鄧高榮，吳炳華，高翔，董玉瑩，繆鋅，黃巍，凌強，李宗芳

(1南昌大學第四附屬醫(yī)院，南昌330003;2西安交通大學第二附屬醫(yī)院)

失血性休克是由各種致傷因素創(chuàng)傷后急性失血引起，嚴重危及患者生命健康，是外科急救領(lǐng)域亟需解決的問題。除了傳統(tǒng)的液體復(fù)蘇外，研究結(jié)果表明，組蛋白去乙酰化酶抑制劑(HDACIs)可抑制組織細胞程序性及非程序性死亡，故能減輕休克引起的重要器官功能損傷［1，2］，并顯著改善失血性動物生存狀況［3］，但國內(nèi)未見相關(guān)研究報道。我們于2012～2013年選取軟木酰苯胺氧肟酸(SAHA)和丙戊酸(VPA)兩個常用HDACIs治療重度失血性休克大鼠，觀察其對大鼠生存時間與12 h內(nèi)生存率的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 SPF清潔級健康成年SD雄性大鼠63只，體質(zhì)量317～405 g，由南昌大學動物實驗科學部提供。置于安靜、恒溫(20℃)、避光環(huán)境下適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d。微量注射泵(貝朗醫(yī)療，德國)、顯微外科器械(江蘇視卓醫(yī)療器械有限公司)、泰盟BL-420F生物機能實驗系統(tǒng)(成都泰盟軟件有限公司)、NOVA血氣分析儀(NOVA，美國)，血清乳酸試劑盒(南京建成生物)、戊巴比妥鈉(國藥集團化學試劑有限公司)、UV2450紫外可見光分光光度計(島津，日本)和PE50導(dǎo)管(上海必鼎它生物)等。藥物配制:使用前先將SAHA(Selleck，USA)溶解于DMSO做成母液，再將母液溶解于生理鹽水中配置成濃度為5 mg/mL的溶液;VPA(Sigma-Aldrich，美國)溶解于生理鹽水中配置成濃度30 mg/mL的溶液，經(jīng)孔徑0.22 μm針式過濾器過濾除菌。

1.2 動物分組及模型制備 所有大鼠實驗前6 h禁食，可正常飲水、自由活動;動物稱質(zhì)量后用2%戊巴比妥(30 mg/kg)腹腔注射麻醉。右側(cè)腹股溝及背部剪毛備皮、碘伏消毒，將PE50導(dǎo)管從背部皮下引至側(cè)腹股溝皮下。腹部斜行切口內(nèi)顯微技術(shù)分離股動靜脈，分別將PE50導(dǎo)管置入并固定于股動靜脈中，檢測導(dǎo)管通暢取2%肝素封管。將大鼠放置試驗臺等待麻醉清醒。采用股動靜脈導(dǎo)管分時放血法建立總失血量占總血量60%的重度休克大鼠模型。大鼠總血量計算公式［2］為:總血量(mL)=0.06×體質(zhì)量(g)+0.77。采用三段分時失血建模:第1個10 min內(nèi)快速動脈失血達總失血量的50%，第2個10 min動脈失血達總失血的30%，第3個10 min內(nèi)靜脈失血達總失血量的20%，最后控制模型平均動脈壓(MAP)為(45±5)mmHg者有效。成功建模48只，按照隨機原則將模型大鼠分成三組，即SAHA組、VPA組和對照組各16只。

1.3 動物處理 建模成功后，按照大鼠體質(zhì)量計算SAHA(8 mg/kg)和VPA(30 mg/kg)劑量再稀釋成1 mL，經(jīng)微量泵靜脈10 min泵入;VPA 1 mL腹部皮下注射;對照組等量生理鹽水靜脈推注。

最后通過貫徹和落實基層網(wǎng)絡(luò)黨建工作形式，實現(xiàn)黨建工作常態(tài)化的有效運轉(zhuǎn)，為此高?；鶎狱h建部門要將網(wǎng)絡(luò)改革放在工作模式創(chuàng)新的首要位置，建立其全面的、科學的、專業(yè)的黨建網(wǎng)絡(luò)工作平臺。大學生可以通過瀏覽黨建網(wǎng)站平臺的各種信息資源，加深學生對黨建部門的認知和了解，使其能夠積極主動的參與黨建部門開展的各種文化活動，在潛移默化中提高學生的思想政治素養(yǎng)[5]。此外高?；鶎狱h建工作還可以通過網(wǎng)絡(luò)平臺加強和學生的溝通交流，能夠及時發(fā)現(xiàn)和了解學生反饋的各種問題，幫助學生解決日常生活和學習中遇到的各種問題，推進基層黨建工作的積極開展。

