武琳 黃菲 楊光

摘要：目的 建立復(fù)方羅布麻顆粒中木犀草苷的含量測定方法。方法 采用高效液相色譜法測定復(fù)方羅布麻顆粒菊花中木犀草苷的含量，采用Phenomenex luna C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為乙腈-0.5%冰醋酸（14∶86），流速為0.8 mL/min，檢測波長為348 nm。結(jié)果 木犀草苷在0.031 9～0.796 3 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=0.999 6），平均回收率為100.85%（n=6）。結(jié)論 本試驗(yàn)所建立的方法專屬性強(qiáng)、簡便，提高了制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，增強(qiáng)了本品的可控性。

關(guān)鍵詞：復(fù)方羅布麻顆粒；木犀草苷；高效液相色譜法

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2015.04.025

中圖分類號：R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1005-5304（2015）04-0091-03

Study on Determination Method of Luteolin-7-O-glucoside in Compound Luobuma Granule WU Lin， HUANG Fei， YANG Guang （Beijing Tongrentang Technologies Co. Ltd. Pharmaceutical Factory， Beijing 100079， China）

Abstract：Objective To establish determination method of luteolin-7-O-glucoside in Compound Luobuma Granule. Methods Phenomenex luna C18 column （4.6 mm×150 mm， 5 μm） was used；aceto-0.5% acetic acid （14∶86） was set as the mobile phase at flow rate of 0.8 mL/min；the detection wavelength was 348 nm. Results The linear range of luteolin-7-O-glucoside was in the range of 0.031 9-0.796 3 μg （r=0.999 6）， and the average recovery was 100.85% （n=6）. Conclusion The method is specific， simple， and can improve quality standard and increase the controllability of Compound Luobuma Granule.

Key words：Compound Luobuma Granule；luteolin-7-O-glucoside；HPLC

復(fù)方羅布麻顆粒為《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑·第六冊》收載的品種，由羅布麻葉、菊花、山楂組成，功能清熱、平肝、安神，用于高血壓、神經(jīng)衰弱引起的頭暈、心悸、失眠等癥。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只收載了理化鑒別和羅布麻葉的薄層色譜鑒別，對本品的質(zhì)量可控性較低。本試驗(yàn)采用高效液相色譜法（HPLC）對菊花中木犀草苷進(jìn)行測定，以提高復(fù)方羅布麻顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，增強(qiáng)其質(zhì)量可控性。

1 儀器與試藥

Agilent 1100高效液相色譜儀（二極管陣列檢測

器），METTLER TOLEDO XP205型電子分析天平（梅特勒-托利多國際股份有限公司），KQ-250DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，功率250 W，頻率40 kHz）。

木犀草苷對照品（供含量測定用，含量以99.3%計(jì)，批號11720-201106）購自中國食品藥品檢定研究院。復(fù)方羅布麻顆粒由北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制藥廠提供，批號分別為20110901、20110902、20110903。配制溶液所用試劑均為分析純，HPLC用試劑為高效液相級，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為Phenomenex luna C18（150 mm×4.6 mm， 5 μm）；流動相為乙腈-0.5%冰醋酸（14∶86）；流速0.8 mL/min；柱溫40 ℃；檢測波長348 nm；理論塔板數(shù)按木犀草苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取木犀草苷對照品適量，精密稱定，加70%甲醇制成每1 mL含30 ?g的溶液，即得。

2.3 供試品溶液制備

取本品適量，研細(xì)，取約3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，超聲處理（功率250 W， 頻率40 kHz）30 min，放冷，用70%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性對照溶液的制備

按處方中藥味比例，自配不含菊花的其他藥材，按其制備工藝制成陰性制劑，按“2.3”項(xiàng)下方法制備，即得。

2.5 空白干擾試驗(yàn)

精密吸取供試品溶液、對照品溶液、陰性對照溶液各10 μL，在上述色譜條件下進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果木犀草苷可與其他成分基線分離，陰性對照溶液在與木犀草芩苷對照品相同保留時間處未顯色譜峰，故認(rèn)為空白無干擾。色譜圖見圖1。

