李興龍，李彥忠，2＊

（1.草地農業(yè)生態(tài)系統(tǒng)國家重點實驗室，蘭州大學草地農業(yè)科技學院，甘肅 蘭州730020；2.中國農業(yè)科學院草原研究所，內蒙古 呼和浩特010010）

植物土傳病害是發(fā)生在植物根部或莖部以土壤為媒介進行傳播病害的統(tǒng)稱［1］，包括根腐病、枯萎病、猝倒病、立枯病、疫病、黃萎病等病害種類。這類病害的病原物其生活史一部分或大部分存在于土壤中，在條件適宜時病原物萌發(fā)并侵染植物根部或莖部導致植物發(fā)生病害［2］。近年來由于化肥的大量施用，造成土壤肥力嚴重下降，土壤微生物區(qū)系紊亂，農作物土傳病害逐年加重給農業(yè)生產帶來了巨大的經濟損失，嚴重制約著我國農業(yè)生產發(fā)展［3］。應用化學藥劑防治植物土傳病害在農業(yè)生產中發(fā)揮著重要作用，然而化學藥劑的大量使用引起的藥物殘留、環(huán)境污染和抗藥性積累等問題已經不符合農業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展的要求［4－6］。生物防治因其低成本、環(huán)境友好和無藥物殘留等特點已成為當前國內外防治植物土傳病害的研究熱點［7－9］，將逐步取代傳統(tǒng)的化學防治手段，具有較為廣闊的應用前景。

生物防治是指利用一種或多種微生物來抑制病原菌生命活力和繁殖能力的方法。生物防治植物病害的常見機制有：改善土壤理化性質及營養(yǎng)狀況促進植物生長，提高植物健康水平，增強寄主植物的抗病能力；利用生防細菌、真菌及放線菌等拮抗微生物的寄生、抗生作用，及其與病原菌的營養(yǎng)物質、生態(tài)位的競爭效應抑制和消滅病原菌；誘導寄主植物產生對病原菌的系統(tǒng)抗性［10－12］。

1 改善土壤理化性質及營養(yǎng)狀況

土壤微生物區(qū)系對于保持土壤健康狀況和控制植物病害發(fā)生具有積極的作用［13］，通過增施生物有機肥來改善植物根際土壤中微生物的活動狀況可以有效地防治植物土傳病害的發(fā)生［14］。

O’Rourke等［15］對西澳多個地區(qū)的地三葉（Trifoliumsubterraneum）根部病害進行了研究，結果表明地三葉無論是主根還是側根，其病害的發(fā)生均與土壤中礦質養(yǎng)分的利用有密切關系，而且對于地三葉等豆科多年生牧草，其主根上發(fā)生的病害對牧草減產的影響往往遠大于側根。Yadessa等［16］對番茄青枯?。≒seudomonassolanncearum）生物防治的研究表明通過對表層土壤的改良可以有效防治病害的發(fā)生，提高番茄（Lycopersiconesculentum）的產量，1%青草堆肥、10%椰子殼泥炭土與5%～10%農家肥混合對病害防治的效果最佳。

Li和Dong［17］將石英、黑云母、鉀長石、斜長石、橄欖石和稻秸粉碎過篩后按其質量比為1∶3∶2∶1∶1∶2均勻混合制成土壤改良粉劑，改良劑對番茄青枯病具有較好的防治效果，2011和2012年溫室試驗的防效分別高達81.11%和74.36%，這種土壤改良劑與有機肥混施后病害的防效會更佳。Zhang等［18］研究發(fā)現(xiàn)，由兩種拮抗微生物作為主要成分而制成的生物有機肥能夠有效地防治黃瓜根腐?。‵usariumoxysporumf.sp.cucumerinum）的發(fā)生提高黃瓜（Cucumissativus）產量。相對于無拮抗微生物成分的傳統(tǒng)有機肥，這種生物有機肥使發(fā)病率下降了20.0%～37.5%，施用這種生物有機肥后土壤中微生物的種類和活力得到了明顯改善。

