劉建軍等

【摘 要】 目的：以薯蕷皂苷元為對(duì)照品，建立黃精藥材及其炮制品的薄層色譜鑒別方法。方法：采用硅膠G高效預(yù)制板，以氯仿-乙酸乙酯（15∶1）為展開(kāi)劑上行展開(kāi)。結(jié)果：經(jīng)考察不同的提取方法，展開(kāi)劑和不同的展開(kāi)條件，確定了實(shí)驗(yàn)方法。應(yīng)用本方法對(duì)10批藥材及其不同炮制品進(jìn)行試驗(yàn)，斑點(diǎn)清晰，分離度好。結(jié)論：本鑒別方法操作簡(jiǎn)便、靈敏度高，可用于黃精藥材及炮制品的定性鑒別。

【關(guān)鍵詞】 黃精；薯蕷皂苷元；薄層鑒別

【中圖分類號(hào)】R2825 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2015）05-0014-03

Studies on TLC identification of Polygonatum and its processed products

LIU Jianjun1，LIU Ling2，XIA Jiao1，AO Jiao1，BAO Jiake3*

1Guiyang University of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550002，China； 2Guiyang University of Medicine，Guiyang 50004，China；3Guizhou Center for Drug Evaluation and Certification，Guiyang 550004，China

Abstract：[WTHZ]Objective[WTBZ] Using Diosgeni as reference substances to establish a TLC identification method for Polygonatum and its processed products.[WTHZ]Methods[WTBZ] The sample was separated by using chloroformethyl acetate（15∶1）and silica gel G high prefabricated plate.[WTHZ]Rsults[WTBZ] By studying the different extraction methods，developer and different deployment conditions，experiment method was confirmed.The application of this method to test 10 batches of medicinal herbs and its different processed products.The spots were clear and separated good.[WTHZ]Conclusion[WTBZ] This identification method had the advantages of simple operation，high sensitivity， which can be used for the qualitative identification of Polygonatum medicinal herbs and processed products.

Keywords：Polygonatum sibiricum；Diosgenin；TLC identification

黃精為百合科黃精屬植物滇黃精Polygonatum kingia-num Collet Hemsl、黃精Polygonatum sibiricum Red或多花黃精Polygonatum cyrtonema Hua的干燥根莖，按形狀不同，習(xí)稱大黃精、雞頭黃精、姜形黃精[1]。黃精味甘，性平，具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰、健脾、潤(rùn)肺、益腎的功效。據(jù)報(bào)道[2-3]，黃精主要含有多糖和皂苷類化合物，其中皂苷類化合物具有免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗疲勞、降血糖、降血脂、抗腫瘤和改善學(xué)習(xí)記憶等作用。在2010版中國(guó)藥典中，黃精藥材的薄層鑒別以藥材為對(duì)照品，為了進(jìn)一步強(qiáng)化其定性鑒別的手段，本文以薯蕷皂苷元為對(duì)照，建立黃精藥材的薄層鑒別方法。

1 儀器和材料

11 儀器 水浴鍋（DK-98-11A，天津市泰斯特儀器有限公司）；METTLER TOLEDO XS205分析天平；KQ-300DE型數(shù)控超聲波清洗器。

12 材料 硅膠G高效預(yù)制板（青島海洋化工廠分廠，批號(hào)：20131212）；硅膠G（青島海洋化工有限公司，批號(hào)：0120246）；薯蕷皂苷元（批號(hào)20130111）；藥材樣品經(jīng)貴州省食品藥品檢驗(yàn)所中藥檢測(cè)室鑒定為黃精藥材；所用試劑均為分析純。

2 藥材來(lái)源及炮制方法[4]

21 藥材來(lái)源 對(duì)主產(chǎn)地貴州省范圍內(nèi)的黃精進(jìn)行收集，由貴州省食品藥品檢驗(yàn)所李楊老師鑒定為Polygonatum sibiricum Red、Polygonatum cyrtonema Hua，來(lái)源見(jiàn)表1。

22 蒸黃精 取原藥材，除去雜質(zhì)，洗凈，大小分開(kāi)，略泡，潤(rùn)透，置適宜容器內(nèi)蒸8～12h，?；?，置容器內(nèi)悶過(guò)夜，取出，切厚片，干燥。

23 酒黃精 取原藥材，除去雜質(zhì)，洗凈，略泡，潤(rùn)透，置適宜容器內(nèi)蒸8～12h，切厚片，晾至半干；加酒拌勻，悶透，照酒蒸法（附錄一炮制通則）反復(fù)蒸至表面棕黑色，內(nèi)部深褐色，切厚片，干燥；或取蒸黃精片，照酒蒸法（附錄一炮制通則）反復(fù)蒸至表面棕黑色，內(nèi)部深褐色，干燥。

3 方法與結(jié)果

31 溶液制備方法

311 供試品溶液 取黃精藥材粉末（過(guò)二號(hào)篩）約2g，置錐形瓶中，加入50ml乙醇，超聲處理（功率160W，頻率40kHz）40min，搖勻，過(guò)濾。精密量取續(xù)濾液25ml，加石油醚（60～90℃）25ml，加鹽酸9ml，回流水解2h，冷卻，繼以石油醚（60～90℃）振搖提取3次，每次30ml，合并提取液，回收溶劑至干，殘?jiān)右掖既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加乙醇至刻度，即得。

