周本宏等

【摘要】目的：優(yōu)選地榆中鞣質最佳提取工藝。方法：以提取物中總鞣質含量為指標，通過單因素試驗研究提取溶劑、料液比、超聲提取時間、超聲提取次數(shù)等四個因素對總鞣質提取率的影響，利用正交試驗確定地榆總鞣質最佳提取工藝。結果：地榆鞣質的最佳提取工藝為：12倍量的40%的乙醇，超聲提取2次，每次75min。在最佳條件下，提取率為9113% 。結論：該工藝合理可行，重復性好，地榆鞣質的提取率高。

【關鍵詞】地榆；鞣質；超聲提?。徽辉囼?/p>

【中圖分類號】R2842【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2015）01-0027-03

Abstract：Objective To optimize the extraction process of total tannins in Sanguisorba officinalis L. Methods Using total tannins as the index， the effect factors to extraction rate including solvent， ratio of solid to liquid， ultrasonic extraction time and ultrasonic frequency were investigated by single factor test， and the optimal conditions of extraction were obtained by orthogonal test. Result The extraction rate of total tannins in Sanguisorba officinalis L. was 9.113% under the optimal extracting conditions ethanol 40%， ratio of material to liquid 1∶12， extraction time 75 min and extracting for 2 times. Conclusion This extraction process is reasonable， feasible， repeatability and high rate of extraction.

Keywords：Sanguisorba officinalis L.；Tannins；Ultrasonic extraction；Orthogonal test

地榆來源于薔薇科植物地榆（Sanguisorba officinalis L.）或長葉地榆[Sanguisorba officinalis L.var. Longifolia （Bert.） Yǘ et Li]的干燥根，有涼血止血、解毒斂瘡之功效，用于便血、痔血、水火燙傷，其炮制品已應用于臨床。地榆含有多種化學成分，主要為鞣質、皂苷、黃酮類化合物，其中鞣質是主要的活性成分[1]。已有文獻報道，地榆鞣質能收縮血管，縮短凝血時間[2]，在抗腫瘤[3]、提高免疫力[4]等方面都有較好療效。

中藥中鞣質的提取常采用滲漉、浸漬、熱回流等方法，這些方法有一些缺點，如浸漬法、滲漉法提取時間長，不適合大量生產(chǎn)，而熱回流法對熱不穩(wěn)定成分不宜使用。超聲提取法近年來得到很大發(fā)展，它利用超聲波產(chǎn)生的強烈振動、高加速度、空化現(xiàn)象[5]等效應，加速目標物進入溶劑，縮短提取時間，節(jié)省有機溶劑，且適合熱敏性及氧化分解成分的提取[6]。本試驗采用超聲提取法，以鞣質提取率為指標，運用單因素試驗及正交試驗對鞣質提取影響因素進行考察，優(yōu)化提取條件，為地榆鞣質的進一步開發(fā)利用提供依據(jù)。

1儀器和試劑

11儀器KQ3200DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；UV-1800紫外可見光分光光度計（SHIMADZU CORPORATION）；HX1002T電子天平（慈溪市天東衡器廠）；TYS-100型高速多功能粉碎機（浙江省永康市紅太陽機電有限公司）。

12試藥生地榆飲片（購于湖北盛德堂中藥飲片有限公司，由武漢大學張洪教授鑒定，且符合《中國藥典》2010年版標準）；沒食子酸對照品（批號：MUST-13040103，成都曼斯特生物科技有限公司）；干酪素（北京奧博星生物技術責任有限公司）；磷鉬鎢酸（自制）；水為雙蒸水；其余試劑均為分析純。

2方法與結果

21鞣質含量測定[7]

211溶液制備①磷鉬鎢酸試液：取鎢酸鈉100 g，鉬酸鈉25g，加水700ml，使溶解，加鹽酸100ml、磷酸50ml，加熱回流10h，加硫酸鋰150g，水50ml，溴02ml，煮沸除去多余的溴，放冷，加水稀釋至1000ml，過濾，即得。②29%碳酸鈉試液：取無水碳酸鈉145g，加水溶解，定容至500ml，即得。③對照品溶液：精密稱取沒食子酸對照品125mg，置25ml棕色容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，精密量取5ml，至50ml棕色容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml中含有沒食子酸005mg）。④供試品溶液：取樣品液濾過，精密量取續(xù)濾液5ml置100ml棕色容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。

