彭 松， 貝俊杰， 胡厚源， 陳 強(qiáng)

(第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院心血管內(nèi)科，重慶 400038)

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融合蛋白TAP-SSL5對(duì)激活的血小板與人淋巴細(xì)胞結(jié)合的影響*

彭 松， 貝俊杰， 胡厚源△， 陳 強(qiáng)

(第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院心血管內(nèi)科，重慶 400038)

目的： 研究抗炎、抗凝雙效融合蛋白蜱抗凝血肽(TAP)-金黃色葡萄球菌超抗原樣蛋白5(SSL5)對(duì)激活的血小板與人淋巴細(xì)胞結(jié)合作用的影響。方法: 采用免疫磁珠分選法篩選人外周血總淋巴細(xì)胞；CCK-8法檢測TAP-SSL5對(duì)細(xì)胞活力的影響；流式細(xì)胞術(shù)檢測Jurkat細(xì)胞 (人外周血白血病T細(xì)胞株) 表面CD162 (PSGL-1)的表達(dá)及TAP-SSL5對(duì)小鼠抗人CD162單抗(KPL-1)與Jurkat細(xì)胞結(jié)合的抑制作用。以20 μmol/L ADP激活人血小板，流式細(xì)胞術(shù)檢測血小板與Jurkat細(xì)胞或人淋巴細(xì)胞的結(jié)合情況，并研究TAP-SSL5的干預(yù)作用。 結(jié)果: 30 mg/L及以下濃度的TAP-SSL5對(duì)Jurkat細(xì)胞的活力無明顯影響。流式細(xì)胞術(shù)檢測顯示，10 mg/L 的TAP-SSL5能顯著抑制KPL-1與Jurkat細(xì)胞的結(jié)合；20 μmol/L ADP激活的血小板與Jurkat細(xì)胞或淋巴細(xì)胞的結(jié)合率分別為(11.86±4.49)% 和 (8.32±1.00)%；細(xì)胞經(jīng)10 mg/L TAP-SSL5預(yù)先處理后，結(jié)合率分別降至 (6.73±2.71)% 和 (5.51±0.70)% ，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論: TAP-SSL5可與淋巴細(xì)胞表面的PSGL-1結(jié)合，從而抑制激活的血小板與人淋巴細(xì)胞的結(jié)合，這可能是抗炎、抗凝雙效融合蛋白TAP-SSL5發(fā)揮其抗炎作用的機(jī)制之一。

蜱抗凝血肽； 金黃色葡萄球菌超抗原樣蛋白5； 融合蛋白； 血小板； 淋巴細(xì)胞； P-選擇素糖蛋白配體1

動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是一種慢性炎癥性疾病，免疫調(diào)節(jié)在其發(fā)生發(fā)展過程中起到重要作用。淋巴細(xì)胞和血小板作為免疫及炎癥反應(yīng)中的重要效應(yīng)細(xì)胞，參與了動(dòng)脈粥樣硬化病程的各個(gè)環(huán)節(jié)。血小板與淋巴細(xì)胞之間通過直接接觸和分泌可溶性介質(zhì)的方式發(fā)生著相互作用而影響彼此功能，從而調(diào)控動(dòng)脈粥樣硬化等炎癥性疾病的病理生理過程[1]。P-選擇素糖蛋白配體1(P-selectin glycoprotein ligand 1, PSGL-1)廣泛表達(dá)于白細(xì)胞表面，它可與激活的內(nèi)皮或血小板表面的P-/E-選擇素結(jié)合，導(dǎo)致白細(xì)胞在內(nèi)皮或血小板表面的黏附，而促進(jìn)白細(xì)胞在病變血管處的募集和白細(xì)胞-血小板聚集體的形成。在前期研究中，我們已將能夠同PSGL-1結(jié)合的金黃色葡萄球菌超抗原樣蛋白5 (staphylococcal superantigen like protein-5, SSL5)[2]與凝血因子Xa (FXa)的強(qiáng)效抑制劑蜱抗凝血肽(tick anticoagulant peptide, TAP)聯(lián)合，成功構(gòu)建了具有抗炎抗凝雙效功能的融合蛋白TAP-SSL5。并且發(fā)現(xiàn)TAP-SSL5可抑制粒細(xì)胞在P-選擇素表面的黏附，還可抑制激活血小板與粒細(xì)胞的結(jié)合[3-4]。血小板與淋巴細(xì)胞的結(jié)合可以在動(dòng)脈血流條件下促進(jìn)淋巴細(xì)胞黏附到內(nèi)皮下基質(zhì)[5]，并影響淋巴細(xì)胞的增殖、分化等功能[6]。因此，本文進(jìn)一步研究了人血小板同淋巴細(xì)胞的結(jié)合效應(yīng)及融合蛋白TAP-SSL5對(duì)該結(jié)合的影響，旨在進(jìn)一步探討融合蛋白TAP-SSL5在抑制炎癥方面的作用機(jī)制。

