馮 偉，張烜明，麻武仁，高媛媛，陳 穎，任美美，宋曉平＊

（1.西北農(nóng)林科技大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院中獸醫(yī)藥研究所，陜西楊凌 712100；2.天津嘉立荷牧業(yè)有限公司，天津?qū)幒?301508）

奶牛子宮內(nèi)膜炎是奶牛產(chǎn)后多發(fā)的生殖系統(tǒng)疾病，是導(dǎo)致奶牛不孕癥的最常見原因，危害也最為嚴(yán)重［1－2］。研究表明，我國奶牛子宮內(nèi)膜炎的發(fā)病率在16.7%～68.3%之間，而60%～90%的不孕癥由子宮內(nèi)膜炎引起［3－4］。近年來，國內(nèi)外科研人員一直致力于奶牛子宮內(nèi)膜炎的預(yù)防控制和無抗治療研究，中藥制劑在子宮內(nèi)膜炎防治方面以其安全性高 、低殘、低毒和不易產(chǎn)生耐藥性等突出優(yōu)點(diǎn)倍受國內(nèi)外專家關(guān)注［5］。本試驗(yàn)在前期中藥復(fù)方篩選及藥效研究基礎(chǔ)上，對優(yōu)化的中藥復(fù)方灌注液進(jìn)行奶牛子宮內(nèi)膜炎自然病例進(jìn)行試驗(yàn)性臨床觀察，旨在為治療奶牛子宮內(nèi)膜炎新中獸藥的進(jìn)一步研發(fā)和應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)用藥物 連翹、黃連、丹參、紅花等藥材為西安萬壽路藥材批發(fā)市場產(chǎn)品。雙黃連注射液，主要成分為黃芩、金銀花、連翹、梔子等，批號220486120，規(guī)格10mL／支，由某藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。

1.1.2 試驗(yàn)用動物 2014年3月～4月從寶雞某良種奶牛場挑選年齡3歲～5歲，胎次1胎～2胎的產(chǎn)后荷斯坦奶牛48頭，其中確診為急性奶牛子宮內(nèi)膜炎病牛40頭和臨床健康奶牛8頭。

1.1.3 主要儀器設(shè)備 CA－500血細(xì)胞分析儀為上海泰益醫(yī)療設(shè)備有限公司產(chǎn)品；SHB－B95A型循環(huán)水式多用真空泵為鄭州長城科工貿(mào)有限公司產(chǎn)品；SXKW數(shù)顯電熱套為北京中興偉業(yè)儀器有限公司產(chǎn)品；GG－9030A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱為上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司產(chǎn)品；HH－2型電熱恒溫水浴鍋為北京科偉永興儀器有限公司產(chǎn)品；XSP－8C生物顯微鏡為青島富堡精密儀器有限公司產(chǎn)品；TDL－40B低速臺式大容量離心機(jī)為上海安亭科學(xué)儀器廠產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 中藥復(fù)方灌注液的制備 稱取連翹、黃連、丹參、紅花等原料藥各100g，加6 000mL蒸餾水煎煮1h，過濾，重復(fù)3次，合并煎煮液濃縮至小體積，冰箱靜置沉淀12h，離心，過濾，收集藥液，減壓濃縮至每毫升含原生藥材1g，灌裝每瓶100mL，流通蒸汽滅菌30min即可。

1.2.2 中藥復(fù)方灌注液的治療試驗(yàn)

1.2.2.1 急性子宮內(nèi)膜炎診斷標(biāo)準(zhǔn) ①臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)：產(chǎn)后奶牛，連續(xù)3d體溫高于39.5℃，精神沉郁。陰道檢查，可見陰道充血腫脹。直腸觸診子宮角增粗，子宮頸口附著濃稠膿性分泌物，子宮收縮反應(yīng)消失，疼痛感明［6］；②實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn)：采集子宮頸口黏液進(jìn)行涂片、固定、染色，在油鏡下對100個視野進(jìn)行白細(xì)胞計數(shù)。白細(xì)胞平均數(shù)少于10個判為（－），白細(xì)胞平均數(shù)11個～30個判為（＋），白細(xì)胞平均數(shù)31個～80個判為（＋＋），白細(xì)胞平均數(shù)81個～150個判為（＋＋＋），白細(xì)胞平均數(shù)150個以上判為（＋＋＋＋）［7］。用血細(xì)胞分析儀測定試驗(yàn)牛血液中的白細(xì)胞數(shù)量，健康奶牛正常血液白細(xì)胞數(shù)為6×109個／L～12×109個／L，奶牛在發(fā)生感染時，白細(xì)胞數(shù)明顯增加可達(dá)15×109個／L～25×109個／L，極度增加可超過25×109個／L［8］。

