李世龍　張寶　宋揚(yáng)　張德江　張海光　韓素桂　周秀艷

作者單位: 063000河北省唐山市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科(李世龍、宋揚(yáng)、張德江、張海光、韓素桂、周秀艷) ;河北省唐山市傳染病醫(yī)院檢驗(yàn)科(張寶)

腫瘤標(biāo)志物CEA、CA50、CA19-9、CA72-4、CA242及HSP60聯(lián)合檢測在大腸癌診斷中的應(yīng)用

李世龍張寶宋揚(yáng)張德江張海光韓素桂周秀艷

作者單位: 063000河北省唐山市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科(李世龍、宋揚(yáng)、張德江、張海光、韓素桂、周秀艷) ;河北省唐山市傳染病醫(yī)院檢驗(yàn)科(張寶)

【摘要】目的探討不同人群腫瘤標(biāo)志物CEA、CA50、CA19-9、CA72-4、CA242及HSP60含量變化情況，各項(xiàng)目檢測及聯(lián)合檢測在大腸癌診斷中的臨床意義。方法回顧性分析40例健康體檢者、39例腸道良性病變患者(包括結(jié)、直腸炎癥及息肉)、48例大腸癌患者(直腸癌25例、結(jié)腸癌23例)腫瘤標(biāo)記物的含量變化情況。結(jié)果48例大腸癌患者中CEA含量增高33例(68.75%)、CA50含量增高33例(68.75%)、CA19-9含量增高44例(91.67%)、CA724含量增高14例(29.17%)、CA242含量增高34例(70.83%)、HSP60含量增高35例(72.92%)，六項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測增高45例(93.75%)，大腸癌腫瘤標(biāo)志物含量均高于健康對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，良性病變組與健康對照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論CEA、CA50、CA19-9、CA724、CA242及HSP60六項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合對大腸癌進(jìn)行檢測，可進(jìn)一步提高檢出率，對大腸癌早期診斷及鑒別診斷有重要意義。

【關(guān)鍵詞】大腸癌;腫瘤標(biāo)志物;熱休克蛋白60;聯(lián)合檢測

項(xiàng)目來源:河北省科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展指導(dǎo)計(jì)劃項(xiàng)目(編號: 20142676)

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大腸癌(colorectal cancer)包括結(jié)腸癌(colon cancer)和直腸癌(colorectal carcinoma，CRC)，是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，居世界腫瘤病死率第三位［1］。隨著我國社會經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人民生活方式和飲食習(xí)慣的改變，大腸癌發(fā)病率呈逐年上升趨勢，已躍居成為我國常見惡性腫瘤的第五位，而且大腸癌患者低齡化趨勢日益顯著［2］。故大腸癌的早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療是提高大腸癌患者治療效果、改善預(yù)后、提高生存率的關(guān)鍵。大量研究結(jié)果顯示，各期大腸癌患者5年生存率分別為:Ⅰ期95%以上，Ⅱ級80%，Ⅲ級50%～60%［3］。令人遺憾的是，得到早期確診的大腸癌患者只占全部患者的5%，而60%～70%的大腸癌在被發(fā)現(xiàn)時(shí)已是Ⅱ級或晚期了，手術(shù)后的復(fù)發(fā)率高達(dá)30%。研究顯示，及早篩檢可以明顯降低結(jié)腸癌、直腸癌的發(fā)病率和病死率［4］。近年來，大腸癌腫瘤標(biāo)志物的檢測因其簡便、快速、高效、損害小等優(yōu)點(diǎn)被廣泛應(yīng)用于臨床診斷。本研究通過對大腸癌患者血清中的癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)、癌抗原50(cancer antigen 50，CA50)、糖類抗原19-9(carbohydrate antigen 19-9，CA19-9)、胃癌相關(guān)抗原72-4(gastric cancer associated antigen 72-4，CA72-4)、糖類抗原242(carbohydrate antigen 242，CA242)采用電化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行檢測，聯(lián)合酶聯(lián)免疫法測得熱休克蛋白60(heat shock protein 60，HSP60)的含量變化情況，探討各項(xiàng)檢測及六項(xiàng)聯(lián)合檢測對大腸癌早期診斷、鑒別診斷的價(jià)值。