材 料 和 方 法

1 主要材料

RPMI-1640和胎牛血清購自HyClone；Ficoll-paque液購自Pharmacia；CCK-8試劑盒購自Dojindo；免疫磁珠細(xì)胞分選(MACS)試劑盒為Miltenyi Biotec產(chǎn)品；BSA、二磷酸腺苷(ADP)為Sigma產(chǎn)品； PE標(biāo)記的小鼠抗人CD62P單克隆抗體、PE標(biāo)記的小鼠抗人CD162(PSGL-1)單克隆抗體(KPL-1)和PE標(biāo)記的小鼠IgG1(mIgG1-PE)為BD產(chǎn)品。融合蛋白 TAP-SSL5及重組SSL5蛋白的表達(dá)與純化采用曲小龍等[3]介紹的方法實(shí)施，融合蛋白TAP-SSL5純度≥95%，重組SSL5蛋白純度≥95% 。

2 方法

2.1 人外周血白血病T細(xì)胞株Jurkat細(xì)胞的培養(yǎng) Jurkat細(xì)胞由第三軍醫(yī)大學(xué)全軍免疫學(xué)研究所贈(zèng)送，采用含10%胎牛血清的RPMI-1640完全培養(yǎng)基，于37 ℃、5% CO2恒溫箱中培養(yǎng)。

2.2 Ficoll-paque密度梯度離心法分離人外周血單個(gè)核細(xì)胞 取健康成人抗凝血白膜(取自西南醫(yī)院輸血科)，用PBS等比例稀釋，按2∶1的比例將白膜輕輕鋪于Ficoll-paque分離液之上，400 ×g離心30 min，吸取單個(gè)核細(xì)胞層至無菌管中，PBS洗滌細(xì)胞3遍，去除紅細(xì)胞、血小板，重懸于MACS緩沖液(含PBS、 0.5% BSA、1 mmol/L EDTA，pH 7.2)中。

2.3 免疫磁珠分選陽性總淋巴細(xì)胞 用90 μL MACS緩沖液重懸3×107個(gè)單個(gè)核細(xì)胞，加入30 μL FcR阻斷劑，加入30 μL 生物素化的抗淋巴細(xì)胞混合抗體，在4 ℃孵育10 min；加入60 μL抗生物素磁性微珠，4 ℃孵育15 min；用MACS緩沖液洗滌細(xì)胞1次，并重懸至2×1011/L；將細(xì)胞加入位于磁場中的分選柱上，洗脫未結(jié)合的細(xì)胞；將分選柱移出磁場，洗脫并收集混合抗體標(biāo)記的細(xì)胞。臺(tái)盼蘭染色鑒定細(xì)胞活力，以改良Tyrode’s 緩沖液(150 mmol/L NaCl，12 mmol/L NaHCO3，2.5 mmol/L KCl，2 mmol/L CaCl2，2 mmol/L MgCl2，1 g/L D-glucose，1 g/L BSA，pH 7.4)調(diào)整細(xì)胞濃度。

