張春和，李焱風(fēng)，趙 凡，陳天波，楊毅堅(jiān)，張富剛

(云南省中醫(yī)醫(yī)院/云南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，云南 昆明 650021)

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前列通竅膠囊對(duì)前列腺增生大鼠模型的影響*

張春和，李焱風(fēng)，趙 凡，陳天波，楊毅堅(jiān)，張富剛

(云南省中醫(yī)醫(yī)院/云南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，云南 昆明 650021)

目的 探討前列通竅膠囊對(duì)前列腺增生(BPH)大鼠模型的影響，初步探討其作用機(jī)制。方法 將60只大鼠隨機(jī)取10只作為空白組，其余50只大鼠采用去勢(shì)、皮下注射丙酸睪酮法造成前列腺增生模型。將常規(guī)造模成功的50只大鼠隨機(jī)分為模型組、癃閉舒膠囊對(duì)照組和前列通竅膠囊低、中、高劑量組，每組10只?？瞻捉M、模型組給予蒸餾水，其他各組分別予以相應(yīng)藥品混懸液灌胃給藥，給藥30天后處死大鼠，稱取前列腺濕重并計(jì)算前列腺指數(shù)，測(cè)定前列腺組織中睪酮(T)、雌二醇(E2)的含量及表皮生長(zhǎng)因子(EGF)的水平，測(cè)定前列腺的腺體密度并用光鏡觀察前列腺組織病理學(xué)改變。結(jié)果 與模型組相比，前列通竅膠囊各劑量組均可一定程度降低前列腺增生模型大鼠前列腺濕重及前列腺指數(shù)，高、中劑量組可顯著降低大鼠前列腺的腺體密度(P<0.01)，均可顯著降低T、EGF水平(P<0.01)，但對(duì)E2的影響不明顯。結(jié)論 前列通竅膠囊對(duì)前列腺濕重及前列腺的腺體密度均有一定影響，能顯著降低前列腺組織中T、EGF水平，揭示了前列通竅膠囊治療BPH的部分作用機(jī)制。

前列通竅膠囊；前列腺增生；動(dòng)物模型；性激素；表皮生長(zhǎng)因子

前列腺增生癥(benign prostatic hyperplasia，BPH)是一種復(fù)雜的、由多種因素造成的影響絕大多數(shù)老年男性生活質(zhì)量的常見(jiàn)疾病。從所報(bào)道的文獻(xiàn)看，中成藥治療BPH的臨床療效大多較好，無(wú)明顯毒副作用，且服用方便，可長(zhǎng)期服用。BPH具有腎虛瘀阻的病機(jī)特點(diǎn)[1-2]，前列通竅膠囊(由黃芪、水蛭、菟絲子、肉桂、烏藥、益智仁、懷牛膝組成)是云南省中醫(yī)醫(yī)院制劑室生產(chǎn)的院內(nèi)制劑，具有益氣補(bǔ)腎、祛瘀通竅、助膀胱氣化之功效。本研究通過(guò)觀察前列通竅膠囊對(duì)BPH模型大鼠前列腺組織中性激素、EGF水平及前列腺重量和腺體密度的影響來(lái)探討其部分作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 雄性SD大鼠60只，清潔級(jí)，體重(280±20)g，8月齡，由昆明醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證：SCXK(滇)2007-0008。發(fā)證單位：云南省科學(xué)技術(shù)廳。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品 ①前列通竅膠囊：由黃芪、水蛭、菟絲子、肉桂、烏藥、益智仁、懷牛膝組成，規(guī)格：0.38 g/粒，云南省中醫(yī)醫(yī)院制劑室生產(chǎn)(批號(hào)：滇2010L-ZJ0001。臨用時(shí)配成含成藥0.038 g/mL的混懸液，其中前列通竅膠囊低劑量組濃度為含成藥0.038 g/mL(正常劑量)、中劑量組濃度為含成藥0.076 g/mL(正常劑量的2倍)、高劑量組濃度為含成藥0.152 g/mL(正常劑量的4倍)。②癃閉舒膠囊：規(guī)格：0.3 g/粒，石家莊科迪藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。批號(hào)010601。臨用時(shí)配成含成藥0.03 g/mL的混懸液。③丙酸睪丸酮注射液：規(guī)格25mg/1mL，由天津金耀氨基酸有限公司生產(chǎn)。④睪酮(T)測(cè)定試劑盒：北京北方生物技術(shù)研究所，批號(hào)20090221；雌二醇(E2)測(cè)定試劑盒：北京北方生物技術(shù)研究所，批號(hào)20090419；表皮生長(zhǎng)因子(EGF)試劑盒：上海森雄科技實(shí)業(yè)有限公司，批號(hào)20090415。