1　資料與方法

1.1一般資料選取河北省唐山市人民醫(yī)院2012年7月至2014年5月健康體檢、門診及住院的腸道疾病患者127例。其中大腸癌確診患者48例(大腸癌組，其中直腸癌25例，結(jié)腸癌23例)，男24例，女24例;年齡39～78歲，平均年齡(60.9±9.0)歲。良性病變患者確診39例(大腸良性病變組，其中結(jié)腸炎15例，結(jié)、直腸息肉24例)，男20例，女19例;年齡35～77歲，平均年齡(55.0±10.0)歲。健康體檢者40例(健康對照組)，男28例，女12例;年齡46～70歲，平均年齡(57.2±5.12)歲。所有病例采用盲法隨機(jī)抽取，剔除其他病變干擾。

1.2檢測方法CEA、CA199、CA724測定使用德國COBAS-E601型羅氏發(fā)光免疫分析儀及配套試劑，正常參考范圍CEA 0～5.00 ng/ml、CA19-9 0～39.00 U/ml、CA72-4 0～6.90 U/ml; CA242、CA50測定使用深圳新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)有限公司Maglumi2000 plus全自動化學(xué)發(fā)光儀及配套試劑，正常參考范圍CA242 0.05～10.00 U/ml、CA50 0～25.00 U/ml，HSP60測定采用ELISA法，試劑盒(R＆D SYSTEMS，美國)，采用奧地利HT2全自動酶標(biāo)分析儀測得吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將測得樣本的OD值轉(zhuǎn)化為濃度值(pg/ml)，參考范圍0～400 pg/ml。本研究所有標(biāo)本留取及測定均嚴(yán)格按照操作手冊進(jìn)行。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以±s表示，均采用LSD-t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1血清腫瘤標(biāo)志物CEA、CA50、CA19-9、CA72-4、 CA242及HSP60的含量變化比較健康對照組、大腸良性病變組、大腸癌組血清中CEA、CA50、CA19-9、CA72-4、CA242及HSP60的含量變化，大腸癌組較健康對照組顯著性升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，大腸良性病變組較健康對照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表1。

表1　血清中CEA、CA50、CA19-9、CA72-4、CA242及HSP60的含量比較　±s

表1　血清中CEA、CA50、CA19-9、CA72-4、CA242及HSP60的含量比較　±s

注:與健康對照組比較，*P＜0.01

組別　CEA(ng/ml)　CA50(U/ml)　CA19-9(U/ml)　CA72-4(U/ml)　CA242(U/ml)　HSP60(pg/ml)健康對照組(n=40)　1.58±1.48　9.35±6.32　11.44±8.26　2.39±1.70　5.81±5.35　183.41±89.24大腸良性病變組(n=39)　2.51±2.66　8.69±9.48　11.16±8.66　4.86±9.67　7.25±7.13　194.92±104.71大腸癌組(n=48)　59.65±91.86*　107.46±173.08*　253.45±364.92*　12.28±24.04*　78.33±81.33*　549.47±425.91*

2.2血清中CEA、CA50、CA19-9、CA72-4、CA242和HSP60聯(lián)合檢測對大腸癌的診斷價(jià)值六種腫瘤標(biāo)記物CEA、CA50、CA19-9、CA72-4、CA242及HSP60的單項(xiàng)檢測敏感度從29.17%～91.67%，六項(xiàng)聯(lián)合檢測比單項(xiàng)檢測均有不同程度的提高，敏感度達(dá)93.75%，提示六項(xiàng)聯(lián)合檢測可顯著提高大腸癌患者的診斷效力。見表2。

表2　血清CEA、CA50、CA19-9、CA72-4、CA242和HSP60單獨(dú)和聯(lián)合檢測對大腸癌的診斷價(jià)值　例(%)

