闕庭志，朱如心，趙珍敏（司法部司法鑒定科學技術研究所 上海市法醫(yī)學重點實驗室，上海 200063）

線粒體SNP分型用于法醫(yī)DNA檢驗1例

闕庭志，朱如心，趙珍敏
（司法部司法鑒定科學技術研究所 上海市法醫(yī)學重點實驗室，上海 200063）

關鍵詞：法醫(yī)遺傳學；線粒體；單核苷酸多態(tài)性

1　案例

1.1簡要案情

某地發(fā)生一起命案，為了核實死者身份，需要對一塊高度降解的人體骨頭和疑似死者母親的血樣進行DNA檢驗，判斷他們是否存在血緣關系。

1.2鑒定過程

接受委托后，本鑒定中心采用Chelex-100法提取血樣基因組DNA，采用硅珠法提取骨頭基因組DNA，采用GoldeneyeTMDNA身份鑒定系統(tǒng)20A試劑盒［基點認知技術（北京）有限公司］對常染色體上19個STR基因座進行復合PCR擴增，人體骨頭未獲得STR分型結果，考慮到核DNA降解嚴重，采用檢測線粒體SNP的策略來評估被檢骨頭和疑似母親的線粒體SNP分型結果是否符合母系遺傳規(guī)律。采用Expressmarker mtDNA-SNP 60熒光檢測試劑盒（無錫中德美聯生物技術有限公司）檢測線粒體60個SNP位點，以上擴增在9700型PCR擴增儀（美國AB公司）上完成，擴增體系和條件均嚴格按照使用說明書操作，擴增產物在3130XL型遺傳分析儀（美國AB公司）上進行毛細管電泳，用GeneMapper ID v3.2軟件進行基因分型。

結果表明，被檢骨頭和疑似母親的60個SNP位點基因分型一致，不排除二者具有血緣關系。

2　討論

一般情況下進行親緣關系鑒定，特別是親子鑒定，首選常染色體上的核DNA進行STR分型，因為該檢驗可提供最大限度的遺傳信息。但是當檢材已經發(fā)生了嚴重降解時，依托核DNA的常染色體STR和SNP分析就顯得收效甚微，這個時候從多拷貝的線粒體入手往往可以獲得有效的遺傳信息。mtDNA是人體細胞內唯一的核外基因組，約含有16569個堿基對，為一條雙鏈閉合環(huán)狀的DNA分子。由于其具有母系遺傳、高突變率、高拷貝數、幾乎不發(fā)生重組等特點，在微量、降解、腐敗檢材以及母系親緣關系認定等方面具有重要應用價值［1-2］。

本案例中的人體骨頭已經發(fā)生高度降解，常染色體上的遺傳標記已經不能發(fā)揮作用，考慮到對照樣本為骨頭身源者疑似母親，因此進行mtDNA的檢驗就顯得十分必要。但是由于降解嚴重，傳統(tǒng)的線粒體測序方法是對控制區(qū)中的HVⅠ以及HVⅡ區(qū)進行直接測序，然而步驟繁瑣費時，對DNA模板要求較高，有時需重復測序，且區(qū)段有限，影響個人識別率，此外也需要較大的擴增片段，成功率難以保證。本案例采用了市場上新推出的Expressmarker mtDNA-SNP 60熒光檢測試劑盒，該試劑盒是根據mtDNA進化樹，結合中國人群遺傳特點，精選出60個多態(tài)性高、回復突變率低、分型能力強的SNP位點，采用特異性引物對這些位點進行檢測，擴增片段很小，適合降解檢材的分型。檢驗結果表明，被檢骨頭和疑似母親在60個SNP位點的基因分型一致，從而為本案的解決提供了重要的遺傳信息和技術支持。

參考文獻：

［1］Budowle B，Wilson MR，DiZinno JA，et al.Mitochondrial DNA regions HVⅠand HVⅡ population data［J］. Forensic Sci Int，1999，103（1）：23-35.

［2］Parson W，Bandelt HJ.Extended guidelines for mtDNA typing of population data in forensic science［J］.Forensic Sci Int Genet，2007，1（1）：13-19.

（本文編輯：李成濤）

中圖分類號：DF795.2

文獻標志碼：B

doi：10.3969/j.issn.1004-5619.2015.05.029

文章編號：1004-5619（2015）05-0414-01

收稿日期：（2015-07-31）

基金項目：國家自然科學基金資助項目（81302620）；國家“十二五”科技支撐計劃項目（2012BAK16B01）

作者簡介：闕庭志（1963—），男，上海人，副主任法醫(yī)師，主要從事法醫(yī)物證學研究；E-mail：quetz@ssfjd.cn