Wiggins和Kinkel［19］研究表明，通過增施綠肥和作物輪作的方式，可以增加土壤中生防微生物的種群數(shù)量，增強微生物的生命活動，這對苜蓿根腐?。‵usariumoxysporumf.sp.medicaginis）的防治具有積極的作用。Qiu等［20］研究發(fā)現(xiàn)，利用拮抗微生物制作的生物有機肥對尖孢鐮刀菌（Fusariumoxysporum）引起的黃瓜根腐病具有較好的防治效果，根腐病的發(fā)病率下降了83%。

2 生防微生物

利用生防微生物對植物土傳病害進行防治已經在許多植物上取得成功。生防微生物的寄生作用表現(xiàn)為拮抗寄生物與目標病原菌進行特異性識別，并誘導產生細胞壁裂解酶降解病原菌的細胞壁使寄生物能進入病原菌的菌絲內以發(fā)揮抑菌和滅殺作用［12］。生防微生物通過與病原菌爭奪營養(yǎng)物質和生態(tài)位以調節(jié)微生物的種群動態(tài)從而達到生物防治的目的，研究表明發(fā)生在葉片表面的營養(yǎng)競爭有利于降低病原菌孢子的萌發(fā)和侵染能力。在貧瘠土壤中生防微生物與病原菌對碳源的競爭較為普遍，生防微生物對土壤中病原菌孢子的萌發(fā)有較強的抑制作用［12］。植物根際促生菌（plant growth promoting rhizobacteria，簡稱PGPR）可通過各種代謝途徑來促進植物生長并抑制有害微生物，菌株單獨接種和混合接種均能促進植物生長和產量增加，但混合接種的效果更好［21］。

生防微生物的抗生作用表現(xiàn)為微生物產生一些揮發(fā)性物質、細胞裂解酶和次級代謝產物，這些物質能有效抑制和抵抗病原菌的活性［12］，一般分為兩類：一類抵抗細菌的生長，另一類抵抗真菌和放線菌的生長。

2.1 生防細菌

芽孢桿菌（Bacillus）和假單孢桿菌（Pseudomonas）兩種生防微生物，因其具有對動植物弱致病性和穩(wěn)定抗菌性的特點在植物土傳病害的防治中發(fā)揮著重要的作用。

2.1.1 芽孢桿菌 芽孢桿菌的菌株既能有效地防治病害的發(fā)生同時又能很好地促進植物的生長。Wakelin等［22］從土壤中分離得到的芽孢桿菌菌株對豌豆根腐絲囊霉（Aphanomyceseuteiches）有較強的室內抑菌和田間防治效果，其中菌株 MW27使豌豆（Pisumsativum）根中病原菌孢子的形成下降了83%。Idris等［23］從高粱（Sorghumbicolor）根際土壤中分離的芽孢桿菌菌株對由終極腐霉菌（Pythiumultimum）引起的根腐病防治效果較好，室內抑菌率和溫室防效分別在14.00%～47.36%和62.98%～86.23%之間。多粘類芽孢桿菌（Paenibacilluspolymyxa）和枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）是目前生產中應用最廣的兩類芽孢桿菌。

多粘類芽孢桿菌廣泛存在于植物根際土壤中，能抑制寄生在寄主植物根部的病原菌，最大程度地保護植物根部免受病害危害［24］，抑菌的作用機理是因為多粘類芽孢桿菌能產生蛋白酶、β－1，3－葡聚糖酶、纖維素酶、木聚糖酶、脂肪酶、淀粉酶和幾丁質酶等多種水解酶，這些酶在病害的防治中發(fā)揮著極其重要的作用［25－27］。Helbig［28］從成熟草莓（Fragariaananassa）果實中分離得到的多粘類芽孢桿菌菌株（18191）對灰葡萄孢菌（Botrytiscinerea）有極強的抑制作用，菌株菌液能顯著抑制灰葡萄孢菌芽管的生長和分生孢子在葉片上的分布，接種菌株8d草莓灰霉病的發(fā)病率下降了68%。國外學者經研究發(fā)現(xiàn)多粘類芽孢桿菌對由尖孢鐮刀菌、絲囊霉、終極腐霉和立枯絲核菌（Rhizoctoniasolani）具有較好的防治效果［24，29］。

