周靜+++++周本宏++凃杰++++++張嬋++++++羅毅++++++劉剛

[摘要] 目的 研究石榴皮提取物中鞣花酸和沒(méi)食子酸在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特征。 方法 健康大鼠灌胃給予石榴皮提取物，收集不同時(shí)間的含藥血漿，采用高效液相色譜法檢測(cè)大鼠血漿中鞣花酸和沒(méi)食子酸兩種成分的血藥濃度，運(yùn)用WinNonlin 5.2藥動(dòng)學(xué)軟件擬合房室模型，計(jì)算其藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。 結(jié)果 鞣花酸和沒(méi)食子酸在大鼠體內(nèi)均呈二室模型分布，鞣花酸和沒(méi)食子酸的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)分別為：半衰期速率常數(shù)T1/2（ka）=0.150、0.779 h，分布半衰期T1/2α=0.570、0.856 h，消除半衰期T1/2β=6.73、5.59 h，達(dá)峰時(shí)間Tmax=0.50、1.38 h，最大血藥濃度Cmax=7.29、7.15 μg/mL，分布相速率常數(shù)α=1.21、0.81 h-1，消除相速率常數(shù)β=0.103、0.124 h-1，吸收速率常數(shù)Ka= 0.462、0.889 h-1。 結(jié)論 鞣花酸和沒(méi)食子酸藥動(dòng)學(xué)特征為口服吸收、分布快、達(dá)峰時(shí)間短，石榴皮中沒(méi)食子酸的吸收大于鞣花酸的吸收。

[關(guān)鍵詞] 石榴皮提取物；鞣花酸；沒(méi)食子酸；藥代動(dòng)力學(xué)；血藥濃度

[中圖分類號(hào)] R285 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2015）01（c）-0019-05

石榴（Punica granatum L.），又叫安石榴，屬于石榴科石榴屬的一種落葉果樹(shù)，廣泛栽培于熱帶和亞熱帶地區(qū)[1]。中醫(yī)認(rèn)為石榴皮在澀腸、止血、殺蟲(chóng)方面具有顯著的功效，故作為一種傳統(tǒng)的中藥材一直收載于《中國(guó)藥典》中。《中國(guó)藥典》2010年版[2]規(guī)定石榴皮中鞣質(zhì)含量不得低于10%，這說(shuō)明鞣質(zhì)類成分是衡量石榴皮質(zhì)量好壞的重要指標(biāo)，而總鞣質(zhì)中的主要活性成分就是鞣花酸和沒(méi)食子酸[3]。本實(shí)驗(yàn)室在前期的研究中已經(jīng)證實(shí)石榴皮中總鞣質(zhì)具有抗菌[4]、抗病毒、抗氧化[5]、抑精抗生育活性[6]、改善慢性腎功能等作用[7]?，F(xiàn)代研究證實(shí)其除了具有強(qiáng)大的抗氧化、抗菌、抗病毒作用外，在體外還可抑制癌細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[8]。目前，還尚未有同時(shí)對(duì)鞣花酸和沒(méi)食子酸的藥代動(dòng)力學(xué)研究的報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用口服方式給予大鼠石榴皮提取物，并運(yùn)用高效液相色譜法測(cè)定鞣花酸和沒(méi)食子酸在大鼠體內(nèi)的血藥濃度，從而研究這兩種成分在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特征，為進(jìn)一步研究石榴皮鞣質(zhì)成分提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀（Aligent 1100，US）；超聲波清洗儀（SK5200H，上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（W2-100S，上海申生科技有限公司）；冷凍干燥機(jī)（ALPHAI-4/RZ-2，Martin Christ，GER）；冷凍離心機(jī)（H-1600RW，上海利鑫堅(jiān)離心機(jī)有限公司）。

1.2 試劑與藥品

石榴皮采購(gòu)于武漢市藥材公司，并由武漢大學(xué)藥學(xué)院張洪教授鑒定為石榴科石榴屬石榴（Punica granatum L.）的干燥果皮；大孔吸附樹(shù)脂（HPD，滄州寶恩化工有限公司）；鞣花酸對(duì)照品（批號(hào)：A0714，成都曼斯特生物科技有限公司）；沒(méi)食子酸對(duì)照品（批號(hào)：110831-201204，中國(guó)藥品生物制品檢定所），干酪素（上海伯奧生物科技公司）；肝素鈉（天津市生物化學(xué)制劑廠）；水是實(shí)驗(yàn)室自制的超純水；甲醇、乙腈均為色譜純，其余試劑均為分析純。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康雌性SD大鼠10只，體重180～220 g，購(gòu)于武漢大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)為SCXK（鄂）2008-0005。將大鼠采取自然光照和自由進(jìn)食進(jìn)水，飼養(yǎng)在武漢大學(xué)人民醫(yī)院SPF級(jí)動(dòng)物房中，適應(yīng)1周后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。

2方法

2.1 石榴皮提取物制備

2.1.1 石榴皮鞣質(zhì)粗提物的制備[1]

將粉碎后的一定量的干燥石榴皮置于1000 mL蒸餾燒瓶中，按1∶10的料液比，用70%丙酮溶液作為溶劑在50℃下回流提取兩次，每次30 min。然后合并兩次提取液，趁熱過(guò)濾，再于50℃下減壓濃縮并回收溶劑，濃縮液冷凍干燥后得粗提物[9]，并保存于4℃冰箱中供實(shí)驗(yàn)用。

2.1.2 磷鉬鎢酸-干酪素比色法測(cè)定鞣質(zhì)含量[2]

2.1.2.1 對(duì)照品溶液的配制

將精密稱取的50 mg沒(méi)食子酸對(duì)照品置于100 mL棕色容量瓶中，加水溶解，稀釋至相應(yīng)刻度并搖勻。再精密量取上述溶液5 mL，置于50 mL棕色容量瓶中，用水稀釋至刻度并搖勻，即可得到0.05 mg/mL的沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液。

2.1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

分別對(duì)6個(gè)25 mL棕色容量瓶進(jìn)行編號(hào)，依次向編號(hào)的容量瓶中加入沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL。然后各加入磷鉬鎢酸試液1 mL，再分別加水12、11、10、9、8、7 mL，最后分別用29%碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30 min后，于760 nm波長(zhǎng)處用紫外分光光度法測(cè)定吸光度。以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線為：Y=110.95X+0.0194，r=0.9998。結(jié)果見(jiàn)圖1。

2.1.2.3 鞣質(zhì)含量測(cè)定

2.1.2.3.1 總酚 精密吸取樣品溶液2 mL，置于25 mL棕色量瓶中，按照“2.1.2.2”項(xiàng)下的方法測(cè)定吸光度，并從標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀出待測(cè)樣品溶液中相應(yīng)沒(méi)食子酸的含量（mg），計(jì)算即可得到總酚的量。

2.1.2.3.2 不被吸附的多酚 先精密量取25 mL的樣品溶液，然后加至盛有0.6 g干酪素的100 mL具塞錐形瓶中，密塞后置于30℃水浴中保溫1 h，攪拌，取出后放冷，搖勻并過(guò)濾，棄去初濾液。精密量取續(xù)濾液2 mL，置25 mL棕色量瓶中，“2.1.2.2”項(xiàng)下的方法測(cè)定相應(yīng)的吸光度，并從標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀出待測(cè)供試品溶液中沒(méi)食子酸的含量（mg），計(jì)算即可。鞣質(zhì)的含量按下式計(jì)算得到：鞣質(zhì)的含量=總酚的含量-不被吸附的多酚量。