1.2.2.2 試驗(yàn)動物分組及處理 將確診患有急性子宮內(nèi)膜炎的病牛40頭，隨機(jī)分為5組（A組～E組），每組8頭，其中E組為疾病對照組，不給藥；A、B、C組分別為中藥復(fù)方灌注液高、中、低劑量組，分別子宮內(nèi)灌注中藥復(fù)方灌注液150、100、50mL／次，隔天1次，連用3次；D組為陽性藥物對照組，子宮內(nèi)灌注雙黃連注射液100mL／次，隔天1次，連用3次，另選健康奶牛8頭作為健康對照組（F組）。試驗(yàn)期共計8d，在試驗(yàn)前1d和試驗(yàn)第7天時，對試驗(yàn)牛進(jìn)行一般臨床檢查、痊愈率和有效率分析、子宮頸口黏液白細(xì)胞計數(shù)、血液白細(xì)胞計數(shù)。

1.2.2.3 療效判定標(biāo)準(zhǔn) ①痊愈：用藥1個療程，病牛陰道色澤粉紅鮮亮，直腸檢查子宮角粗細(xì)恢復(fù)正常，子宮分泌物清亮透明，子宮收縮反應(yīng)明顯，無疼痛感，子宮頸口黏液白細(xì)胞檢查為（－），血液白細(xì)胞檢查回歸正常范圍，視為臨床痊愈；②顯效：用藥1個療程，病牛陰道色澤粉紅鮮亮、直腸檢查子宮角粗細(xì)恢復(fù)正常、子宮分泌物清亮透明和子宮收縮反應(yīng)明顯無疼痛感等指標(biāo)僅1項不合格，子宮頸口黏液白細(xì)胞檢查為（＋）及以下，血液白細(xì)胞檢查回歸正常范圍，視為臨床顯效，顯效數(shù)為痊愈數(shù)＋顯效數(shù)；③有效：用藥1個療程，病牛陰道色澤粉紅鮮亮、直腸檢查子宮角粗細(xì)恢復(fù)正常、子宮分泌物清亮透明和子宮收縮反應(yīng)明顯無疼痛感等指標(biāo)有2項不合格，子宮頸口黏液白細(xì)胞檢查為（＋＋）及以下，血液白細(xì)胞檢查回歸正常范圍，視為臨床有效，有效數(shù)為痊愈數(shù)＋顯效數(shù)＋有效數(shù)；④無效：用藥1個療程，臨床癥狀和陰道直腸檢查陰道子宮均無明顯好轉(zhuǎn)，甚至惡化，子宮頸口黏液白細(xì)胞檢查為（＋＋＋）或（＋＋＋＋），血液白細(xì)胞檢查超出正常范圍，視為無效［9］。

1.2.3 數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)用（ˉx±SD表示，應(yīng)用SPSS 17.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行鄧肯氏新復(fù)極差檢驗(yàn)法和卡方檢驗(yàn)，分析組間差異顯著性。

2 結(jié)果

2.1 臨床癥狀

用藥治療后第7天，中藥復(fù)方灌注液高、中劑量組大部分奶牛陰道黏膜粉紅鮮亮，子宮角粗細(xì)恢復(fù)正常，子宮收縮反應(yīng)明顯無疼痛感，分泌物較清亮透明，與健康組檢查結(jié)果一致。中藥復(fù)方灌注液低劑量組、陽性藥物對照組，部分牛陰道腫脹消退，子宮角粗細(xì)有所恢復(fù)，子宮收縮反應(yīng)明顯，疼痛感消失。

2.2 痊愈率和有效率

結(jié)果見表1。

表1 中藥復(fù)方灌注液的痊愈率和有效率Table 1 The cure and efficiency rate of Chinese herbal compound perfusate

2.3 子宮頸口黏液白細(xì)胞數(shù)的變化

結(jié)果見表2。在治療第7天時，中藥復(fù)方灌注液高、中劑量組（A，B組）與健康對照組（F組）差異不顯著（P＞0.05），且效果極顯著優(yōu)于低劑量組（C組）和陽性對照組（D）組（P＜0.01）（表2）。說明中藥復(fù)方灌注液高、中劑量組可顯著降低子宮頸口黏液白細(xì)胞數(shù)，且效果優(yōu)于陽性藥物對照組。

表2 治療前后子宮頸口黏液白細(xì)胞數(shù)量和等級Table 2 The number of leukocytes and grade level in the cervix mucus before and after the treatment

2.4 血液白細(xì)胞數(shù)的變化

結(jié)果見表3。在治療第7天時，中藥復(fù)方灌注液各劑量組（A，B，C組）和陽性對照組（D組）血液白細(xì)胞數(shù)極顯著低于疾病對照組（E組）（P＜0.01）且與健康對照組（F組）差異均不顯著（P＞0.05）。說明中藥復(fù)方灌注液在低劑量時即可極顯著降低血液白細(xì)胞數(shù)量。

表3 治療前后血液中的白細(xì)胞數(shù)量Table 3 The number of leukocytes in the blood before and after treatment 109個／L

