shù)據(jù)庫中以“microRNA，多態(tài)性，肝癌，肝細(xì)胞癌”為檢索詞全面檢索截止于2014年9月公開發(fā)表的相關(guān)文獻(xiàn)，無語種限制，并采用參考文獻(xiàn)回溯法以期尋找到更多的研究。

1.2 文獻(xiàn)的納入標(biāo)準(zhǔn)

①文中對HCC診斷明確；②分析microRNA多態(tài)性與HCC易感性的病例對照研究；③文中提供相關(guān)基因型的頻數(shù)分布，或有足夠的信息能計算出相關(guān)等位基因的頻數(shù)分布；④對照組基因型頻率分布滿足Hardy-Weinberg遺傳平衡。綜述、摘要、動物實驗及病例報告類研究未被納入本研究。

1.3 數(shù)據(jù)提取

每篇文獻(xiàn)由2名作者獨(dú)立進(jìn)行數(shù)據(jù)的提取，不一致時商討解決。提取的信息依次為:作者、發(fā)表年份、研究樣本國家、種族、病例組及對照組的樣本量、在病例組及對照組中的等位基因頻數(shù)。

1.4 質(zhì)量評估

每篇納入的文獻(xiàn)由2名研究者進(jìn)行質(zhì)量評估，評估標(biāo)準(zhǔn)雙向考慮了傳統(tǒng)流行病學(xué)和腫瘤遺傳學(xué)因素［1819］。具體評估內(nèi)容包括:①病例來源情況；②對照來源情況；③用于基因分析的標(biāo)本來源情況；④對照組Hardy-Weinberg遺傳平衡情況；⑤每個研究的樣本量。評估滿分15分，≥10分則表示文獻(xiàn)的質(zhì)量較好。

1.5 統(tǒng)計分析

擬合優(yōu)度檢驗用于評價各研究的對照樣本相關(guān)基因型分布是否滿足Hardy-Weinberg遺傳平衡。異質(zhì)性評價采用Q統(tǒng)計量，若Q統(tǒng)計量的P異質(zhì)性＜0.1表明各研究間存在顯著異質(zhì)性，采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行合并，反之則采用固定效應(yīng)模型。隨后使用各研究中病例組及對照組相關(guān)等位基因的頻數(shù)分布進(jìn)行Meta分析，根據(jù)研究對象種族和性別進(jìn)行分層分析。使用相對危險度（OR）和95%置信區(qū)間（CI）作為結(jié)局變量來評價多態(tài)性和HCC之間的關(guān)聯(lián)。采用Begg’s漏斗圖和Egger’s回歸檢驗識別發(fā)表偏倚，并通過敏感性分析評價結(jié)果的穩(wěn)定性。所有P值均為雙側(cè)檢驗，顯著性水平為0.05。統(tǒng)計分析均在Stata 10.0軟件中完成。

2 結(jié)果

2.1 納入文獻(xiàn)的基本情況

本次Meta分析最終納入文獻(xiàn)13篇，包括病例對照研究13項，累計病例4 948例，對照6 466例，在這13篇文獻(xiàn)中，2篇是關(guān)于高加索人種的研究，其余11篇是關(guān)于亞洲人種的研究。研究的發(fā)表時間2008～2014年，研究的樣本量為300～2 644。納入本研究的文獻(xiàn)質(zhì)量評分均≥10分，表明質(zhì)量較好。見表1。

表1 納入Meta分析中的所有研究Table1 Characteristics of studies included in Meta-analysis

2.2 miR-146a G＞C多態(tài)性與HCC易感性的關(guān)聯(lián)

異質(zhì)性檢驗結(jié)果顯示各研究間異質(zhì)性不顯著（P異質(zhì)性＝0.103，I2＝38.2%），因而使用固定效應(yīng)模型進(jìn)行數(shù)據(jù)的合并。合并后的OR值具有統(tǒng)計學(xué)意義（OR＝0.92，95%CI＝0.87～0.98，P＝0.010），表明miR-146aG＞C多態(tài)性與HCC易感性顯著相關(guān)（圖1）。根據(jù)人種進(jìn)行的分層分析結(jié)果顯示，在亞洲人中miR-146aG＞C多態(tài)性與HCC易感性顯著相關(guān)（OR＝0.92，95%CI＝0.85～1.00，P＝0.052），而在高加索人中此關(guān)聯(lián)性消失（OR＝1.09，95%CI＝0.79～1.50，P＝0.619）。隨后根據(jù)性別進(jìn)行的分層分析，結(jié)果顯示男性的miR-146aG＞C多態(tài)性與HCC遺傳易感性存在顯著關(guān)聯(lián)（OR＝0.82，95%CI＝0.69～0.96，P＝0.017），但未能檢測到女性miR-146aG＞C多態(tài)性與HCC之間的關(guān)聯(lián)（OR＝1.22，95%CI＝0.76～1.96，P＝0.419）。

圖1 miR-146aG＞C多態(tài)性與肝細(xì)胞癌易感性關(guān)系的森林圖Fig.1 The forest plots of the relationship between the miR-146aG＞C polymorphism and genetic susceptibility of HCC

2.3 miR-196a-2 C＞T多態(tài)性與HCC易感性的關(guān)聯(lián)