212標準曲線繪制精密量取對照品溶液05、10、20m、30、40、50ml，分別置25ml棕色容量瓶中，各加入磷鉬鎢酸試液1ml，再分別加入水115、110、100、90、80、70ml，用29%碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30min，以相應試劑為空白，按照紫外-可見分光光度法（《中國藥典》2010年版一部附錄VA）在760nm波長處測定吸光度。以吸光度（Y）為縱坐標，檢測濃度（X）為橫坐標，繪制標準曲線，結果見圖1。經(jīng)線性回歸，得回歸方程為Y=96093X+00339，R2=09995。結果表明，沒食子酸在10～100μg/ml范圍內(nèi)，線性關系良好。

213含量測定總酚量：精密吸取供試品溶液05ml，置25ml棕色量瓶中，照212項下方法測定吸光度，從標準曲線中讀出供試品中沒食子酸的量（mg），即得。

不被吸附的多酚量：精密量取供試品溶液25ml，加至已盛有干酪素06g的具塞錐形瓶中，置30℃水浴中保溫1h，時時振搖，取出，放冷，搖勻，過濾，精密取續(xù)濾液05ml，置25ml棕色量瓶中，按上述方法操作，測定吸光度，從標準曲線中讀出供試品中沒食子酸的量（mg），即得。

鞣質含量計算：鞣質的量（mg）=總酚量-不被吸附的多酚量

22單因素實驗

221提取溶劑對鞣質提取率的影響準確稱取5g經(jīng)粉碎后干燥的地榆粉11份，精密稱定，分別加入10倍量的20%、30%、40%、60%、80%乙醇；20%、40%、60%、70%、80%丙酮及水，浸泡1h，室溫，超聲提取60min，過濾，濾液定容至250ml為樣品液。按“213”項下方法測定，計算鞣質含量（鞣質含量=總鞣質質量/地榆質量×100%），結果見圖2。

3討論

研究根據(jù)《中國藥典》2010 年版一部附錄XB設計了鞣質含量測定方法，以沒食子酸作對照品，采用紫外-分光光度法測定吸光度并繪制標準曲線。以地榆根為原料，將提取物中總鞣質的含量作為指標，通過單因素的考察確定每個因素的三個條件，以正交實驗方法確定最佳提取工藝為12 倍量的40%乙醇，浸漬1h，超聲提取2次，每次75min，經(jīng)驗證表明該工藝穩(wěn)定可行。由于鞣質具有不穩(wěn)定，極性強的特點，該工藝在室溫下提取，且提取率高，時間短，有利于下一步鞣質的分離及純化，對鞣質的進一步加工有很好的指導意義。

參考文獻

[1]夏紅旻，孫立立，孫敬勇，等.地榆化學成分及藥理活性研究進展[J].食品與藥品，2009，11（7）：67-69.

[2]姜貴全.地榆中藥用活性成分提取工藝及穩(wěn)定性研究[D].哈爾濱：東北林業(yè)大學，2006.

[3]胡毅，夏天，趙建斌.地榆鞣質抗肝癌細胞SMMC-7721的MTT及FCM分析[J].第四軍醫(yī)大學學報，1998，19（5）：550-552.

[4]楊金輝，楊明，黃晶，等.地榆鞣質的制備及其對環(huán)磷酰胺致小鼠白細胞減少癥影響的初步研究[J].中國醫(yī)藥生物技術，2013，8（1）：41-45.

[5]周淑芳，韓麗副，謝秀瓊.現(xiàn)代中藥制劑新技術[M].北京：化學工業(yè)出版社，2004：30-31.

[6]李紅然，付大友.五倍子中有效成分提取方法研究進展[J].廣東化工，2010，37（10）：71.

[7]國家藥典委員會.中國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄99.

（收稿日期：20141009）