312 對(duì)照品溶液 取薯蕷皂苷元對(duì)照品適量，精密稱定，制成濃度為004mg/ml的溶液。

32 色譜條件的優(yōu)化

321 展開(kāi)劑及展開(kāi)條件的考察和比較 通過(guò)一系列預(yù)試驗(yàn)，確定基本操作方法：分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，將展開(kāi)劑倒于展缸中預(yù)飽和30min，薄層板預(yù)飽和20min 展開(kāi)后，上行展開(kāi)，展距8cm。取出，晾干，噴以5%硫酸香草醛溶液顯色。

考察三氯甲烷-甲醇（4∶1）、石油醚-三氯甲烷（1∶1）、三氯甲烷-乙酸乙酯（4∶1）三種展開(kāi)系統(tǒng)，實(shí)驗(yàn)表明，只有三氯甲烷-乙酸乙酯（4∶1）可以達(dá)到將黃精藥材薄層色譜斑點(diǎn)展開(kāi)和分離的結(jié)果。經(jīng)進(jìn)一步對(duì)三氯甲烷-乙酸乙酯展開(kāi)系統(tǒng)的有關(guān)比例進(jìn)行調(diào)整，結(jié)果表明以三氯甲烷-乙酸乙酯（15∶1）展開(kāi)后，薯蕷皂苷元的Rf值合適且兩點(diǎn)能很好分離。結(jié)果見(jiàn)表2。

322 點(diǎn)樣方式和點(diǎn)樣量的比較 考察點(diǎn)狀點(diǎn)和條帶狀點(diǎn)兩種方式，結(jié)果顯示，點(diǎn)條帶狀點(diǎn)比較容易出現(xiàn)拖尾且斑點(diǎn)分離不明顯，點(diǎn)狀點(diǎn)斑點(diǎn)比較清晰。在點(diǎn)樣量為5μl時(shí)，薯蕷皂苷元溶液與供試品溶液斑點(diǎn)都過(guò)淺且日光下無(wú)法查看。當(dāng)點(diǎn)樣量增加到10μl時(shí)，薯蕷皂苷元溶液與供試品溶液分離效果明顯，斑點(diǎn)清晰。故確定薯蕷皂苷元與供試品溶液點(diǎn)樣量各為10μl。

323 薄層板的考察 分別考察了硅膠G預(yù)制板與硅膠G（批號(hào)：0120246）自制板兩種薄層板。結(jié)果表明：兩種薄層板上供試品與對(duì)照品的色譜行為基本一致，斑點(diǎn)清晰且能較好的分離。結(jié)果見(jiàn)圖1、2。

324 溫度影響的考察 分別在高溫（40℃）和低溫（4℃）進(jìn)行了考察：結(jié)果表明供試品和對(duì)照品在高溫和低溫時(shí)的色譜行為一致，各斑點(diǎn)能較好的分離，說(shuō)明在高溫和低溫條件下本方法具有良好的適應(yīng)性，結(jié)果見(jiàn)圖3、圖4。

325 濕度影響的考察 分別在高濕（72 %）、中濕（50 %）和低濕（18 %）條件下進(jìn)行考察，濕度以不同濃度的硫酸溶液進(jìn)行控制。將點(diǎn)樣后的薄層板放入展開(kāi)缸，另一側(cè)的展開(kāi)槽里放一定濃度的硫酸，密閉15～30min后再加展開(kāi)劑展開(kāi)。當(dāng)硫酸-水（100∶955，V/V）時(shí)，相對(duì)濕度為72%；當(dāng)硫酸-水（50∶100，V/V）時(shí)，相對(duì)濕度為50%；當(dāng)硫酸-水（275∶100，V/V）；時(shí)，相對(duì)濕度為18%。結(jié)果表明供試品和對(duì)照品在高濕、中濕和低濕環(huán)境各斑點(diǎn)均能實(shí)現(xiàn)較好的分離，說(shuō)明本方法具有良好的環(huán)境適應(yīng)性，結(jié)果見(jiàn)圖5-7。

326 色譜條件的確定 取供試品溶液與對(duì)照品溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一薄層板上，以氯仿-乙酸乙酯（15∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%硫酸香草醛試液，105℃下顯色后置日光下檢視。

4 樣品的測(cè)定

41 生黃精的測(cè)定結(jié)果 取10批黃精藥材，按“311項(xiàng)”下制備的供試品溶液后，按“326”確定的色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)圖8。

42 蒸黃精的測(cè)定結(jié)果 取10批蒸黃精，按“311項(xiàng)”下制備的供試品溶液后，按“326”確定的色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)圖9。

43 酒黃精的鑒定 取10批酒黃精，按“311項(xiàng)”下制備的供試品溶液后，按“326”確定的色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)圖10。

5 結(jié)論與討論

以薯蕷皂苷元為對(duì)照品的黃精藥材薄層鑒別方法曾有文獻(xiàn)報(bào)道[5]，但其所使用的展開(kāi)劑為苯與丙酮，因苯的毒性大，出于對(duì)試驗(yàn)人員安全和減少試驗(yàn)對(duì)環(huán)境污染考慮，本研究采用氯仿與乙酸乙酯作為展開(kāi)劑。該方法操作簡(jiǎn)單、分離度好、斑點(diǎn)清晰、經(jīng)對(duì)10批藥材及其不同炮制品進(jìn)行試驗(yàn)，均表明本薄層色譜鑒別方法重現(xiàn)性好，靈敏度高，可用于黃精藥材及炮制品的定性鑒別。

參考文獻(xiàn)

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（收稿日期：20141205）