3　討論

CEA是最早被發(fā)現(xiàn)的大腸癌腫瘤標(biāo)志物，并且CEA在絕大多數(shù)惡性腫瘤中均有顯著升高。其特異性不強(qiáng)，靈敏度不高，單獨(dú)檢測對腫瘤早期診斷作用不明顯。CA19-9作為一種腫瘤相關(guān)抗原，有學(xué)者提取結(jié)腸癌培養(yǎng)細(xì)胞株SW1116制成抗消化道腫瘤的單抗［5］1116-NS19-9，CA19-9的診斷效力優(yōu)于其他各項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物，達(dá)到了91.67%; CA19-9亦有助于臨床療效的評價(jià)、預(yù)后評估和病情的隨訪監(jiān)測［6］，大腸癌術(shù)后血清CEA、CA19-9含量與結(jié)腸癌術(shù)后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移關(guān)系緊密，血清CEA、CA19-9聯(lián)合檢測可用來預(yù)測結(jié)腸癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移。CA242是一種唾液酸化的糖類抗原，它是一種存在于多器官惡性腫瘤中呈粘蛋白類型的糖蛋白CanAg，即不能與LewisA型抗原反應(yīng)，也不能與唾液酸化的半乳糖苷反應(yīng)，是近年來應(yīng)用于臨床的一種較新的腫瘤標(biāo)志物，主要應(yīng)用于胰腺癌和結(jié)腸癌的診斷。CA50是細(xì)胞惡變時(shí)，糖基化酶被激活，造成細(xì)胞表面糖基結(jié)構(gòu)改變而形成，幾乎總是和CA242一起表達(dá)，但兩者受不同的單克隆抗體識別。兩者敏感性分別為68.75%、70.83%，結(jié)果相近，印證了這一結(jié)論。CA72-4是粘蛋白樣的高分子量糖蛋白，分子量為220～400 kD，血清含量參考范圍＜6 U/ml，在各種消化道腫瘤、卵巢癌中均可異常升高，其大腸癌診斷敏感性最低為29.17%，其胃癌診斷敏感性較高，需做進(jìn)一步驗(yàn)證。HSP是一種應(yīng)激蛋白，廣泛存在于原核及真核細(xì)胞中，有維持細(xì)胞蛋白自身穩(wěn)定及結(jié)合受體調(diào)節(jié)細(xì)胞周期等許多功能，HSP60是HSP家族的重要成員之一。最近研究發(fā)現(xiàn)HSP與細(xì)胞的轉(zhuǎn)化和惡變關(guān)系密切，癌基因轉(zhuǎn)化的細(xì)胞和人類惡性腫瘤的細(xì)胞系中HSP呈過度表達(dá)，其敏感性也是除CA19-9外最高的72.92%、其臨床應(yīng)用尚未普及，需要進(jìn)一步臨床研究加以推廣，這也是本研究的目的所在。

本研究除HSP60外均采用了電化學(xué)發(fā)光法，檢測結(jié)果顯示，各項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物敏感性顯著高于其他文獻(xiàn)［7］所報(bào)道的利用酶聯(lián)免疫法所測得數(shù)據(jù)，而且也與文獻(xiàn)［7］報(bào)道有差異。有文獻(xiàn)報(bào)道CEA、CA19-9、CA242三種腫瘤標(biāo)志物由于與腫瘤細(xì)胞基因表達(dá)水平的差異而導(dǎo)致在臨床病理分期、大腸腫瘤對腸壁侵襲程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和治療的預(yù)后顯著不同［8］。另外也提示，由于腫瘤發(fā)現(xiàn)越晚，腫瘤組織壞死及凋亡后溶解釋放到患者血液中的腫瘤標(biāo)志性蛋白就越多，所以各單項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物在大腸癌腫瘤的早、中、晚期的不同時(shí)期而引起單一結(jié)腸癌臨床特征的不同。本研究和相關(guān)文獻(xiàn)［9］所報(bào)道的，雖然在方法上均采用了電化學(xué)發(fā)光法，但檢測的敏感度有顯著差異，原因有待進(jìn)一步探討。

本研究中所有大腸癌腫瘤標(biāo)志物均為非特異性的腫瘤相關(guān)抗原，其單獨(dú)檢測的敏感度和特異度均有一定的局限性，尤其是CA72-4的敏感度最低。結(jié)果顯示多項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物的聯(lián)合檢測可顯著提高大腸癌診斷的靈敏度。綜上所述，血清CEA、CA50、CA19-9、CA72-4、CA242和HSP60的聯(lián)合檢測優(yōu)于單獨(dú)項(xiàng)目檢測，顯著提高了大腸癌診斷的敏感性，特異性略有下降。CEA、CA50、CA19-9、CA724、CA242及HSP60六項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物對大腸癌進(jìn)行聯(lián)合診斷，具有優(yōu)異的診斷效力，是大腸癌發(fā)生、發(fā)展、分期及預(yù)測結(jié)腸癌術(shù)后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的重要指標(biāo)。應(yīng)用腫瘤標(biāo)志物的聯(lián)合檢測，為大腸癌患者的早期診斷、鑒別診斷、預(yù)后轉(zhuǎn)歸提供有效的幫助。

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(收稿日期:2014－10－15)

通訊作者:張寶，063000河北省唐山市傳染病醫(yī)院;

doi:10.3969/j.issn.1002－7386.2015.07.012

【文章編號】1002－7386(2015) 07－1004－03

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A

【中圖分類號】R 735.34