1.3 BPH模型制備(參照衛(wèi)生部《新藥(西藥)臨床前研究指導(dǎo)原則匯編》造模) 將雄性SD大鼠普通飼養(yǎng)1周以適應(yīng)環(huán)境，并經(jīng)普通觀察無(wú)異常后，用鹽酸氯胺酮注射液100 mg/kg對(duì)雄性SD大鼠進(jìn)行腹腔麻醉，麻醉成功后，將大鼠固定于手術(shù)臺(tái)上，皮膚常規(guī)消毒，無(wú)菌條件下經(jīng)陰囊摘除雙側(cè)睪丸，結(jié)扎殘端以確保止血，縫合皮膚。觀察1周后，每只大鼠按體重皮下注射丙酸睪丸酮3.5 mg/kg，1次/d，連續(xù)給藥30天，造成前列腺增生動(dòng)物模型。

1.4 分組及給藥 將60只大鼠隨機(jī)取10只作為空白對(duì)照組，做假手術(shù)；其余大鼠造前列腺增生模型。將常規(guī)造模的50只大鼠隨機(jī)分為5組，每組10只：A、模型組；B、癃閉舒膠囊對(duì)照組；C、前列通竅膠囊低劑量組；D、前列通竅膠囊中劑量組；E、前列通竅膠囊高劑量組。

給藥方法：A組按1 mL/100 g體重給予生理鹽水灌胃，B組按l mL/100 g體重給予癃閉舒混懸液灌胃，C、D、E組按1 mL/100 g體重分別給予低、中、高濃度前列通竅膠囊混懸液灌胃，每日1次，連續(xù)30天。30天后，一并處死，取前列腺組織待測(cè)。

1.5 檢測(cè)指標(biāo)

1.5.1 前列腺濕重及前列腺指數(shù) 于末次給藥后2 h(禁食不禁水12 h)，大鼠分別稱重，迅速取前列腺稱其前列腺濕重，計(jì)算前列腺指數(shù)(前列腺指數(shù)=前列腺濕重g/鼠體重g)。

1.5.2 檢測(cè)T、E2、EGF水平 將前列腺分成兩部分，稱前列腺左側(cè)葉300 mg，加入1 mL冰生理鹽水，4℃勻漿，以3000 rpm離心15 min，取前列腺組織勻漿上清液測(cè)定前列腺組織中E2、T、EGF水平。

1.5.3 測(cè)定前列腺的腺體密度及組織形態(tài)學(xué)觀察 取右側(cè)前列腺組織固定于10%福爾馬林溶液中，石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡下觀察各組前列腺組織形態(tài)變化。測(cè)定前列腺的腺體密度：采用通用立體計(jì)量學(xué)測(cè)定方法，應(yīng)用測(cè)試格點(diǎn)分析法，計(jì)算腺體上的交叉點(diǎn)數(shù)與參照系中的交叉點(diǎn)數(shù)的百分比，為前列腺的腺體密度，每個(gè)臟器測(cè)定3次。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)前列腺增生模型大鼠前列腺重、前列腺指數(shù)及腺體密度的影響 與空白組比，模型組大鼠前列腺濕重、前列腺指數(shù)及腺體密度都顯著增加(P<0.01)，說(shuō)明模型組大鼠前列腺明顯增生，模型復(fù)制成功。與模型組比，高、中劑量前列通竅膠囊組和癃閉舒組均可顯著降低前列腺增生模型大鼠前列腺濕重、前列腺指數(shù)及前列腺腺體的體密度(P<0.01)，前列通竅膠囊低劑量組可顯著降低大鼠前列腺濕重(P<0.01)，可明顯降低前列腺指數(shù)(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 前列通竅膠囊對(duì)大鼠前列腺增生模型前列腺濕重、前列腺指數(shù)及腺體密度的影響

注：與空白組比較，**P<0.01；與模型組比較，△△P<0.01。

2.2 對(duì)前列腺增生大鼠模型前列腺組織中T、E2及EGF的影響 與空白組比，模型組大鼠前列腺勻漿中T、EGF水平顯著升高(P<0.01)。與模型組比，高、中、低劑量前列通竅膠囊組和癃閉舒組均可顯著降低模型大鼠前列腺勻漿中T、EGF水平(P<0.01)，實(shí)驗(yàn)各組對(duì)前列腺組織勻漿中E2水平的影響不明顯。見(jiàn)表2。

