楊玲霞　朱旭江　葉艷芬

[摘 要] 目的：測(cè)定復(fù)方羅布麻片Ⅰ中金絲桃苷含量。方法：采用HPLC法，以十八烷基硅烷健合硅膠為填充劑，流動(dòng)相為乙腈-0.2%磷酸（15∶75），檢測(cè)波長(zhǎng)為256nm，流速為1.0ml/min。結(jié)果：金絲桃苷進(jìn)樣量在3.56～71.2μg/ml范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系（r=0.999）；平均加樣回收率為98.93%，RSD=1.98%（n=6）。結(jié)論：該方法穩(wěn)定、準(zhǔn)確，可用于復(fù)方羅布麻片Ⅰ中金絲桃苷含量測(cè)定。

[關(guān)鍵詞] 復(fù)方羅布麻片Ⅰ；金絲桃苷；高效液相色譜法

[中圖分類號(hào)]R284.1 [文獻(xiàn)標(biāo)志碼] A [文章編號(hào)]1007-8517（2015）06-0014-02

復(fù)方羅布麻片Ⅰ收載于《化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（第十一冊(cè)）》，由羅布麻葉、野菊花、防己、硫酸雙肼嗪等組成，為中西藥復(fù)方制劑。方中羅布麻葉具有平肝安神、清熱利水之功，對(duì)本方發(fā)揮臨床療效有重要作用。原標(biāo)準(zhǔn)中未對(duì)羅布麻葉進(jìn)行質(zhì)量控制?，F(xiàn)代藥理研究表明，羅布麻葉降血壓、降血脂主要活性成分為黃酮類化合物，其中以金絲桃苷含量最高[1]。為有效控制復(fù)方羅布麻片Ⅰ的質(zhì)量，促進(jìn)臨床用藥安全，本試驗(yàn)建立了以反相高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方羅布麻片Ⅰ中金絲桃苷含量的方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC-2010A高效液相色譜儀；AE-240型電子天平（瑞士Mettler Toledo公司）。

1.2 試藥 金絲桃苷對(duì)照品（批號(hào)：111521-200303，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；復(fù)方羅布麻片Ⅰ（批號(hào)：120802，山西津華暉星制藥有限公司；批號(hào)：0130201，山西云鵬制藥有限公司；批號(hào)：121202，山西亨瑞達(dá)制藥有限公司）；甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Kromasil C18（250 × 4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.2%磷酸（15∶75）；柱溫：30℃；流速：1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：256nm。在此色譜條件下，供試品色譜圖中，以金絲桃苷峰計(jì)算，理論板數(shù)為10126。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取金絲桃苷對(duì)照品適量，加甲醇溶解，制成30μg/ml的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取復(fù)方羅布麻片Ⅰ適量，研細(xì)，精密稱取約3g，至錐形瓶中，精密加入50%甲醇20ml，密塞，稱定重量，加熱回流30min，放冷，稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性對(duì)照溶液的制備 按處方比例及制備工藝，配制不含羅布麻葉的陰性樣品，按照供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.5 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液和陰性對(duì)照溶液各10μl，按照上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果表明陰性對(duì)照溶液在對(duì)照品溶液的相同保留時(shí)間處無(wú)雜質(zhì)峰干擾。對(duì)照品色譜圖、供試品色譜圖、陰性對(duì)照色譜圖見圖1～3。

2.6 線性關(guān)系 精密吸取對(duì)照品溶液（濃度μg/ml）1、5、10、15、20μl，依法進(jìn)樣，以峰面積積分值為橫坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程為：C=4×10-7A-0.0234，r=0.999。試驗(yàn)結(jié)果表明，金絲桃苷在3.56～71.2μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液10μl，分別于0、3、6、9、18h注入液相色譜儀，測(cè)得待測(cè)成分峰面積積分值的RSD為2.02%，結(jié)果表明供試品溶液在18h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取金絲桃苷對(duì)照品溶液10μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算得峰面積積分值的RSD為1.82%，表明本法精密度良好。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一樣品（批號(hào)：121202）6份，按樣品測(cè)定法測(cè)定，結(jié)果每g含金絲桃苷分別為0.36、0.35、0.36、0.34、0.36、0.35mg（RSD=2.3%， n=6），表明本法重現(xiàn)性良好。

2.10 加樣回收率試驗(yàn) 取復(fù)方羅布麻片Ⅰ（批號(hào)：121202，金絲桃苷含量為0.35mg/g）6份，精密稱定，分別精密加入一定量的金絲桃苷對(duì)照品（35.6μg/ml），照供試品測(cè)定方法進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果表明，本方法具有較好的準(zhǔn)確度。見表1。

2.11 樣品的含量測(cè)定 取復(fù)方羅布麻片Ⅰ按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，照上述色譜條件測(cè)定，進(jìn)樣10μl記錄色譜圖峰面積，以峰面積計(jì)算樣品中金絲桃苷的含量。結(jié)果見表2。

3 討論

本試驗(yàn)比較了用50%甲醇與甲醇加熱回流提取的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)用50%的甲醇加熱回流法提取效率高于甲醇加熱回流提取法。因此，選用50%甲醇作為提取溶媒。

復(fù)方羅布麻片Ⅰ為中西藥復(fù)方制劑。由于其價(jià)格便宜，療效可靠，在高血壓病人中得到廣泛應(yīng)用。通過(guò)對(duì)3批復(fù)方羅布麻片Ⅰ樣品的測(cè)定，發(fā)現(xiàn)其中所含金絲桃苷的含量存在較明顯的差異。由此可見，對(duì)復(fù)方羅布麻片Ⅰ中羅布麻葉進(jìn)行質(zhì)量控制，很有必要。

參考文獻(xiàn)

[1]許虎，劉訓(xùn)紅，王媚，等.羅布麻葉研究現(xiàn)狀及設(shè)想[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2012，26（3）：85-87.