枯草芽孢桿菌能有效防治植物土傳病害的發(fā)生，相關研究表明枯草芽孢桿菌對小麥全飾病菌（Gaeumannomycesgraminis）、核盤菌（Sclerotinia）、尖孢鐮刀菌、立枯絲核菌、葡萄頂枯病菌（Eutypalata）、鏈格孢菌（Alternariaburnsii）、灰葡萄孢菌、指狀青霉（Penicilliumdigitatum）和稻瘟菌（Magnaportheoryzae）等多種病原菌具有較強的抑制和滅殺作用［30］。Wharton等［31］用分離得到的枯草芽孢桿菌菌株對由疫霉引起的馬鈴薯晚疫?。≒hytophthorainfestans）進行了有效防治，2006和2007年，晚疫病的發(fā)病率分別降低了20.0%和14.2%；馬鈴薯（Solanumtuberosum）塊莖的腐爛率分別降低了14.9%和11.9%。Sowndhararajan等［32］從茶葉（Camellia sinensis）微生物區(qū)系中分離得到的蒼白桿菌（Ochrobactrumanthropi）菌株對茶皰狀疫病具有較好的防治效果，小區(qū)試驗中對茶樹噴霧接種120d后，菌株BMO－111對該病的防效達到了73.4%，較化學藥劑防效提高了8.7%。Chen等［33］從黃瓜根際土壤中分離得到的枯草芽孢桿菌菌株B579對尖孢鐮刀菌根腐病防效較佳，用菌液浸泡處理種子和菌液灌根處理幼苗，病害的防治效果分別達到了73.60%和50.88%。Abo－Elyousr和Mohamed［34］研究表明，枯草芽孢桿菌菌株對馬鈴薯鐮刀枯萎病在溫室和田間的防效分別達到了67.4%和42.4%。

2.1.2 假單孢桿菌 假單孢桿菌是一種普遍存在于土壤中的根際微生物，這種微生物不但能促進植物的生長，而且能促進改善植物的養(yǎng)分吸收狀況，增強植物對干旱、鹽漬、重金屬毒害和藥害等逆境脅迫的抗性［35－37］，因其旺盛的生根能力和豐富的代謝產物等特性被廣泛用于種子接種以防治病害的發(fā)生［38］。

Tran等［39］研究表明，假單胞桿菌的6個菌株150－A、269－A、199－B、267－C、SS－101和214－D對黑胡椒（Piper nigrum）由辣椒疫霉菌（Phytophthoracapsici）引起的根腐病有較強的防治效果。Malandraki等［40］研究發(fā)現(xiàn)熒光假單胞桿菌的兩個菌株對由尖孢鐮刀菌引起的茄子（Solanummelongena）枯萎病具有較好的防治效果。Yanes等［38］從苜蓿（Medicagosativa）根際分離得到的熒光假單孢桿菌（fluorescentPseudomonas）菌株對于幼苗猝倒病具有較好的防治效果，接種該菌后苜蓿的田間出苗率得到了顯著提高，其中4種菌株顯著促進了苜蓿植株的生長。Singh等［41］從毛喉鞘蕊花（Coleusforskohlii）根際土壤中分離得到的蒙氏假單孢桿菌（Pseudomonas monteilii）菌株CRC1對毛喉鞘蕊花枯萎病和根腐病的防治效果較佳，接種CRC1后，枯萎病和根腐病的田間發(fā)病率分別降低了52%和56%。Liu等［42］從番茄無土栽培的可再生基質中分離得到的假單胞桿菌的兩個菌株FC－2B和FC－8B對番茄鐮刀菌根腐病有較好的防治效果，接種兩菌株后根腐病的發(fā)病率分別下降了66%和70%。Akhtar和Siddiqui［43］對鷹嘴豆（Cicerarietinum）根腐病的研究結果表明，接種假惡臭假單孢桿菌（Pseudomonasputida）、產堿假單胞桿菌（Pseudomonasalcaligenes）和假單胞桿菌菌株Ps28對由根結線蟲引起的根腐病有較強的防治效果，根腐病的發(fā)病率分別降低了59%，48%和44%。