2.4 洗滌血小板懸液的準(zhǔn)備 健康成人枸櫞酸鈉抗凝的濃縮血小板(取自西南醫(yī)院輸血科)，1 000 r/min離心15 min，得到富含血小板血漿(platelet-rich plasma, PRP)。 2 700 r/min，離心10 min以沉淀血小板，以CGS緩沖液(12.9 mmol/L trisodium citrate、120 mmol/L NaCl，30 mmol/L D-glucose，pH 6.5)洗滌沉淀2次，以SysmexKX-21N血細(xì)胞自動(dòng)分析儀計(jì)數(shù)血小板，用改良Tyrode’s 緩沖液調(diào)整濃度至2.5×1011/L。2.5 細(xì)胞活力的檢測 取對(duì)數(shù)生長期的Jurkat細(xì)胞(1×108/L)接種于96孔板，100 μL/well, 每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔，空白組只含培養(yǎng)基，不加細(xì)胞。置于37 ℃、5% CO2飽和濕度孵箱培養(yǎng)24 h后，干預(yù)組分別加入含TAP-SSL5或SSL5的培養(yǎng)基(終濃度為3、10和30 mg/L)，陰性對(duì)照組以PBS代替重組蛋白，繼續(xù)培養(yǎng)24 h。然后加入CCK-8溶液，10 μL/well，繼續(xù)培養(yǎng)3 h。酶標(biāo)儀(Bio-Rad)測定450 nm波長處的吸光度A450值，并計(jì)算細(xì)胞存活率。細(xì)胞存活率(%)=(實(shí)驗(yàn)組A450-空白組A450)/(陰性對(duì)照組A450-空白組A450)×100%。實(shí)驗(yàn)共重復(fù)3次。

2.6 Jurkat細(xì)胞表面PSGL-1的檢測及TAP-SSL5對(duì)KPL-1結(jié)合作用的影響 取適量Jurkat細(xì)胞，加入終濃度為10 mg/L的融合蛋白TAP-SSL5或SSL5，冰上孵育20 min，0.01 mol/L PBS洗滌細(xì)胞2次，再加入KPL-1-PE，冰上孵育30 min，同時(shí)以mIgG1-PE為同型抗體陰性對(duì)照，PBS洗滌細(xì)胞2次，200 μL PBS重懸細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測TAP-SSL5對(duì)KPL-1在Jurkat細(xì)胞表面結(jié)合的影響。實(shí)驗(yàn)共重復(fù)3次。

2.7 血小板與Jurkat細(xì)胞或淋巴細(xì)胞的結(jié)合 實(shí)驗(yàn)分未激活血小板-淋巴細(xì)胞結(jié)合組(baseline組)、ADP激活血小板-淋巴細(xì)胞結(jié)合組(control組)、ADP激活血小板-經(jīng)TAP-SSL5預(yù)處理的淋巴細(xì)胞結(jié)合組(1 mg /L 及10 mg/L TAP-SSL5組)、ADP激活血小板-經(jīng)SSL5預(yù)處理的淋巴細(xì)胞結(jié)合組(SSL5組)。

取適量的Jurkat細(xì)胞或人淋巴細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度至5×109/L，干預(yù)組分別加入終濃度為1 mg/L、10 mg/L 的TAP-SSL5或10 mg/L 的SSL5，冰上孵育20 min，以改良Tyrode’s緩沖液洗滌細(xì)胞2次，并調(diào)整細(xì)胞濃度為5×109/L。

取適量洗滌血小板懸液(2.5×1011/L)，加入終濃度為20 μmol/L 的ADP以激活血小板，然后將其與Jurkat細(xì)胞或淋巴細(xì)胞(5×109/L)按等體積比例混合，再加入抗CD62P-PE mAb以標(biāo)記血小板，并以mIgG1-PE作為同型對(duì)照，室溫下于暗處孵育20 min，1%多聚甲醛固定。200 ×g離心10 min，棄上清，用1%多聚甲醛重懸細(xì)胞后行流式細(xì)胞儀檢測。檢測時(shí)，先確認(rèn)Jurkat細(xì)胞或淋巴細(xì)胞群，然后在FL2通道檢測細(xì)胞表面的血小板結(jié)合情況，進(jìn)一步分析出結(jié)合有血小板的細(xì)胞占所檢測細(xì)胞總數(shù)的百分比。實(shí)驗(yàn)共重復(fù)3～5次。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。采用GraphPad Prism 5.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，比較重組蛋白對(duì)細(xì)胞活力的影響使用單因素方差分析，比較干預(yù)因素對(duì)血小板與細(xì)胞結(jié)合的影響使用Student’s配對(duì)t檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 融合蛋白TAP-SSL5對(duì)Jurkat細(xì)胞活力的影響

TAP-SSL5或SSL5作用于Jurkat細(xì)胞24 h后，采用CCK-8法檢測細(xì)胞活力的結(jié)果表明，30 mg/L或以下的 TAP-SSL5對(duì)Jurkat細(xì)胞存活率無明顯影響，10 mg/L的 SSL5對(duì)Jurkat細(xì)胞存活率無明顯抑制，見圖1。

Figure 1.The effects of TAP-SSL5 and SSL5 on the viability of Jurkat cells.Mean±SD. n=3.