表2 前列通竅膠囊對(duì)大鼠前列腺增生模型前列腺勻漿中T、E2及EGF水平的影響

注：與空白組比較，**P<0.01；與模型組比較，△△P<0.01。

2.3 各組前列腺組織形態(tài)的觀察 空白組鏡下見(jiàn)腺體排列緊密，腺體間可見(jiàn)明顯的間質(zhì)，腺腔無(wú)擴(kuò)張，腺上皮單層柱狀；模型組鏡下見(jiàn)腺體明顯增生，腺腔呈囊狀擴(kuò)張，大小不一，多數(shù)腺上皮乳頭狀增生明顯突向腔內(nèi)，間質(zhì)水腫、瘀血；癃閉舒組鏡下見(jiàn)前列腺腺體增生程度較模型組有一定改善；前列通竅膠囊高劑量組鏡下見(jiàn)前列腺腺體有一定增生，少數(shù)腺腔呈囊狀擴(kuò)張，局部腺上皮呈乳頭狀向腔內(nèi)突出，較模型組有很大改善；前列通竅膠囊中、低劑量組鏡下見(jiàn)前列腺腺體增生，較模型組有一定改善。

3 討論

前列腺增生癥是老年男性的常見(jiàn)病，屬于中醫(yī)“癃閉”范疇，腎虛瘀阻是其主要病機(jī)[1-2]，辨證重在“瘀”，治療突出“通”，臨床多從“補(bǔ)腎活血”立法。前列通竅膠囊為云南省中醫(yī)醫(yī)院的院內(nèi)制劑，組方中以黃芪、水蛭為君藥，老年氣虛當(dāng)補(bǔ)氣，以黃芪為首選，該藥性甘溫，入肺、脾二經(jīng)，為補(bǔ)氣之要藥，《本草逢源》謂黃芪尚能“補(bǔ)腎中之氣不足”，由于腎陽(yáng)是以腎中精氣為其物質(zhì)基礎(chǔ)，腎陽(yáng)虛實(shí)質(zhì)上是腎中精氣不足的表現(xiàn)形式，故以黃芪為君藥頗切合本病腎陽(yáng)虛弱的病機(jī)。水蛭為通經(jīng)消癥、破血祛瘀的要藥，可軟化增生之前列腺，還有較好的解痙作用，可解除前列腺腫大壓迫尿道括約肌之痙攣。菟絲子、肉桂為臣藥，菟絲子味甘性溫，既能補(bǔ)腎陽(yáng)腎陰，又有固精縮尿之效；肉桂溫腎助陽(yáng)，振奮陽(yáng)氣，少量可助膀胱氣化，在補(bǔ)氣益血方適加肉桂，能鼓舞氣血生長(zhǎng)。烏藥、益智仁為佐藥，烏藥辛溫香竄，入肺胃脾肝腎膀胱經(jīng)，辛開溫通，上走于肺，中調(diào)脾胃，下達(dá)肝腎膀胱，有順氣開通之功，上走肺則宣肺氣以通調(diào)，下達(dá)膀胱則溫暖膀胱而司開合調(diào)氣化，故而用于膀胱冷結(jié)，小便頻數(shù)最宜；益智仁性溫味辛，入脾胃經(jīng)，有固精縮尿的功效，用于腎虛遺尿，小便頻數(shù)，遺精白濁。牛膝為使藥，牛膝性味甘苦酸，入肝腎經(jīng)，既具有活血祛瘀，又具有補(bǔ)肝腎、通淋澀的作用，還可導(dǎo)諸藥下行，直達(dá)病所。以上藥物相輔相成，使得證治相合，諸藥合用共奏益氣補(bǔ)腎、祛瘀通竅之功效，從而達(dá)到良好的治療效果。