3 討論

奶牛急性子宮內(nèi)膜炎臨床檢查主要包括精神狀態(tài)，陰道色澤、分泌物，子宮體狀態(tài)、子宮黏液白細(xì)胞數(shù)等，其中陰道色澤、分泌物及子宮狀態(tài)為主要指標(biāo)。本試驗(yàn)應(yīng)用中藥復(fù)方灌注液治療第7天時，高、中劑量組大部分牛陰道和子宮臨床癥狀改善明顯，子宮分泌物清亮透明、子宮頸口黏液及血液白細(xì)胞數(shù)明顯減少，說明中藥復(fù)方灌注液具有顯著抗炎作用，能顯著改善急性子宮內(nèi)膜炎主要臨床癥狀。該中藥復(fù)方灌注液主要由連翹、黃連、丹參、紅花等中藥組成。方中連翹具有清熱解毒、散結(jié)消腫之功效［10］。連翹及其主要成分對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、無乳鏈球菌均有較好抑菌作用［11－12］；黃連清熱解毒，其抗菌譜較廣，對革蘭陰性菌和陽性菌及病毒和真菌均有抑制作用［13］；丹參對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、變形桿菌、乙型鏈球菌有較好抑菌作用［14］，而大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、乙型鏈球菌又是奶牛子宮內(nèi)膜炎的常見菌；紅花屬于活血化淤藥，具有顯著擴(kuò)張血管、增加血流量、改善血液循環(huán)等作用［15］。前期試驗(yàn)結(jié)果表明，該中藥復(fù)方灌注液對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、鏈球菌等奶牛子宮內(nèi)膜炎常見致病菌具有顯著的體外抑菌作用，對小鼠試驗(yàn)性炎癥模型具有顯著的抗炎作用［16］。本試驗(yàn)結(jié)果表明，該中藥復(fù)方灌注液按劑量100mL／次子宮灌注，隔天1次，連用3次，對臨床奶牛急性子宮內(nèi)膜炎具有較好治療效果，這為防治奶牛子宮內(nèi)膜炎新中獸藥研發(fā)提供了重要參考資料。

［1］黃 璐，朱志謙，歐德淵，等.貴陽某奶牛場奶牛子宮內(nèi)膜炎主要致病菌的藥敏試驗(yàn)［J］.動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2013，34（5）：122－124.

［2］李德朋，張桂林，劉文博，等.中藥治療奶牛子宮內(nèi)膜炎的應(yīng)用進(jìn)展［J］.中國畜牧醫(yī)，2011，38（7）：168－170.

［3］郭世寧.防治奶牛子宮內(nèi)膜炎新型復(fù)方藥物制劑宮炎清的研究［D］.黑龍江哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2002.

［4］嚴(yán)作廷，楊志強(qiáng)，荔 霞.我國奶牛普通病防治現(xiàn)狀和發(fā)展對策［J］.中國奶牛，2011（12）：47－51.

［5］胡廣勝，王旭榮，楊 峰，等.奶牛子宮內(nèi)膜炎免疫調(diào)控研究進(jìn)展［J］.動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2013，34（11）：92－96.

［6］徐曉敏，張幼定，葉貴子，等.宮溯康預(yù)防奶牛產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎的臨床試驗(yàn)［J］.中國乳業(yè)，2012（6）：48－50.

［7］岳春旺，孫茂紅，段 剛，等.奶牛子宮內(nèi)膜炎綜述［J］.中國草食動物，2004（2）：44－46.

［8］王俊東，劉宗平.獸醫(yī)臨床診斷學(xué)［M］.2版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2010：187.

［9］何光中，劉 鏡，楊紅文，等.復(fù)方中草藥防治奶牛子宮內(nèi)膜炎的效果［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（25）：15387－15389.

［10］張海燕.連翹化學(xué)成分及藥理活性研究進(jìn)展［J］.中藥材，2000，23（10）：657.

［11］張祎娜，白佳樺，黃 正，等.連翹對奶牛子宮內(nèi)膜炎致病菌（乳房鏈球菌和無乳鏈球菌）生長曲線的影響［J］.中國農(nóng)學(xué)通報，2011，27（17）：54－57.

［12］羅 彬，張進(jìn)忠.連翹提取物化學(xué)成分研究［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（2）：143－146.

［13］張春靜.黃連藥理作用研究進(jìn)展概述［J］.科技創(chuàng)新與應(yīng)用，2013（5）：101.

［14］孫吉蘭，常云亭，宋海英，等.丹參的體外抑菌作用研究［J］.時珍國醫(yī)國藥，2003，14（12）：725.

［15］常海濤，韓宏星，屠鵬飛，等.中藥紅花化學(xué)成分及藥理作用［J］.國外醫(yī)藥：植物藥分冊，1999，14（5）：201－203.

［16］智曉燕.中藥及其復(fù)方對奶牛子宮內(nèi)膜炎病原菌抑菌活性及抗炎作用研究［D］.陜西楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2014.