2 TAP-SSL5抑制KPL-1與Jurkat細(xì)胞的結(jié)合

流式細(xì)胞術(shù)檢測顯示，Jurkat細(xì)胞表面表達(dá)大量的PSGL-1(CD162)，KPL-1(抗CD162 mAb)的結(jié)合陽性率為92.8%；10 mg/L 的TAP-SSL5 或SSL5能顯著抑制KPL-1與Jurkat細(xì)胞的結(jié)合，見圖2。

Figure 2.The effects of TAP-SSL5 and SSL5 on the binding of KPL-1 to Jurkat cells. a: isotype control; b,c: Jurkat cells pre-incubated with 10 mg/L SSL5(b) or TAP-SSL5(c), the binding of KPL-1 was significantly inhibited； d:Jurkat cells express abundant of PSGL-1, the binding rate of KPL-1 was 92.8%.

3 TAP-SSL5抑制ADP激活的血小板與Jurkat細(xì)胞的結(jié)合

在baseline組，未激活血小板與Jurkat細(xì)胞的結(jié)合率為(8.85±2.79)% ；在control組，血小板經(jīng)20 μmol/L ADP 激活后與Jurkat細(xì)胞的結(jié)合率增加至 (11.86±4.49)% ，與baseline組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；Jurkat細(xì)胞經(jīng)1 mg/L TAP-SSL5預(yù)處理后，其與ADP 激活血小板的結(jié)合率降至(8.15±2.43)%； Jurkat細(xì)胞經(jīng)10 mg/L TAP-SSL5 或10 mg/L SSL5預(yù)處理后，其與ADP 激活血小板的結(jié)合率分別為(6.73±2.71)% 和 (5.69±1.74)%，與control組比較均顯著降低 (P<0.05)；說明10 mg/L 的TAP-SSL5 和 SSL5均可顯著抑制血小板與Jurkat細(xì)胞的結(jié)合，見圖3。

Figure 3.The effect of TAP-SSL5 on the binding of ADP-activated platelets to Jurkat cells. Mean±SD. n=5. *P<0.05 vs baseline; #P<0.05 vs control.

4 TAP-SSL5抑制ADP激活的血小板與外周血淋巴細(xì)胞的結(jié)合

在baseline組，未激活血小板與淋巴細(xì)胞的結(jié)合率為(4.99±0.64)%；在control組，血小板經(jīng)20 μmol/L ADP 激活后與淋巴細(xì)胞的結(jié)合率增加至 (8.32±1.00)%，與baseline組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；淋巴細(xì)胞經(jīng)1 mg/L TAP-SSL5預(yù)處理后，其與ADP 激活血小板的結(jié)合率降至(7.02±0.82)%，淋巴細(xì)胞經(jīng)10 mg/L TAP-SSL5 或10 mg/L SSL5預(yù)處理后，其與ADP 激活血小板的結(jié)合百分率分別為(5.51±0.70)% 和 (6.15±0.57)%，與control組比較均顯著降低 (P<0.05)；說明1 mg/L、10 mg/L 的TAP-SSL5 和10 mg/L的 SSL5均可顯著抑制血小板與淋巴細(xì)胞的結(jié)合，見圖4。

Figure 4.The effect of TAP-SSL5 on the binding of ADP-activated platelets to lymphocytes.Mean±SD. n=3. *P<0.05 vs baseline; #P<0.05,##P<0.01 vs control.