2.2 生防真菌

2.2.1 木霉菌（Trichoderma）由于化學農藥的殘留對土壤環(huán)境的破壞、對人體帶來的副作用及病原菌抗藥性的日益明顯，利用木霉菌作為生物殺菌劑的研究引起了世界各國的廣泛興趣［44］。木霉作為一類重要的生防真菌，廣泛存在于土壤、空氣和植物體表面等生態(tài)環(huán)境中，具有適應性強，存在范圍廣和廣譜、高效等優(yōu)點［21］。利用木霉菌和病原菌的交叉保護效應，可以有效防治病害的發(fā)生。國內外研究現(xiàn)已報道的有灰葡萄孢菌［45］、德巴利腐霉（Pythiumdebaryanum）［9］、尖孢鐮刀菌［9，46－48］、變灰尾孢菌（Cercosporacanescens）、假尾孢菌（Pseudocerco－spora）［49］、立枯絲核菌［49－50］、炭疽菌［50］、鐮刀菌（Fusarium）［50－51］、終極腐霉菌［52］。

古麗君等［44］研究結果表明深綠木霉（Trichodermaaureoviride）T2菌株的施用有效降低了草坪草根腐病的發(fā)生，同時還減少了土壤中其他真菌的數(shù)量，從而降低了其他真菌病害侵染草坪草的機率。目前在生產中應用最廣的兩種木霉是哈茨木霉（Trichodermaharzianum）和綠色木霉（Trichodermaviride）。Wharton等［31］用分離得到的哈茨木霉菌株對馬鈴薯晚疫病進行了防治研究，用菌液對馬鈴薯種子進行處理后，馬鈴薯晚疫病在2006和2007年的發(fā)病率分別降低了30.9%和45.8%，馬鈴薯塊莖的腐爛率分別下降了21.5%和38.4%。

Diaz等［52］從榆樹（Ulmuspumila）中分離得到的綠色木霉菌株對荷蘭榆樹病原菌的6個分離菌株均具有較好的抑制作用，對菌絲生長的抑制率在50%以上，對黑曲霉菌菌株（Aspergillusniger，GF35）、尖孢鐮刀菌菌株（Fusariumoxysporum，CECT2715）、青霉菌菌株（Penicillium，GF37）、匍枝根霉菌株（Rhizopusstolonifer，GF38）和大麗輪枝孢菌菌株（Verticilliumdahliae，CECT2884）的菌絲生長均具有極強的抑制作用。Perveen和Bokhari［48］從棗椰樹（Phoenixdactylifera）土壤中分離獲得的哈茨木霉菌株TvDPs、TDPs和T1s對尖孢鐮刀菌引起的根腐病的防治效果較好，3個菌株對尖孢鐮刀菌的抑制率分別為66.30%，57.40%和56.43%；綠色木霉菌株TvDPs、T1s和TDPs產生的揮發(fā)性代謝產物對尖孢鐮刀菌菌絲生長的抑制率分別為40.91%，25.97%和7.57%。