2.6 線性關(guān)系考察

分別精密吸取32.08 μg/mL木犀草苷對照品溶液（實(shí)際木犀草苷含量按99.3%計(jì)）1、3、5、7、10 μL和160.4 μg/mL木犀草苷對照品溶液（實(shí)際木犀草苷含量按99.3%計(jì)）3、4、5 μL注入液相色譜儀，測得峰面積，以對照品的進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程為Y=421.44X-1.204，r=0.999 6，用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算。結(jié)果表明木犀草苷在0.031 9～0.796 3 μg范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.7 精密度試驗(yàn)

取同一對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算木犀草苷峰面積的RSD為1.45%，表明儀器精密度良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、24 h進(jìn)樣測定，測得木犀草苷平均含量為0.148 7 mg/g， RSD=2.55%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一批號（20110901）的樣品6份，分別按“2.3”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，木犀草苷平均含量為0.153 5 mg/g， RSD=1.12%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.10 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的同一批號供試品（批號20110901，木犀草苷含量為0.153 5 mg/g）約1.5 g，分別精密加入8.02 μg/mL木犀草苷對照品溶液（實(shí)際木犀草苷含量按99.3%計(jì)）25 mL，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按上述色譜條件測定木犀草苷含量，平均回收率為100.85%，RSD=2.77%。結(jié)果見表1。

2.11 樣品含量測定

取3批樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，每批樣品測定3次，結(jié)果見表2。

3 討論

本試驗(yàn)在選擇復(fù)方羅布麻顆粒的含量測定指標(biāo)時，摸索過綠原酸、槲皮素、金絲桃苷、異槲皮苷的含量測定方法，但羅布麻葉、山楂、菊花中均含有上述4種成分，不能作為專屬性成分進(jìn)行鑒別和含量測定[1-5]，而木犀草苷只存在于菊花中，羅布麻葉和山楂中不含木犀草苷，故選擇菊花中的木犀草苷作為專屬性成分進(jìn)行含量測定[6]。

供試品溶液制備中，根據(jù)木犀草苷的性質(zhì)，比較了甲醇、50%乙醇、70%甲醇、乙醇超聲提取對木犀草苷提取率的影響，結(jié)果表明，70%甲醇超聲提取，所得木犀草苷的提取率最高，故選用70%甲醇。試驗(yàn)比較了超聲提取20、30、40 min不同時間木犀草苷的提取率，結(jié)果表明提取30 min已基本提取完全，因此確定提取時間為30 min，試驗(yàn)比較了20、30、40 ℃不同柱溫對分離度的影響，結(jié)果柱溫40 ℃時木犀草苷的分離度較好。

取木犀草苷對照品，加甲醇溶解，注入液相色譜儀，用二極管陣列檢測器進(jìn)行紫外全波長掃描（200～400 nm）。結(jié)果表明，木犀草苷在348 nm附近有最大吸收峰，且樣品空白無干擾，故選擇348 nm作為檢測波長。

試驗(yàn)對流動相進(jìn)行了選擇，比較了乙腈-0.5%冰醋酸（15∶85）和乙腈-0.5%冰醋酸（14∶86）2種流動相，發(fā)現(xiàn)用乙腈-0.5%冰醋酸（14∶86）比乙腈-0.5%冰醋酸（15∶85）作為流動相所得木犀草苷峰的峰型好且陰性無干擾，故采用乙腈-0.5%冰醋酸（14∶86）作為本品含量測定的流動相[7]。

綜上所述，本研究建立了HPLC測定復(fù)方羅布麻顆粒的菊花中木犀草苷含量的方法，該方法操作簡單、方便，專屬性強(qiáng)，提高了復(fù)方羅布麻顆粒的質(zhì)量可控制性。

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（收稿日期：2014-08-29）

（修回日期：2014-09-15；編輯：陳靜）