討 論

傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為動(dòng)脈粥樣硬化源于血管壁的脂質(zhì)沉積，但越來越多的證據(jù)顯示炎癥反應(yīng)在AS的病理過程中發(fā)揮重要作用[7-8]，同時(shí)它還受到免疫機(jī)制的嚴(yán)密調(diào)控[9]。血小板和淋巴細(xì)胞是血栓和免疫炎癥過程中的重要細(xì)胞成分，它們間的相互作用在血栓形成、炎癥反應(yīng)、機(jī)體免疫等病理生理過程中都顯示出重要的調(diào)控作用[1]。血小板和淋巴細(xì)胞間可以通過直接接觸和分泌可溶性介質(zhì)的方式影響彼此功能。血小板可以促進(jìn)輔助性T細(xì)胞(helper T cells，TH)、細(xì)胞毒性T細(xì)胞(cytotoxic T cells，Tc)、B淋巴細(xì)胞及自然殺傷細(xì)胞(natural killer，NK)的黏附和滲透；血小板還促進(jìn)TC細(xì)胞的增殖和細(xì)胞毒力[10]，影響TH細(xì)胞的因子分泌和免疫抑制活性[6]，引起B(yǎng)淋巴細(xì)胞的表型轉(zhuǎn)換和抗體分泌[10]，還可以減輕NK細(xì)胞的吞噬能力[11]。這些在動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)程中起到重要的調(diào)控作用，針對(duì)血小板-淋巴細(xì)胞相互作用的干預(yù)措施，可能為動(dòng)脈粥樣硬化的防治提供新的思路和方向。

Li等[12]的研究指出，在血小板同淋巴細(xì)胞的結(jié)合中,P-選擇素結(jié)合PSGL-1是基礎(chǔ)，GPIIb/IIIa、CD11b、CD40L對(duì)結(jié)合有輔助作用。SSL5是金黃色葡萄球菌的分泌型蛋白，研究發(fā)現(xiàn)SSL5可與粒細(xì)胞表面的PSGL-1結(jié)合而抑制粒細(xì)胞在P-選擇素或激活的內(nèi)皮細(xì)胞表面的滾動(dòng)和黏附[2]，SSL5還能夠與HL-60細(xì)胞表面的PSGL-1結(jié)合而抑制其同血小板或內(nèi)皮細(xì)胞的結(jié)合[13]。鑒于炎癥反應(yīng)和血栓形成在心血管急癥發(fā)生中的關(guān)鍵作用，在前期研究中，我們將SSL5與凝血因子Xa 的強(qiáng)效抑制劑TAP聯(lián)合，成功構(gòu)建了具有抗炎抗凝雙效功能的融合蛋白TAP-SSL5，并證實(shí)TAP-SSL5可抑制粒細(xì)胞在P-選擇素表面的黏附，還可抑制激活的血小板與粒細(xì)胞的結(jié)合。在此基礎(chǔ)上，本研究進(jìn)一步探討了融合蛋白TAP-SSL5對(duì)血小板與淋巴細(xì)胞結(jié)合的影響。

流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示，人T淋巴細(xì)胞株Jurkat細(xì)胞表面有豐富的PSGL-1的表達(dá)。細(xì)胞毒性試驗(yàn)顯示，終濃度為30 mg/L或以下的融合蛋白TAP-SSL5及10 mg/L的SSL5作用于細(xì)胞24 h后，對(duì)Jurkat細(xì)胞存活率無明顯影響，提示該濃度的蛋白適合于淋巴細(xì)胞的體外實(shí)驗(yàn)。10 mg/L的TAP-SSL5或SSL5預(yù)處理細(xì)胞后，KPL-1同Jurkat細(xì)胞的結(jié)合明顯減低，提示TAP-SSL5及SSL5能夠同Jurkat細(xì)胞表面的PSGL-1結(jié)合而競爭性抑制KPL-1的結(jié)合。血小板激活后，大量P-選擇素由α-顆粒體轉(zhuǎn)移到細(xì)胞表面，進(jìn)而加強(qiáng)其同白細(xì)胞結(jié)合的能力。為探討激活血小板同淋巴細(xì)胞的結(jié)合作用及TAP-SSL5的影響，我們應(yīng)用免疫磁珠分選的淋巴細(xì)胞同洗滌血小板進(jìn)行研究，純化了反應(yīng)體系，能夠更加精確分析這2種細(xì)胞間的相互作用。本研究小組前期的研究表明，融合蛋白TAP-SSL5具有抗凝血肽TAP的抗凝血活性[3]。本研究進(jìn)一步顯示，血小板在經(jīng)ADP激活后，其與淋巴細(xì)胞的結(jié)合率明顯增加； TAP-SSL5和SSL5可以顯著抑制激活的血小板與淋巴細(xì)胞的結(jié)合，說明融合蛋白TAP-SSL5保留了SSL5的功能，即通過與細(xì)胞表面PSGL-1的結(jié)合發(fā)揮抑制炎癥的作用[2]。TAP-SSL5及SSL5對(duì)激活血小板同淋巴細(xì)胞結(jié)合的抑制作用主要來源于對(duì)“P-選擇素-PSGL-1”相互作用的抑制；課題組前期研究還發(fā)現(xiàn)TAP-SSL5及SSL5可與血小板表面的GPIbα結(jié)合[14-15]，而GPIbα可同白細(xì)胞表面的Mac-1結(jié)合，由此推測TAP-SSL5及SSL5可能還通過阻斷“GPIbα-Mac-1”途徑抑制血小板同淋巴細(xì)胞的結(jié)合。