2.2.2 內生真菌 內生真菌（Endophytic bacteria）是一種寄生于寄主體內但在外部不表現(xiàn)任何病狀的體內寄生菌，因其強大的養(yǎng)分競爭能力和促進寄主植物生根繁殖的特性常被用于防治植物的土傳病害［53－58］。Ma等［56］從三七（Panaxnotoginseng）的根、莖、葉、葉柄和種子中分離得到1000份內生真菌的菌株，其中104份菌株對三七根腐病綜合致病體系——尖孢鐮刀菌、青枯病菌（Ralstonia）和北方根結線蟲（Meloidogynehapla）中的至少一種表現(xiàn)出抵抗活性。10種菌株對青枯病菌的抑菌圈直徑在5.20～20.06mm之間，13種菌株對尖孢鐮刀菌的抑菌率在34.95%～62.17%之間，28種菌株對北方根結線蟲的觸殺率在46.5%～100.0%之間；25種菌株對青枯病菌和尖孢鐮刀菌的抑菌率在44.75%～52.97%之間，10種菌株對青枯菌的抑菌圈直徑和對北方根結線蟲的觸殺率分別在5.74～18.33mm和38.23%～100.00%之間，8種菌株對尖孢鐮刀菌和北方根結線蟲的抑菌率和觸殺率分別在40.12%～58.45%和44.16%～100.00%之間。

Riyaz－Ul－Hassan等［58］從細葉野豌豆（Thelypterisangustifolia）中分離得到的內生真菌進行的研究表明，內生真菌產生的丙酮、2－戊酮、2，4－二甲基－3－己酮、1－丁醇等揮發(fā)油成分對棕櫚疫霉（Phytophthorapalmivora）、立枯絲核菌、核盤菌（Sclerotiniasclerotiorum）和樟疫霉菌（Phytophthoracinnamomi）有較好的防治效果。

2.2.3 叢枝菌根（Arbuscular Mycorrhiza，AM）Singh等［41］研究結果表明，接種 AM 真菌球囊霉菌（Gloms fasciculatum）和假單胞桿菌的毛喉鞘蕊花植株對枯萎病和根腐病有較強的抗性，兩種病在田間的發(fā)病率分別降低了68%和63%。Wang等［59］得到的2個AM真菌菌株Glomusmosseae和Glomusversiforme對黃瓜鐮刀菌枯萎病防治效果較佳，接種菌株后，病情指數(shù)分別下降了11.7%和26.7%。Martinez－Medina等［60］研究表明，AM 真菌的4個菌株Glomusintraradices、Glomusmosseae、Glomusclaroideum和Glomusconstrictum對西瓜（Citrulluslanatus）鐮刀枯萎病有較強的防治效果。

2.2.4 寄生真菌和其他真菌 黃藍狀菌（Talaromycesflavus）是一種在土壤中廣泛存在的寄生真菌，它代謝產生的有機物質對于控制植物病害的發(fā)生具有重要作用，Naraghi等［61］研究證實了黃藍狀菌對于由大麗輪枝孢引起的棉花（Gossypiumspp.）和馬鈴薯枯萎病的防治具有較好的效果。Zhu等［62］從308份輪枝菌（Verticillium）材料中分離得到的兩個菌株（CVd－WHw，CVn－WHg）對由大麗輪枝孢引起的棉花黃萎病有較好的防治效果，研究表明相較于棉花幼苗單獨接種大麗輪枝菌，幼苗接種兩分離菌株18d后再接種病原菌，黃萎病的發(fā)病率分別降低了95.0%和94.1%，病情指數(shù)分別降低了97.2%和96.6%；幼苗接種兩分離菌株25d后再接種病原菌，其發(fā)病率均降低了77.9%，病情指數(shù)分別降低了86.2%和85.0%。