動物建模的研究中發(fā)現(xiàn)，大鼠處于休克狀態(tài)后血壓具有很強的自我恢復(fù)調(diào)節(jié)能力，這種調(diào)節(jié)與休克程度密切相關(guān)。故在雙階段放血方式與梯度放血［4～6］的基礎(chǔ)上，我們改進為三段分時失血建模，擬模仿外傷失血的過程，該法與實際情況更相符。我們認為失血速度約為3.2 mL/10 min為理想的失血速度。其中，還應(yīng)該充分估計隱性失血，包括切口、皮下隧道及背部切口的失血。在股動靜脈顯露、分離及置管中盡可能采用顯微外科技術(shù)，這樣能夠提高造模的成功率，本實驗中造模成功率為76.19%(48/63)。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件。計量資料以±s表示，多組比較采用方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

由于腫瘤等疾病的發(fā)生與表觀遺傳學關(guān)系密切，表觀遺傳修飾中組蛋白乙酰化酶(HAT)和組蛋白去乙?；?HDACs)之間的動態(tài)平衡控制著染色質(zhì)結(jié)構(gòu)和基因表達，進而干擾疾病的發(fā)展進程。隨著對HAT/HDACs研究的深入，失血性休克能誘導(dǎo)HAT/HDACs的比例不平衡，進一步影響細胞組蛋白或非組蛋白的乙酰化狀態(tài)，HDACIs可以通過修正這種不平衡來改善組織器官的功能，故對各組織器官具有保護作用［7，8］。Zacharias等［9］還提出該機制涉及磷脂酰肌醇-3-羥基激酶及下游的蛋白激酶B，最后通過Bcl-2作為抗凋亡因子提高失血性休克動物的生存率。Gonzales等［10］使用 VPA和2-methyl-2-pentenoic acid(2M2P)治療失血40%大鼠休克模型，12 h后與對照組相比，VPA治療組70%和2M2P治療組12%大鼠存活，而對照組無一存活。VPA治療組12 h生存率遠高于本實驗的SAHA組(31.25%)和VPA組(12.50%)，主要因為本組模型為失血60%的重度休克。Hwabejire等［11］比較不同劑量VPA(300、400、450 mg/kg)治療失血40%的大鼠休克模型，發(fā)現(xiàn)不同劑量VPA對大鼠生存影響不明顯。Dekker等［12］采用 VPA+新鮮冰凍血漿(FFP)治療豬失血性休克復(fù)合大腦損傷的模型，實驗結(jié)果表明，其比單用FFP更明顯提高大腦血小板活化水平，最終增強治療效果。隨著工業(yè)化社會發(fā)展，失血性休克發(fā)病率正在逐年上升。因此，尋求在傳統(tǒng)液體復(fù)蘇、輸血及對癥處理之外的抗休克治療顯得尤其重要，HDACIs對失血性休克器官保護作用研究符合這一創(chuàng)新觀念［13］。

表1 三組體質(zhì)量、建模前MAP、手術(shù)時間、總失血量及血乳酸水平比較(±s)

表1 三組體質(zhì)量、建模前MAP、手術(shù)時間、總失血量及血乳酸水平比較(±s)

組別 n 體質(zhì)量(g) 建模前MAP(mmHg) 手術(shù)時間(min) 總失血量(mL) 血乳酸(mmol/L)對照組 16 356.6±20.05 113.63±3.44 22.7±1.17 13.3±0.72 7.06±0.83 SAHA組 16 355.8±21.15 112.26±3.46 22.7±1.01 13.3±0.77 7.46±0.88 VPA組 16 349.4±19.61 112.36±3.39 23.4±3.11 13.0±0.71 7.53±0.74

綜上所述，在當今的新媒體時代，對于報刊行業(yè)而言，提高報社記者新聞采編能力是尤為重要的，也是刻不容緩的。只有不斷的提升報刊記者的新聞采編能力，才能夠有效的提升報刊新聞的質(zhì)量，以此來逐步的提升報刊行業(yè)在當前新聞傳播領(lǐng)域的競爭力度，使其能夠可持續(xù)性的發(fā)展下去。