異質(zhì)性檢驗結(jié)果顯示各研究間存在顯著異質(zhì)性（P異質(zhì)性＝0.080，I2＝43.2%），因而使用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行數(shù)據(jù)的合并。合并后的OR值具有統(tǒng)計學(xué)意義（OR＝0.90，95%CI＝0.82～0.98，P＝0.014），表明miR-196a-2C＞T多態(tài)性與HCC易感性顯著相關(guān)（圖2）。根據(jù)人種進(jìn)行的分層分析結(jié)果顯示，在亞洲人中miR-196a-2C＞T多態(tài)性與HCC易感性顯著相關(guān)（OR＝0.91，95%CI＝0.86～0.97，P＝0.003），在高加索人中同樣檢測到此關(guān)聯(lián)性（OR＝0.66，95%CI＝0.49～0.89，P＝0.006）。由于男女分層后的文獻(xiàn)量較少，故未進(jìn)行性別分層分析。

圖2 miR-196a-2C＞T多態(tài)性與肝細(xì)胞癌易感性關(guān)系的森林圖Fig.2 The forest plots of the relationship between the miR-196a-2C＞T polymorphism and genetic susceptibility of HCC

2.4 發(fā)表偏倚和敏感性分析

以各研究的OR值及其標(biāo)準(zhǔn)誤的對數(shù)值繪制漏斗圖，結(jié)果顯示漏斗圖基本對稱。同時采用Egger’s回歸對漏斗圖的對稱性進(jìn)行檢驗，結(jié)果表明不存在發(fā)表偏倚（miR-146aG＞C:P＝0.506；miR-196a-2 C＞T:P＝0.843）。敏感性分析結(jié)果顯示，排除或納入任何一項研究后所得的結(jié)果不具顯著性差異，提示本次Meta分析結(jié)果是穩(wěn)定的。

3 討論

MicroRNA是目前生物學(xué)領(lǐng)域中備受矚目的非編碼調(diào)控RNA，多數(shù)microRNA與靶基因3′-端非翻譯區(qū)（3′untranslated region，3′UTR）結(jié)合，從而抑制基因表達(dá)。MicroRNA幾乎參與所有與基因表達(dá)相關(guān)的生物學(xué)過程，包括細(xì)胞分化、增殖、凋亡及癌變［20－22］。因此，microRNA的遺傳變異與多種疾病相關(guān)，包括惡性腫瘤。本研究通過Meta分析，探索microRNA多態(tài)性是否和HCC易感性相關(guān)。研究結(jié)果顯示，miR-146a以及miR-196a-2與HCC遺傳易感性顯著相關(guān)，其OR和95%CI分別為0.92（0.87～0.98）、0.90（0.82～0.98）。

此外，根據(jù)不同種族進(jìn)行的分層分析結(jié)果顯示，miR-146a在亞洲人群中，而非高加索人群中具有統(tǒng)計學(xué)意義，這提示microRNA多態(tài)性與HCC的關(guān)聯(lián)性受到種族因素的影響。根據(jù)性別的分層分析顯示，男性miR-146a與HCC遺傳易感性相關(guān)，而在女性中則不存在關(guān)聯(lián)。有文獻(xiàn)報道遺傳多態(tài)性在疾病中的作用與性激素水平相關(guān)，這提示miR-146a在HCC發(fā)病機(jī)制中可能與性激素水平存在交互作用，導(dǎo)致了miR-146a和HCC的相關(guān)性在男女中的不同結(jié)果［23］。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)miR-146a以及miR-196a-2多態(tài)性與HCC易感性存在明顯關(guān)聯(lián)，然而由于本次Meta分析納入的文獻(xiàn)數(shù)量有限，且各研究間樣本中的性別比例、對照組匹配條件等因素存在差異，可能對結(jié)果造成一定影響，因此miR-146a以及miR-196a-2多態(tài)性與HCC易感性之間的關(guān)系仍需進(jìn)一步探討。

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（2014-09-02 收稿）

Relationship between MicroRNA Polymorphisms and Genetic Susceptibility of Hepatocellular Carcinoma:A Meta-analysis

Wang Ying1，Wang Zhenling2，Miao Xiaoping3et al
1Virus Laboratory，Wuhan Center for Disease Control and Prevention，Wuhan 430015，China
2Department of Infection Management，Tongji Hospital，Tongji Medical College，Huazhong University of Science and Technology，Wuhan 430030，China
3Department of Epidemiology and Health Statistic，School of Public Health，Tongji Medical College，Huazhong University of Science and Technology，Wuhan 430030，China

Objective To comprehensively evaluate the relationship between microRNA polymorphisms and genetic susceptibility of hepatocellular carcinoma（HCC）.Methods Multiple electronic databases were searched to identify studies assessing the relationship between microRNA polymorphisms and genetic susceptibility of HCC up to September 2014.Data from casecontrol studies were analyzed using Stata 10.0.Results Thirteen case-control studies were finally selected.In overall meta-analysis，miR-146aG＞C（rs2910164）and miR-196a-2C＞T（rs11614913）polymorphisms could significantly decrease the risk of HCC.The odds ratio（95%confidence interval）for miR-146aand miR-196a-2was 0.92（0.87－0.98）and 0.90（0.82－0.98），respectively.The stratified analysis indicated that associations between miR-146apolymorphism and HCC were significant in Asian and male populations.Conclusion The miR-146aand miR-196a-2polymorphisms are associated with the genetic susceptibility of HCC and the allele of C and T can decrease the risk of developing HCC.

microRNA； polymorphism； hepatocellular carcinoma； meta-analysis

R735.7

10.3870／j.issn.1672-0741.2015.03.027

＊2012年武漢市創(chuàng)新人才開發(fā)資金資助項目

王 英，女，1979年生，副主任技師，醫(yī)學(xué)博士，E－mail:wangy727＠gmail.com

△通訊作者，Corresponding author，E-mail:15926205219＠163.com