2.3 生防放線菌

Castano等［63］分離得到的鏈霉素菌（Streptomyces）菌株A19對馬鈴薯鐮刀菌枯萎病的防治和產量的提高具有較好的效果。El－Tarabily等［57，64］研究結果表明，黃瓜根中的放線菌菌株Actinoplanescampanulatus，Mi－cromonosporachalcea和Streptomycesspiralis對由瓜果腐霉（Pythiumaphanidermatum）引起的黃瓜枯萎病在溫室和田間均具有較好的防治效果。Xue等［65］分離得到的鏈霉素菌的4個菌株ZY－153、B－49、X－4和Z－13對棉花大麗輪枝孢菌枯萎病在溫室的防治效果在18.7%～65.8%之間，其中用菌液處理種子后的防效為13.5%～48.0%，菌液接種幼苗后的防效為17.8%～51.4%。Minuto等［66］從水蘚（Sphagnum）泥炭中分離得到的鏈霉（Streptomycesgriseoviridis）菌株 K61對馬鈴薯由殼孢屬菌（Pyrenochaetalycopersici）引起的軟腐病、尖孢鐮刀菌根腐病和大麗輪枝孢菌枯萎病防治效果較佳。Gopalakrishnan等［67］從25種不同的草本植物堆肥中分離得到的5個對尖孢鐮刀菌抑制作用最強的放線菌菌株 CAI－24、CAI－127、CAI－121、KAI－32 和 KAI－90，5個菌株在溫室條件下使根腐病的發(fā)病率分別下降了76%，72%，67%，56%和45%；在田間使鐮刀菌枯萎病的發(fā)病率下降了4%～19%。

3 誘導寄主植物產生對病原菌的系統(tǒng)抗性

誘導系統(tǒng)抗病性（induced systemic resistance，ISR）是指經某種因子適度刺激后提高寄主作物抗病能力的現(xiàn)象，這種現(xiàn)象目前已經在細胞水平和分子水平上得到了廣泛而深入的研究［12］。研究結果表明，寄主在識別外界刺激因子后迅速在體內進行相關信號的傳導釋放和相關基因的轉錄翻譯，進而合成一些抗病分子比如植物抗毒素、病程相關蛋白和細胞壁木質素，細胞壁的加厚和木質化減緩了病原菌在寄主植物體內的擴展速度，同時合成的這些抗病分子能誘導寄主產生過敏性反應殺死被感染的細胞，防治病原菌的進一步擴展［12］。

大量研究表明，對寄主植物的根部或莖稈接種非致病菌能誘導植物對病原菌產生系統(tǒng)抗性，有效減緩了病害的發(fā)生和擴展。Fuchs等［68］對番茄病害的生防研究發(fā)現(xiàn)非致病菌菌株Fo47能誘導番茄對根腐病產生系統(tǒng)抗性，同時還增強了幾丁質酶、β－1，3－葡聚糖酶和β－1，4－葡聚糖酶的活性，這幾種酶能促進病原菌細胞壁的裂解提高病害防治的效果。Phi等［69］研究發(fā)現(xiàn)從辣椒（Capsicumannuum）根際土壤中分離獲得多粘類芽孢桿菌菌株KNUC265能誘導辣椒產生對歐文氏菌引起的辣椒軟腐病的系統(tǒng)抗性。Weller等［70］研究發(fā)現(xiàn)，熒光假單孢桿菌的4個菌株Pf－5、Q2－87、Q8r1－96和 HT5－1能誘導擬南芥（Arabidopsisthaliana）產生對番茄丁香假單胞桿菌（Pseudomonassyringae）的系統(tǒng)抗性。熒光假單孢菌能誘導合成抗生素2，4－二乙?；g苯三酚（2，4－DAPG），2，4－DAPG對于多種作物的根莖腐病、枯萎病和猝倒病等土傳病害具有較強的防治效果。

然而Olivain等［71］對亞麻（Linumusitatissimum）研究表明，非致病菌在誘導寄主作物對病原菌產生系統(tǒng)抗性的同時寄主細胞會發(fā)生一些生理性反應，比如pH、過氧化氫和鈣離子濃度的增加以及細胞的程序性死亡。同時，嚴格地說ISR與生防微生物的作用機理并不是完全的相互獨立，而是相互促進、相互依存，所以ISR或許只能作為生防微生物制劑防治病害的一個輔助手段。