該研究采用去勢(shì)加皮下注射丙酸睪酮法造大鼠前列腺增生模型，是一種在外源性雄激素作用下使動(dòng)物產(chǎn)生前列腺增生的造模方法，排除自身雄激素的影響，重復(fù)率較高。在前列腺增生的相關(guān)機(jī)制中，性激素平衡失調(diào)的內(nèi)分泌學(xué)說(shuō)受到公認(rèn)。睪酮(T)是人體內(nèi)主要的雄激素，在 5ɑ-還原酶作用下變?yōu)殡p氫睪酮(DHT)，前列腺內(nèi)的DHT 濃度增加可導(dǎo)致腺體增生[3]。同時(shí)雄激素主要通過(guò)間質(zhì)，上皮相互作用模式刺激前列腺上皮組織的增生，也可直接促進(jìn)間質(zhì)組織的增生[4]。EGF 是較早被分離鑒定一種生長(zhǎng)因子，其含量的變化直接反應(yīng)了前列腺組織上皮的生長(zhǎng)情況。同時(shí)，對(duì)前列腺濕重以及其腺體密度的觀察，可直觀反應(yīng)前列腺的增生情況。

該實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，前列通竅膠囊可降低前列腺增生模型大鼠的前列腺濕重及前列腺指數(shù)，降低睪酮及表皮生長(zhǎng)因子水平，同時(shí)可一定程度抑制前列腺組織增生，此研究揭示了前列通竅膠囊治療BPH的部分作用機(jī)制，研究結(jié)果為臨床應(yīng)用前列通竅膠囊治療BPH提供了一定的理論依據(jù)。

[1]張春和，楊會(huì)志.中醫(yī)古籍對(duì)癃閉證候?qū)W規(guī)律的認(rèn)識(shí)與探討[J].云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，34(4)：55-57.

[2]張春和，李焱風(fēng)，秦國(guó)政，等.540例良性前列腺增生癥患者中醫(yī)證候分布規(guī)律研究[J].中醫(yī)雜志，2012，53(1)：45-47.

[3]劉紹龑，白明，紀(jì)曉寧，等.益母草總堿對(duì)大鼠前列腺增生模型的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17(21)：177-180.

[4]曾瑾，趙軍寧，鄧治文，等.復(fù)方金錢草膠囊對(duì)丙酸睪酮致大鼠前列腺增生的作用[J].中藥藥理與臨床，2012，28(2)：139-142.

Effect ofQianlieTongqiaoCapsuleon Benign Prostate Hyperplasia Rat Models

ZHANG Chun-he, LI Yan-feng, ZHAO Fan, CHEN Tian-bo, YANG Yi-jian, ZHANG Fu-gang

(1.YunnanProvincialHospitalofTraditionalChineseMedicine,Kunming650021,Yunnan;

2.TheFirstAffiliatedHospitalofYunnanUniversityofTraditionalChineseMedicine,Kunming650021,Yunnan)

Objective: To study the effect ofQianlieTongqiaoCapsuleon benign prostate hyperplasia rat models (BPH) and to explore its mechanism. Methods: 60 rats were randomly assigned to take 10 as a control group, and the remaining 50 rats were castrated, causing BPH models by subcutaneous injection of testosterone propionate. The conventional 50 successful modeled rats were randomly divided into a model group, aRongbishucapsule control group and low, medium and high dose groups ofQianlieTongqiaoCapsule, 10 mice per group. The non-drug group and the model group were given distilled water while the other groups were given intragastric administration with corresponding drugs. The rats were sacrificed after 30 days to take their prostate to weigh their wet weight and calculate their index, to measure their testosterone (T), estradiol (E2) and epidermal growth factor (EGF) level in prostate tissue as well as the density of prostate gland. The light microscope was used to observe their pathological changes. Results: Compared with the model group, each group with different doses ofQianlieTongqiaoCapsulecould reduce the prostate wet weight and prostate index of prostatic hyperplasia rat to some extent. The high dose group could significantly reduce the density of the rat prostate gland (P<0.01 ) and T, EGF levels (P<0.01), but no obvious effect on the E2. Conclusion:QianlieTongqiaoCapsulehas a certain influence on the prostate wet weight and prostate gland density and can significantly reduce prostate tissue T, EGF level. The study reveals some mechanism ofQianlieTongqiaoCapsulefor BPH treatment.

QianlieTongqiaoCapsule, prostate hyperplasia, animal model, hormone, epidermal growth factor

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No：81160443)；云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究計(jì)劃項(xiàng)目(No：2011FB145)< class="content">作者簡(jiǎn)介：張春和(1968-)，男，四川，醫(yī)學(xué)博士，碩士生導(dǎo)師，從事泌尿外科、男科專業(yè)。E-mail：zhangchunhe0426@126.com

張春和(1968-)，男，四川，醫(yī)學(xué)博士，碩士生導(dǎo)師，從事泌尿外科、男科專業(yè)。E-mail：zhangchunhe0426@126.com

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