劉小雙,蒲旭峰,羅 霄

(1.成都中醫(yī)藥大學 藥學院,四川 成都 611137,2.成都市食品藥品檢測中心,四川 成都 610045)

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HPLC法測定安神補心片中二苯乙烯苷含量

劉小雙1,蒲旭峰2,羅 霄2

(1.成都中醫(yī)藥大學 藥學院,四川 成都 611137,2.成都市食品藥品檢測中心,四川 成都 610045)

目的：研究安神補心片中2,3,5,4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量的高效液相測定方法。方法：色譜柱：Welchrom C18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm);流動相：乙腈-水(25∶75);流速：0.9mL/min;檢測波長：320nm;柱溫：25℃；進樣量：10μL。結(jié)果：2,3,5,4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在0.019 67～0.196 60μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.999 9)，平均回收率為99.220%，RSD為0.54%(n=6)。結(jié)論：該方法操作簡單、結(jié)果準確、專屬性強，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

安神補心片；高效液相色譜法；2,3,5,4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷；含量測定

安神補心片是由丹參、五味子(蒸)、石菖蒲、合歡皮、菟絲子、墨漢蓮、女貞子(蒸)、首烏藤、地黃、珍珠母等10味中藥加工而成[1]。其能養(yǎng)心安神，用于心血不足引起的心悸失眠、頭暈耳鳴。安神補心片現(xiàn)行標準為國家藥品標準(試行)WS-11407(ZD-1407)-2002[1], 為進一步控制藥品質(zhì)量，保證其臨床用藥安全有效，以2,3,5,4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(以下簡稱二苯乙烯苷)為對象進行實驗研究。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀：Waters e2695(美國)；電子分析天平：METTLER AE-240(瑞士)；試藥：乙腈為色譜純(Sigma)，水為超純水；其他試劑試藥均為分析純；對照品：二苯乙烯苷(批號：110844-201109，中國食品藥品檢定研究院)。

2 方法與結(jié)果

2.1 二苯乙烯苷含量測定

2.1.1 色譜條件 色譜柱：Welchrom C18色譜柱(250mm×4.6mm, 5μm)；流動相：乙腈-水(25∶75)；流速：0.9mL/min；檢測波長：320nm；進樣量：10μL，柱溫：25℃。

2.1.2 對照品溶液制備 取二苯乙烯苷對照品適量，精密稱定，置棕色容量瓶中，加稀乙醇制成10.38μg/mL的溶液，備用。

2.1.3 供試品溶液制備 將本品研細，取粉末約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50mL，稱定質(zhì)量，加熱回流30min，放冷，再稱定質(zhì)量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，備用[2，3，5]。

2.1.4 陰性樣品溶液制備 根據(jù)處方稱取除首烏藤以外的其他藥材適量制備陰性樣品，再按“2.1.3”項下供試品溶液制備方法制備而成。

2.1.5 專屬性試驗 精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液各10μL，按“2.1.1”項色譜條件進樣測定，記錄色譜，見圖1。結(jié)果表明，陰性樣品無干擾。

2.1.6 線性試驗 分別精密吸取對照品溶液(二苯乙烯苷含量為10.38μg/mL)2、4、6、8、10 、20μL，按“2.1.1”項下色譜條件進樣測定，以二苯乙烯苷進樣量為橫坐標(X)，峰面積響應(yīng)值為縱坐標(Y)進行線性回歸，得出二苯乙烯苷線性方程：Y=3.485 2×106X+3.398 1×103，r=0.999 9。結(jié)果表明二苯乙烯苷在0.019 67～0.196 60μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.7 精密度試驗 精密吸取二苯乙烯苷對照品溶液10μL，按“2.1.1”項色譜條件重復(fù)進樣6次，計算峰面積 RSD為0.35%(n=6)。

2.1.8 回收率試驗 稱取同一批已知含量的安神補心片樣品(批號：09030002)(含二苯乙烯苷0.094mg/g)約1g，分別精密稱定6份，再精密加入二苯乙烯苷對照品適量按“2.1.3”項下供試品溶液的制備方法制備樣品，按“2.1.1”項色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算加樣回收率。結(jié)果平均回收率為99.220%， RSD為0.54%。見表1。

2.1.9 穩(wěn)定性試驗 精密吸取精密度試驗項下同一供試品溶液(批號：09030002) ，按“2.1.1”項下的色譜條件，分別在配置后0、2、4、6、8h進樣測定，二苯乙烯苷峰面積RSD=0.23%，結(jié)果表明供試品溶液在配置后8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2 樣品含量測定

按照上述含量測定方法測定了3家制藥企業(yè)8批安神補心片中二苯乙烯苷的含量，結(jié)果見表3。

A.二本乙烯苷對照溶液；B.安神補心片供試品溶液；C.陰性樣品溶液

序號稱樣量(g)樣品中含量(mg)添加量(mg)測得量(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)11.03840.09760.09830.194598.57621.01560.09550.09830.193299.39031.02740.09660.09830.194599.59399.2200.5441.01500.09540.09830.193699.89851.02190.09610.09830.193098.57661.01070.09500.09830.192699.288

表2 不同廠家安神補心片中二本乙烯苷含量測定結(jié)果

3 討論

為了充分提取安神補心片中的有效成分，參照《中國藥典》2010年版一部[2]中首烏藤的提取方法，本實驗研究考察了超聲提取、回流提取兩種不同提取方法。結(jié)果表明：以回流提取所測得二苯乙烯苷含量更高。同時，本實驗研究還考察了不同回流提取時間(15min、30min、60min)對二苯乙烯苷的影響，結(jié)果表明回流提取30min的提取效率最高，結(jié)果與范宋玲等[4]的研究報道一致。

通過紫外全波長掃描光譜圖進行分析，二苯乙烯苷在320nm處有最大吸收。參考《中國藥典》2010年版一部首烏藤項下的含量測定，選用320nm為檢測波長。

據(jù)陳龍虎[5]報道，二苯乙烯苷對光不穩(wěn)定，在本研究穩(wěn)定性實驗中，安神補心片供試品溶液在8h內(nèi)基本穩(wěn)定，因此應(yīng)在測定時采取棕色瓶避光操作，并且盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

[1] 國家藥典委員會.國家藥品標準·中成藥地方標準上升國家標準部分(內(nèi)科心系分冊)[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2013.

[2] 國家藥典委員會.中國藥典(一部)[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2010:248-249.

[3] 彭愛華，宋軍，成森. 高效液相色譜法測定安神補心片中二苯乙烯苷含量[J].中國藥業(yè)，2013,22(9):16-17.

[4] 范宋玲 ，孫冬梅， 王洛臨，等.首烏藤藥材質(zhì)量標準的研究[J].中國實驗方劑學雜志，2006,12(3)：7-9.

[5] 陳龍虎.高效液相色譜法測定七寶美髯口服液中二苯乙烯苷的含量[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2013,9(3)：23-24.

(責任編輯：宋勇剛)

2014-11-01

劉小雙(1989-)，男，成都中醫(yī)藥大學碩士研究生，研究方向為中藥新技術(shù)、新劑型。

R284.1

A

1673-2197(2015)05-0029-02

10.11954/ytctyy.201505013