4 其他生物防治方法

堆肥茶（compost tea）是一種利用回收污水充分浸泡和通氣的堆肥，目前應用較廣的有機肥料，將這種有機肥料噴施于植物的葉片表面，可以有效地防治植物葉部病害的發(fā)生。目前，這種方法已經在防治蘋果（Malus pumila）瘡痂病，玫瑰（Rosarugosa）和馬鈴薯的白粉病，草莓和馬鈴薯的灰霉病，黃瓜幼苗猝倒病，番茄細菌性斑點病，馬鈴薯晚疫病，洋蔥（Alliumcepa）軟腐病，辣椒和黃瓜的炭疽病，西瓜白粉病等方面取得重大突破［72］。Pane等［73］研究表明，堆肥茶對馬鈴薯的灰霉孢菌、鏈格孢菌和殼孢屬菌（Pyrenochaetalycopersici）有較好的防治效果。

Kotan等［74］對寄生植物槲寄生（Viscumcoloratum）葉浸出液防治病原菌的研究結果表明，槲寄生具有潛在的生物防治病害的價值，對48種真菌和193種細菌都有很好的防治作用。Klein等［47］研究發(fā)現(xiàn)作物殘茬用作有機肥結合土壤日曬可以有效防治黃瓜鐮刀根腐病的發(fā)生和為害，研究結果表明芝麻菜（Diplotaxistenuifolia）、狹葉青蒿（Artemisiadracunculus）、鼠尾草（Salviaofficinalis）和甘藍（Brassicaoleracea）作物殘茬對病害的防治效果較佳，病害的田間發(fā)病率下降了20%～80%。目前還有利用土壤熏蒸、作物輪作和耕地休耕的防治對土傳根腐病害進行生物防治，而且取得了巨大進展［12］。

5 存在問題及研究展望

雖然國內外學者對于植物土傳病害的生物防治研究已經取得了巨大進展，然而土傳病害的生物防治仍存在諸多問題，具體表現(xiàn)在：1）生防微生物資源雖然豐富但能用于作物生產的制劑或產品的種類和數(shù)量有限，無法滿足實際生產的需要；2）缺乏理想的、針對不同靶標的優(yōu)良菌株，有限的菌株難以防治種類繁多的病原物引致的病害；3）許多生防產品的作用機理尚不明確，導致室內抑菌試驗和田間試驗的防治效果差異較大；4）氣候、土壤等條件將在很大程度上影響病害的流行和生防制劑的作用效果；5）生防制劑施用時間及作用部位的選擇評價體系不夠完善，導致防治效果不穩(wěn)定；6）誘導寄主植物產生對病原物的系統(tǒng)抗性受植物種類甚至品種、植物生理階段及外界環(huán)境條件的影響較大。

針對上述存在的問題，在病害生物防治的過程中應主要從以下幾個方面著手：

1）為確保生防制劑的作用效果，須明確制劑的類型、作用機理、施用時間和最佳施用濃度；

2）由于氣候等因素的限制，生防制劑在寄主體內發(fā)揮作用進行擴展的距離是有限的，因此需要選擇在適宜的時間將制劑作用于病原物在寄主植物的侵染點；

3）為確保生防制劑防治效果的可靠性，須致力于開展田間防效的評價和研究。生防微生物與病原物爭奪生態(tài)位和營養(yǎng)物質是生防的主要方式，因此為了確保生防效果，生防微生物的用量要求盡可能大，尤其是在病原物數(shù)量難以確定的田間條件下；

4）為了更好地發(fā)揮生防微生物的作用效果，可以考慮將多種作用機理不同的生防制劑進行混合施用，這樣可以防治同一寄主植物上發(fā)生的多種不同病害或是不同寄主植物上發(fā)生的同一種病害；

5）利用自然源物質促進寄主植物產生對病原物的防御反應，這類物質包括印楝油等植物提取物，海帶多糖等藻類提取物，薄荷醇、香葉醇等香精油及過敏致病性蛋白等微生物次級代謝產物。然而這些物質的生防效果同樣受到寄主植物種類或是品種、寄主植物生理階段、病原物及氣候等因素的限制；

6）結合病害預防、作物輪作、土地休耕、土壤曝曬、土壤熏蒸、增施有機肥、土壤改良等農藝措施的改良進行生防。

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