淋巴細(xì)胞從循環(huán)血流中遷移到炎癥局部，是其發(fā)揮對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化免疫調(diào)控作用的基礎(chǔ)。同其它白細(xì)胞一樣，淋巴細(xì)胞的遷移由選擇素介導(dǎo)的接觸、滾動(dòng)，整合素介導(dǎo)的黏附和隨后的跨內(nèi)皮滲透所實(shí)現(xiàn)[1]。血小板和淋巴細(xì)胞的結(jié)合，不僅加強(qiáng)淋巴細(xì)胞在動(dòng)脈血流條件下同血管內(nèi)皮的黏附[5]，還易化了它們間的物質(zhì)代謝和相互影響。因此，針對(duì)血小板-淋巴細(xì)胞結(jié)合的干預(yù)措施，有望成為動(dòng)脈粥樣硬化等炎癥性疾病防治的新手段。本研究證實(shí)了融合蛋白TAP-SSL5能夠有效抑制激活血小板同淋巴細(xì)胞的結(jié)合，這種抑制作用在淋巴細(xì)胞的不同亞群間是否存在差異，以及對(duì)淋巴細(xì)胞激活、增殖和分化等功能的影響有待后續(xù)進(jìn)一步研究。

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Effect of TAP-SSL5 fusion protein on binding of activated platelets to human lymphocytes

PENG Song, BEI Jun-jie, HU Hou-yuan, CHEN Qiang

(DepartmentofCardiology,SouthwestHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400038,China.E-mail:houyuanhu@hotmail.com)

AIM: To study the effect of tick anticoagulant peptide-staphylococcal superantigen like protein 5 (TAP-SSL5), an anti-inflammatory and anticoagulant fusion protein, on the binding of activated platelets to human lymphocytes.METHODS: Human periphery lymphocytes were isolated by magnetic activated cell sorting (MACS). The toxicity of TAP-SSL5 on the viability of Jurkat cell was assessed by CCK-8 assay. Flow cytometry was applied to detect the expression of CD162 (PSGL-1) on the Jurkat cells (human peripheral blood leukemia T lymphocyte cell line) and the inhibitory effect of TAP-SSL5 on the binding of mouse anti-human CD162 monoclonal antibody (KPL-1) to Jurkat cells. Platelets were activated by ADP at concentration of 20 μmol/L, the binding rates of activated platelets to Jurkat cells or human lymphocytes were assayed by flow cytometry. RESULTS: The concentration of TAP-SSL5 below 30 mg/L didn’t affect the viability of Jurkat cells. TAP-SSL5 at 10 mg/L competitively inhibited KPL-1 binding to Jurkat cells. The binding rates of activated platelets to Jurkat cells or lymphocytes were (11.86±4.49)% and (8.32±1.00)%, respectively, which decreased to (6.73±2.71)% and (5.51±0.70)% after the Jurkat cells and lymphocytes were pre-incubated with 10 mg/L TAP-SSL5 (P<0.05).CONCLUSION: TAP-SSL5 binds to PSGL-1 expressed on lymphocyte surface and directly inhibits the binding of activated platelets to human lymphocytes, which may be one of the anti-inflammatory mechanisms of TAP-SSL5.

Tick anticoagulant peptide; Staphylococcal superantigen like protein 5; Fusion protein; Platelets; Lymphocytes; P-selectin glycoprotein ligand 1

1000- 4718(2015)01- 0023- 05

2014- 08- 12

2014- 09- 30

國家重大新藥創(chuàng)制課題(No. 2013ZX09103003-001)；國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No. 81270362)

△通訊作者 Tel: 023-68765167; E-mail: houyuanhu@hotmail.com

R363； R331

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2015.01.005