2.2 各組生存時間和12 h內(nèi)生存率比較 對照組生存時間(7.04±0.97)h、12 h內(nèi)生存率0，SAHA組分別為(11.86 ±2.35)、31.25%(5/16)，VPA 組分別為(10.56±1.56)h、12.50%(2/16)。SAHA組、VPA組生存時間、12 h內(nèi)生存率均高于對照組(P均＜0.05)，且SAHA組生存時間、12 h內(nèi)生存率高于VPA組(P均＜0.05)。

3 討論

1.4 觀察指標及方法 血乳酸測定按血清乳酸試劑盒操作;股動脈采血檢測血氣分析(RAPIDLab348血氣分析系統(tǒng)，德國)，采大鼠股動脈血0.5 mL滴入檢測試劑片中，收集其pH、PaO2、PaCO2等生理指標對模型進行驗證。經(jīng)驗證建模成功后按上述劑量與方式將相應(yīng)藥物注射后徹底堵管，注射青霉素抗感染。大鼠放置保溫環(huán)境下自由活動，禁食禁水，待昏迷后用BL-420F生物機能實驗系統(tǒng)連接大鼠肢體導(dǎo)聯(lián)的心電監(jiān)護。此外，建模過程中還應(yīng)該注意無菌操作，大鼠正確的保溫、固定及抗感染等。

2.1 各組體質(zhì)量、建模前MAP、手術(shù)時間、總失血量及血乳酸水平比較 本實驗重度失血性休克大鼠建模成功率為76.19%(48/63)。各組間體質(zhì)量、建模前MAP、手術(shù)時間、總失血量及血乳酸水平比較差異均無統(tǒng)計學意義(P均＞0.05)。見表1。

本研究中，SAHA組休克大鼠生存時間、24 h生存率明顯優(yōu)于VPA組，表明HDACIs能夠明顯延長重度失血性休克大鼠的生存時間，而且SAHA對失血性大鼠的生存保護作用優(yōu)于VPA。本研究與其他研究結(jié)果說明，失血性休克通過誘導(dǎo) HAT/HDACs的比例失衡，進而影響細胞組蛋白或非組蛋白的乙?；癄顟B(tài)。我們推斷，組蛋白乙?；癄顟B(tài)將與休克轉(zhuǎn)歸和次發(fā)的主要器官修復(fù)存在關(guān)聯(lián)。HDACIs抗休克作用機制主要通過組織器官細胞凋亡實現(xiàn)的，HDACIs能導(dǎo)致Bcl-2在組織中高表達是最為有力的證據(jù)［9］，今后繼續(xù)進行其他凋亡相關(guān)基因表達的實驗觀察和討論;另一方面，組蛋白乙?；癄顟B(tài)也決定了染色質(zhì)分子核小體空間狀態(tài)的變化，其C-端疏水氨基酸位于核小體的內(nèi)部，N-端的賴氨酸殘基延伸出核小體外;組蛋白乙?；敢阴；€能促進或防止與其他轉(zhuǎn)錄或調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白的相互作用;組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物參與轉(zhuǎn)錄激活、基因沉默、細胞周期調(diào)控、DNA復(fù)制、修復(fù)以及染色體組裝等許多重要的生理過程［14］。因此，HDACIs有助于染色質(zhì)分子呈舒展張開狀態(tài)，能夠加快休克修復(fù)應(yīng)急蛋白的翻譯合成，實現(xiàn)快速休克修復(fù)，這些機制皆值得進一步研究。

石門桂花村是石門鎮(zhèn)著名的旅游景點之一，在石門旅游中扮演著重要的角色。但是，石門桂花村還存在著知名度不高、游客接待量少、基礎(chǔ)設(shè)施不完善、經(jīng)營管理不到位等方面的問題，對石門桂花村的旅游發(fā)展造成了阻力。為了解決石門桂花村現(xiàn)存的問題，可以從提升管理部門水平，推出特色旅游項目，完善基礎(chǔ)設(shè)施，加強經(jīng)營管理等方面入手，加快對石門桂花村的旅游發(fā)展進程。

1)頂板錨索規(guī)格為直徑22 mm的1×19股高強度低松弛鋼絞線，破斷載荷580 kN，延伸率不低于7%，長度5.3 m，間排距為1 100 mm×1 000 mm；構(gòu)件為高強度拱形托板，規(guī)格300 mm×300 mm×16 mm，初始張拉力不低于300 kN。

總之，兩種HDACIs均能明顯延長重度失血性休克大鼠的生存時間，提高12 h生存率;而且SAHA對失血性大鼠的生存保護作用優(yōu)于VPA。

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